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王栋: 作品数：12 被引量：38H指数：4; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目中央高校基本科研业务费专项资金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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基因A型和C型鸭甲型肝炎病毒卵黄抗体的研制及应用被引量：4: 2016年; 旨在研制基因A型和C型鸭甲型肝炎病毒(DHAV)单价及二价高免卵黄抗体,以满足实际生产中基因A型和C型DHAV单独或混合感染防控的需要。采用基因A型和C型DHAV强毒株作为抗原制备单价和二价油乳剂灭活疫苗免疫接种高产蛋鸡,制备了高效价的基因A型和C型DHAV单价及二价高免卵黄抗体,卵黄抗体鸭胚中和效价在1∶204与1∶281之间,单价及二价卵黄抗体防治试验证明,所制备的卵黄抗体防治效果良好。; 王继练张焕容王栋; 关键词：基因型卵黄抗体

双组分系统rcsC基因影响禽致病性大肠杆菌的致病性及相关生物学特性被引量：2: 2019年; 【目的】双组分系统Rcs感受外界环境变化,并调控细菌的适应性及生存等。本文探讨Rcs双组分系统传感器激酶RcsC对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)相关生物学特性及致病性的影响。【方法】采用Red同源重组的方法构建rcsC基因缺失株,并利用互补质粒构建互补株,然后比较野生株、基因缺失株与互补株的生长特性、运动性、生物被膜、凝集沉淀能力、致病力及毒力基因转录水平的差异。【结果】rcsC基因缺失不影响APEC的生长速度,然而,缺失RcsC导致APEC的运动能力升高、生物被膜形成能力降低和凝集能力增强。凝集试验结果显示rcsC基因有助于APEC的凝集沉降。细胞黏附入侵结果表明,rcsC在APEC侵袭DF-1细胞过程中发挥作用,而对黏附能力无影响。动物感染试验结果表明rcsC基因缺失能显著降低APEC的毒力。荧光定量PCR检测结果表明,rcsC基因缺失株中ompA、aatA、fyuA和luxS基因的转录水平均显著降低,而fimC和tsh基因的转录水平显著升高。【结论】RcsC参与调控APEC的运动性、生物被膜形成、凝集沉降和致病力。; 王栋王少辉张焕容刘新许漩易正飞田明星丁铲于圣青; 关键词：禽致病性大肠杆菌双组分系统生物学特性

禽致病性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2（ETT2）毒力岛ATPase EivC的功能研究: 本实验室前期研究表明,大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2（ETT2）广泛存在于禽致病性大肠杆菌（APEC）,进一步证明APEC是人类ExPEC的毒力基因贮库,可通过禽类及其产品传播给人类,对人类健康及公共卫生造成潜在威胁。ATPas...; 王少辉刘新许漩吴晓君王栋于圣青; 文献传递

猪戊型肝炎病毒ORF3基因的克隆与原核表达: 2015年; 为了表达猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白,并对其反应原性进行研究,采用RT-PCR方法扩增猪戊型肝炎病毒(SHEV)ORF3完整基因,将扩增产物插入pMD19-T载体,再亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建了pET-32a(+)-ORF3表达载体,转入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,同时对诱导表达条件进行筛选,并用SDS-PAGE和免疫印迹等方法分析鉴定表达产物。结果表明,成功扩增到345bp的目的基因片段,表达载体pET-32a(+)-ORF3转入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,成功表达了ORF3基因编码的蛋白,当IPTG浓度为1mmol/L,诱导时间为6h时,该基因在E.coli BL21(DE3)中表达量最高。表达产物的分子质量约为29.6ku,与预期目的蛋白分子质量相符。表达的蛋白既有包涵体形式,也有可溶性形式。经Western blot检测,表达的目的蛋白能与SHEV阳性血清发生特异性反应。; 何美琳张焕容王栋; 关键词：猪戊型肝炎病毒 ORF3基因

鸭IL-8mRNA定量检测方法的建立及应用: 2016年; 为检测鸭IL-8细胞因子表达,设计鸭IL-8基因特异性引物,以鸭组织总RNA为模板,建立了鸭IL-8 SYBR Green I荧光定量RT-PCR（RRT-PCR）方法,应用该法检测了基因A型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus genotype A,DHAV-A）弱毒疫苗免疫SPF雏鸭肝、脾和脑组织中鸭IL-8 m RNA的动态表达。结果鸭IL-8基因RRT-PCR扩增标准曲线相关系数0.993,溶解曲线呈特异性单峰,线性范围10^-2-10^-9,Ct值范围7.81-30.71,最低检测量99.17 copies/μL,扩增效率1.08,组内和组间变异系数范围分别为0.67%-0.94%和0.96%-1.27%;鸭IL-8 m RNA在免疫鸭肝、脾和脑组织表达水平分别在第3天、第5天和第2天时间点达峰值,分别为对照组的2.75、35.29倍和10.79倍（P〈0.01）。本试验建立的鸭IL-8 RRT-PCR特异、敏感、稳定,能够快速、准确检测鸭体内IL-8细胞因子的表达水平。; 王栋张焕容张冰岳华汤承; 关键词：荧光定量RT-PCR 弱毒疫苗

密度感应系统luxS基因对鼠伤寒沙门菌生物学特性及毒力的影响被引量：6: 2016年; 通过构建鼠伤寒沙门菌luxS缺失株,研究其生物学特性及对Ⅵ型分泌系统(T6SS)的影响。利用Red同源重组系统构建鼠伤寒沙门菌luxS缺失株,比较野生株、luxS缺失株的生长特性、运动性、生物被膜、致病性等生物学特性的差异。利用荧光定量PCR、Western-blot对luxS基因缺失株T6SShcp1、hcp2和clpV基因转录水平和蛋白表达水平进行检测。结果显示,LuxS对鼠伤寒沙门菌生长速度、生物被膜形成能力及细胞黏附侵袭能力均无明显影响,但导致其运动性显著增强、致病力下降3.2倍,且不能合成自诱导分子2。在对数生长期和平台期,luxS基因均不影响T6SS核心组分Hcp1、Hcp2和ClpV的转录和表达。本研究表明,luxS基因缺失导致鼠伤寒沙门菌运动能力增强及毒力降低,但其不能影响T6SS核心组分的转录及表达。; 杨登辉汪洋王少辉刘新许漩王栋韩先干丁铲程相朝于圣青; 关键词：沙门菌 LUXS基因

基因A型鸭甲肝病毒弱毒株免疫雏鸭的8种细胞因子mRNA变化分析: 2016年; 为研究基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)MY弱毒株对雏鸭细胞因子表达的影响,阐明细胞因子在DHAV-A弱毒疫苗免疫中的作用,利用荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,检测DHAV-A MY弱毒株接种1日龄SPF雏鸭后0.25、0.5、1、2、3和5d共6个时间点肝、脾和脑组织中IFN-α、IFN-β、IFN-γ,以及IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8和TNF-α共8种细胞因子的mRNA转录水平,并结合各时间点DHAV-A的荷载量进行分析。结果表明:肝和脑组织中2d时间点以及脾组织中3d时间点病毒荷载量达到最高;三种组织中,8种细胞因子的转录水平均随着病毒荷载量的增加而升高,且在各组织病毒荷载量最高时间点,8种细胞因子的转录水平均极显著升高(P<0.01),结果证明DHAV-A MY弱毒株可刺激雏鸭抗病毒细胞因子IFN-α、IFN-β、IFN-γ和TNF-α以及炎性细胞因子IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8mRNA的转录,本研究丰富了DHAV-A MY弱毒株的免疫机制。; 张焕容张冰王栋岳华; 关键词：弱毒株细胞因子荧光定量RT-PCR

Ⅵ型分泌系统2核心组分VgrG对禽致病性大肠杆菌致病性的影响: 禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的以气囊炎、关节滑膜炎、输卵管炎和腹膜炎为主要特征的传染病.禽致病性大肠杆菌常与其它病原混合感染或继发感...; 刘新王少辉许漩杨登辉王栋丁铲彭大新于圣青

华东地区沙门菌流行病学及耐药性分析被引量：14: 2019年; 沙门菌病是一种严重危害人类健康和养殖业发展的人畜共患病,为了解华东地区沙门菌的分子流行情况,本研究采用选择性培养基和PCR分离鉴定沙门菌,然后利用PCR检测沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并用药敏纸片法检测其耐药性。结果显示,本研究分离鉴定出48株沙门菌,分离率为16.84%。血清学结果显示所检测的48株沙门菌中鼠伤寒沙门菌占64.58%,肠炎沙门菌占6.25%,其他血清型占29.17%。毒力基因检测发现除sopE基因分布率为25%外,其他15个毒力基因分布率可达97%以上。药敏试验结果显示沙门菌分离株对常见抗生素具有不同的抗性和敏感性,并且耐药性十分严重,对红霉素、阿奇霉素、克林霉素、新霉素、大观霉素、四环素、利福平、复方新诺明等抗生素的耐药率均超过50%以上。检测结果说明,华东地区沙门菌主要血清型为鼠伤寒沙门菌,且毒力基因分布广泛,多重耐药性菌株十分流行。; 吴晓君吴晓君王少辉杨登辉王栋丁铲丁铲高崧; 关键词：沙门菌血清型毒力基因耐药性

禽致病性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2 EivC点突变的构建及其ATPase活性分析被引量：1: 2017年; 为了分析禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)Ⅲ型分泌系统2(E.coli TypeⅢsecretion system2,ETT2)Eiv C ATPase关键活性位点,本研究通过比对分析病原菌ATPase序列,筛选APEC ETT2 Eiv C的关键位点。然后设计点突变引物,通过PCR方法构建Eiv C点突变片段,构建Eiv C点突变重组表达质粒。经IPTG诱导表达后纯化相应蛋白,并检测其ATPase活性。结果显示,Eiv C蛋白包含F0F1 ATPase的保守序列,且具有ATPase活性。测序结果显示Eiv C第175、199、201、233位氨基酸突变成功,融合蛋白获得成功表达与纯化。然而,点突变与野生型Eiv C的ATPase活性差异不具有显著统计学意义。本研究结果表明第175、199、201、233位氨基酸不影响Eiv C的ATPase活性。; 许漩王少辉刘新王栋梁华黄彩兰吴晓君丁铲王桂军于圣青; 关键词：禽致病性大肠杆菌 ATPASE

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