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张赫: 作品数：10 被引量：30H指数：3; 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省自然科学基金吉林省科技发展计划基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗猪免疫试验效果评价被引量：2: 2016年; 目的评价欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18猪体免疫效果。方法用鉴定正确的重组腺病毒进行猪免疫试验,通过淋巴细胞亚群检测、细胞因子检测和免疫组化检测分析其免疫效果。结果猪淋巴细胞亚群检测显示重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18刺激CD4+和CD8+表达量在21d、35d、49d分别为PBS组的1.53、1.84、1.90倍和1.41、1.76、1.53倍,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18免疫猪血清IL-4和IFN-γ水平在14d时的表达量分别是PBS组的1.45和1.46倍(P<0.05),而在35d时分别是PBS组的1.81和1.79倍(P<0.05)。免疫组化检测免疫猪肺、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴组织病毒量相对于野毒组和PBS组显著减少。结论重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18疫苗,具有良好的免疫原性,能提高猪细胞免疫和体液免疫水平。; 解长占曹亮孙文超张萍韩继成郭海宁肖朋朋温树波崔卓栋南福龙马海彬赵冠宇张赫庄忻雨张金勇鲁会军金宁一; 关键词：重组腺病毒疫苗

应用SOE PCR方法构建新城疫病毒基因起始片段的研究被引量：1: 2017年; 目的以猪源新城疫病毒JL02/2000株为模板,构建新城疫病毒反向遗传研究所需的基因起始片段。方法将NDV起始片段(ND1,226-4 916bp)设计拆分为ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4的4个约1.2kb的小片段,分别PCR扩增各片段,后采用SOE PCR技术将ND1-1、ND1-2拼接成中间片段ND1-1-2,将ND1-3、ND1-4拼接为ND1-3-4,再经第二次SOE-PCR整合拼接ND1-1-2和ND1-3-4片段,完成NDV起始片段ND1的构建,并连接到pCI载体上,构建pCIND1质粒,最后经酶切PCI-ND1质粒并送测序鉴定目的片段是否构建正确并成功连接到pCI载体上。结果经PCR扩增得到ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4共4个分别约1 200bp大小的片段,经第一轮SOE-PCR得到ND1-1-2和ND1-3-4两个2 200bp左右的片段,第二轮SOE-PCR得到4 900bp左右的ND1片段。连接产物PCI-ND1质粒经酶切和测序鉴定片段大小和序列与预期相符。结论成功构建了新城疫病毒基因起始片段(226-4 916bp),为构建新城疫病毒全长基因奠定了基础。; 南福龙陈兴张赫解长占崔卓栋张萍张金勇庄忻宇鲁会军金宁一; 关键词：新城疫病毒 PCR 基因克隆

2015年广西地区PRRSV流行株ORF5和Nsp2基因分子流行病学调查被引量：3: 2017年; 目的对广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和ORF5基因进行分子流行病学调查。方法采集广西地区猪病料样品45份,PCR扩增PRRSV毒株Nsp2和ORF5基因并进行遗传进化分析。结果 RT-PCR检测PRRSV 7份猪病料阳性。7株病毒与VR-2332和LV株的同源性分别为83.5%88.7%和62.1%64.8%。遗传进化分析显示,7株病毒分属于两个亚群,3株属于亚群Ⅳ,4株属于亚群Ⅵ。Nsp2序列分析显示,6株病毒有高致病性PRRSV 1+29aa氨基酸的缺失特征,其中GXBB11-2015在此基础上出现了新的20个氨基酸缺失,缺失碱基数为150个碱基。结论高致病性PRRSV已成为广西地区优势毒株,病毒Nsp2基因新的碱基缺失是PRRSV变异的又一证据。; 孙文超张萍解长占张金勇曹亮南福龙韩继成温树波肖朋朋张赫庄忻雨靖杰崔卓栋柴丹鲁会军金宁一; 关键词：ORF5基因

表达欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的重组新城疫病毒候选疫苗的构建及拯救: <正>引言猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是严重危害全球养猪业经济发展的病毒性疾病之一。目前,疫苗免疫仍是该病的主要防控措施。由于...; 张赫南福龙田明尧鲁会军步志高金宁一; 文献传递

H3亚型流感重组腺病毒的纯化工艺研究被引量：2: 2016年; 目的为了探索经济、高效的腺病毒的纯化工艺,采用阴离子交换层析和分子筛层析两步法对H3亚型流感重组腺病毒pacAd-H3-EHA-H1HA1new进行纯化,并评价纯化效果。方法利用7L生物反应器培养HEK-293细胞,用于对H3型流感重组腺病毒进行扩增;利用冻融的方法使病毒从细胞中释放,通过阴离子交换层析和分子筛层析法纯化病毒,用分光光度计检测纯化样品的纯度,并测定病毒的滴度和回收率。结果纯化后的样品经PCR鉴定正确,纯化前后的病毒滴度分别为5.6×10~9 TCID_(50)/ml和1.1×10^(10) TCID_(50)/ml,纯化后样品纯度(A260/A280值)分别为2.01和1.26,阴离子交换层析纯化的回收率为31.5%,分子筛层析纯化的回收率为81.4%,总回收率为25.6%。结论利用阴离子交换层析和分子筛层析两步法纯化H3亚型流感重组腺病毒的回收率和滴度高,该方法可用于重组腺病毒的纯化。; 张萍郭海宁解长占韩继成孙文超崔卓栋南福龙马海彬温树波肖朋朋庄忻雨张赫张金勇赵冠宇鲁会军金宁一; 关键词：重组腺病毒疫苗纯化

猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：9: 2017年; 为建立猪细小病毒7型(PPV7)的快速定量检测方法,本研究根据PPV7(KU563733.1)基因序列设计一对特异性引物,扩增155 bp的PPV7衣壳蛋白基因,构建重组质粒pClon007-PPV7,以其作为标准品建立了PPV7的SYBR GteenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法在5.00×10~9拷贝/μL^5.00×10~3拷贝/μL范围内呈良好的线性关系。该方法对猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒、乙脑病毒、口蹄疫病毒常见病原的检测均无特异性扩增,仅PPV7出现特异性扩增;该方法检测灵敏度可达5.00×10~1拷贝/μL;批内和批间变异系数均低于1%,具有较高的重复性和稳定性。对临床样品的检测结果显示,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为71.88%,比普通PCR法检测的阳性率提高了约4.55%。该研究方法的建立为PPV7提供了一种新的快速定量检测技术。; 孙文超韩继成解长占张萍张金勇曹亮崔卓栋靖杰温树波肖朋朋南福龙张赫庄忻雨鲁会军金宁一; 关键词：荧光定量PCR

猪细小病毒6型SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立被引量：12: 2018年; 采用PCR方法扩增PPV6保守区域基因252bp,将其克隆到pClon007载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒。以质粒模板建立PPV6的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果表明,重组质粒特异性好;建立的real-time PCR方法Ct值与标准品模板在8.80×10^9-8.80×10^1 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.993,斜率为-4.320。该方法检测灵敏度可达8.80×10^1 copies/μL。该方法对JEV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV等猪常见病原检测均无特异性扩增;对临床样品的检测结果表明,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为40.63%。本试验成功建立了PPV6SYBR Green I real-time PCR检测方法,可实现对PPV6快速灵敏的诊断。; 孙文超刘立明赵翠青汪伟赵冠宇曹亮曹亮张赫韩继成韩继成金宁一; 关键词：SYBR I 荧光定量PCR

金刚烷胺抑制乙脑病毒感染引起小胶质细胞炎症反应的作用被引量：3: 2018年; 目前金刚烷胺被（areantadine，Ama）用作一种抗病毒和抗帕金森药物，可抑制小胶质细胞的炎症激活。为验证金刚烷胺是否会抑制乙脑病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）感染小胶质细胞所引起的炎症反应．本试验利用Ama处理小鼠小胶质瘤BV-2细胞系后使用JEV感染细胞，测定细胞中炎性因子的表达，并与单独使用JEV处理BV-2细胞组进行对比分析。结果表明，Ama可以显著降低JEV感染引起的5种炎性因子的表达，MCP-1（62.17％）、IL-6（62．07％）、TNF-α（59．67％）、IL-18（63．16％）以及IL-10（34．24％）。本试验为流行性乙型脑炎的临床治疗提供了理论依据。; 庄忻雨赵翠青赵海洋肖朋朋温树波孙文超解长占张萍张赫南福龙鲁会军金宁一; 关键词：乙脑病毒小胶质细胞金刚烷胺炎性因子

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的新城疫病毒感染性克隆的构建及病毒拯救: 2018年; 应用反向遗传技术对新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）LaSota株感染性克隆PBRN—FL质粒进行操作，构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）ORF5基因的重组质粒LaSota-ORF5并进行病毒拯救及鉴定。依据GenBank所发表的欧洲型PRRSVLV株ORF5序列，设计引物扩增0RF5片段，通过PBRN—FL质粒上P和M基因间的PmeI酶切住点插入目的片段，构建重组质粒LaSota—ORF5。采用磷酸钙转染法将重组质粒和PCI—NP、PCI-P、PCI—L等3种辅助质粒共转染BSR—T7／5／细胞拯救病毒并对其分别进行RT-PCR、间接免疫荧光（IFA）和Western blot（WB）试验鉴定。结果显示：拯救病毒的RT-PCR产物测序结果正确，IFA出现绿色荧光，WB试验条带大小符合预期，证明GP5蛋白有效表达。结果表明：成功构建并拯救得到重组病毒rLaSota-GP5，为制备表达PRRSVGP5蛋白的重组NDV疫苗奠定基础。; 张赫南福龙鲁会军解长占张萍张金勇庄忻雨田明尧步志高金宁一; 关键词：新城疫病毒 LASOTA GP5蛋白病毒拯救

替换La Sota株V蛋白基因的重组新城疫病毒拯救: <正>引言新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的P基因通过RNA编辑（RNA editing）机制,转录时在编辑位点插入1到2个G产生V基因（1个G）和W基因（2个G）mRNA[1]。V蛋...; 南福龙张赫鲁会军金宁一; 文献传递

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