张萍
- 作品数：24 被引量：60H指数：5
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 欧洲型PRRSV重组痘苗病毒候选疫苗猪体免疫效果研究被引量：3
- 2015年
- 目的通过猪体免疫试验,评价欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗的免疫效果。方法分别用重组痘苗病毒rVV-EU-ORF3-ORF5和灭活rVV-EU-ORF3-ORF5进行猪体免疫试验,通过检测猪血清特异性抗体中和抗体检测及T淋巴细胞增殖试验分析免疫效果。实验设E3L-VTT野毒免疫组和PBS组作对照。结果免疫后35d,欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗免疫组和rVV-EU-ORF3-ORF5免疫组GP3、GP5特异抗体水平均达峰值（A值0.51~0.56）,两组间比较差异无统计学意义（tGP3=1.805,tGP5=0.7998,P〉0.05）,但均高于E3L-VTT野毒免疫组（A值0.33~0.43）,差异显著（tGP3=5.518,tGP5=3.346,P〈0.01）;猪血清中和抗体重组痘苗病毒灭活疫苗组与重组痘苗病毒疫苗组均与免疫后35d达峰值水平（分别为16.38和18.88）,且两组间比较差异无统计学意义（t=0.7005,P〉0.05）;T淋巴细胞增殖试验的SI值两疫苗组差异无统计学意义（t=0.2536,P〉0.05）,但均高于E3L-VTT野毒免疫组（t值分比为6.414和7.222,P〈0.01）。结论欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗能诱导猪体产生体液和细胞免疫应答,可为欧洲型PRRSV的新型疫苗的研制提供参考。
- 韩继成靖杰肖朋朋曹亮李一权郭海宁马海彬张萍鲁会军金宁一
- 关键词：免疫研究
- 欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗制备及动物模型替代方法建立
- <正>引言二十世纪90年代,我国首次报道了猪繁殖与呼吸综合征（Procine reproductive and respirator syndrome,PRRS）[1],并且确定其病原为美洲型PRRSV,直到现在该病仍然...
- 解长占孙文超张萍鲁会军金宁一
- 文献传递
- 欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗猪免疫试验效果评价
- 引言猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由PRRSV感染引起的母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病,属传染性病毒病,并且具有高发病率和高病死率等特点。尤其在我国各个省份陆续出现欧洲型蓝耳病。本研究通过评价欧洲型PRRSV重组腺病毒...
- 解长占曹亮孙文超张萍韩继成崔卓栋南福龙赵冠宇鲁会军金宁一
- 文献传递
- 牛支原体P48蛋白及其片段的表达、纯化及间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2019年
- 为了建立一种快速、特异、敏感的检测牛支原体血清抗体的方法,对牛支原体(M.bovis)P48膜蛋白基因进行密码子优化,并在编码基因两端加入酶切位点。利用生物学软件对P48蛋白进行抗原位点和亲水性分析,选择P48蛋白的主要抗原表位区和亲水性区域以及全基因进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定及反应原性分析。结果显示,表达的P48全蛋白、28～185、221～455位氨基酸区域蛋白均能与牛支原体阳性血清发生特异性反应,P48(221～455)效果最好。采用Ni-NTA对目的蛋白进行纯化,并基于纯化的P48(221～455)蛋白建立了一种间接ELISA检测方法。该方法组内及组间变异系数均小于7%,重复性较好。临床样本检测结果表明,建立的检测方法符合率较高。
- 马海彬刘云霞刘云霞韩继成孙文超解长占孙文超肖朋朋张萍尹逊哲肖朋朋金宁一
- 关键词：牛支原体原核表达蛋白纯化间接ELISA
- 欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗猪免疫试验效果评价被引量：2
- 2016年
- 目的评价欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18猪体免疫效果。方法用鉴定正确的重组腺病毒进行猪免疫试验,通过淋巴细胞亚群检测、细胞因子检测和免疫组化检测分析其免疫效果。结果猪淋巴细胞亚群检测显示重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18刺激CD4+和CD8+表达量在21d、35d、49d分别为PBS组的1.53、1.84、1.90倍和1.41、1.76、1.53倍,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18免疫猪血清IL-4和IFN-γ水平在14d时的表达量分别是PBS组的1.45和1.46倍(P<0.05),而在35d时分别是PBS组的1.81和1.79倍(P<0.05)。免疫组化检测免疫猪肺、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴组织病毒量相对于野毒组和PBS组显著减少。结论重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18疫苗,具有良好的免疫原性,能提高猪细胞免疫和体液免疫水平。
- 解长占曹亮孙文超张萍韩继成郭海宁肖朋朋温树波崔卓栋南福龙马海彬赵冠宇张赫庄忻雨张金勇鲁会军金宁一
- 关键词：重组腺病毒疫苗
- 流感病毒PR8F的拯救及其对BALB／c小鼠的致病力被引量：1
- 2017年
- 为了研究H1N1流感病毒对BALB/c小鼠的致病相关分子机制、传播机制以及开发新型疫苗,将本实验室保存的A/PR/8/34株的8个质粒参照Paulina构建的流感病毒8质粒突变系统做定点突变,利用反向遗传操作技术,成功拯救出H1N1流感病毒突变株PR8F。将PR8F株以106 TCID50/100μL的剂量滴鼻感染BALB/c小鼠,观察小鼠临床表现及体质量变化。解剖攻毒后不同时间小鼠并观察体内主要脏器的病理特征,提取各脏器RNA,通过实时荧光定量PCR方法,检测PR8F株在小鼠体内不同脏器中的病毒残留量和在BALB/c小鼠肺脏中的扩增效率。结果表明,H1N1流感病毒突变株PR8F感染小鼠4~7d后全部致死;PR8F株在小鼠体内各脏器中的病毒残留量有很大差异,肺脏中最多,且病毒在肺脏内呈指数形式扩增。本试验建立了H1N1流感病毒PR8F株对BALB/c小鼠的感染模型,为H1N1流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定基础。
- 崔卓栋柴丹溫树波解长占孙文超张萍韩继成曹亮田明尧金宁一
- 关键词：定点突变病毒拯救实时荧光定量PCR
- 应用SOE PCR方法构建新城疫病毒基因起始片段的研究被引量：1
- 2017年
- 目的以猪源新城疫病毒JL02/2000株为模板,构建新城疫病毒反向遗传研究所需的基因起始片段。方法将NDV起始片段(ND1,226-4 916bp)设计拆分为ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4的4个约1.2kb的小片段,分别PCR扩增各片段,后采用SOE PCR技术将ND1-1、ND1-2拼接成中间片段ND1-1-2,将ND1-3、ND1-4拼接为ND1-3-4,再经第二次SOE-PCR整合拼接ND1-1-2和ND1-3-4片段,完成NDV起始片段ND1的构建,并连接到pCI载体上,构建pCIND1质粒,最后经酶切PCI-ND1质粒并送测序鉴定目的片段是否构建正确并成功连接到pCI载体上。结果经PCR扩增得到ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4共4个分别约1 200bp大小的片段,经第一轮SOE-PCR得到ND1-1-2和ND1-3-4两个2 200bp左右的片段,第二轮SOE-PCR得到4 900bp左右的ND1片段。连接产物PCI-ND1质粒经酶切和测序鉴定片段大小和序列与预期相符。结论成功构建了新城疫病毒基因起始片段(226-4 916bp),为构建新城疫病毒全长基因奠定了基础。
- 南福龙陈兴张赫解长占崔卓栋张萍张金勇庄忻宇鲁会军金宁一
- 关键词：新城疫病毒PCR基因克隆
- 2015年广西地区PRRSV流行株ORF5和Nsp2基因分子流行病学调查被引量：3
- 2017年
- 目的对广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和ORF5基因进行分子流行病学调查。方法采集广西地区猪病料样品45份,PCR扩增PRRSV毒株Nsp2和ORF5基因并进行遗传进化分析。结果 RT-PCR检测PRRSV 7份猪病料阳性。7株病毒与VR-2332和LV株的同源性分别为83.5%88.7%和62.1%64.8%。遗传进化分析显示,7株病毒分属于两个亚群,3株属于亚群Ⅳ,4株属于亚群Ⅵ。Nsp2序列分析显示,6株病毒有高致病性PRRSV 1+29aa氨基酸的缺失特征,其中GXBB11-2015在此基础上出现了新的20个氨基酸缺失,缺失碱基数为150个碱基。结论高致病性PRRSV已成为广西地区优势毒株,病毒Nsp2基因新的碱基缺失是PRRSV变异的又一证据。
- 孙文超张萍解长占张金勇曹亮南福龙韩继成温树波肖朋朋张赫庄忻雨靖杰崔卓栋柴丹鲁会军金宁一
- 关键词：ORF5基因
- 转瓶培养与生物反应器微载体培养流感重组腺病毒的比较
- 分别用3.5L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养HEK-293细胞,接种流感重组腺病毒,比较两种培养方式生产病毒的毒价.材料与方法:向转瓶中接种3.4×107个HEK-293细胞,每2d传代细胞并计数,8d后细胞数目达到...
- 郭海宁张萍韩继成靖杰曾亮解长占肖朋朋李一权马海彬南福龙崔卓栋鲁会军金宁一
- 犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：11
- 2017年
- 犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化。结果表明,所建立的方法 Ct值与标准品在4.67×10~9 copies/μL^4.67×10~3 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.445。该方法检测灵敏度为4.67×10~1copies/μL。该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应;所有稀释度标准品模板均在83.35℃出现窄的特异性熔解峰。临床样品检测表明,所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12.50%(4/32)。
- 孙文超解长占赵冠宇曹亮郑敏曹慧慧张红云韦显凯韩继成温树波肖朋朋靖杰张萍鲁会军金宁一
- 关键词：SYBR实时荧光定量PCR
