俞明敏
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华中农业大学动物医学院更多>>
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- 伪狂犬病毒Ea株UL38基因的克隆、序列分析及表达
- 2009年
- 以伪狂犬病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增UL38全长基因,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,并采用双脱氧终止法进行序列测定。序列分析显示UL38基因全长1 107 bp,可编码369个氨基酸。将该基因克隆到原核表达载体pQE-82L的6×His下游,获得原核表达质粒pQE-UL38,IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达并获得相对分子质量约40 000的融合表达蛋白6×His-UL38,Western blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。进一步将UL38基因插入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP基因的5′端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL38,转染Hela细胞,24、48 h通过激光共聚焦显微镜观察显示pEGFP-UL38,24 h荧光主要分布在胞浆,有部分分布在核内,但随时间延长,荧光逐渐向细胞核中转移,在转染后48 h几乎完全定位于核内。但对照载体pEGFP-N1转染细胞的荧光一直呈弥散型分布于整个细胞。
- 薛念波方六荣江云波俞明敏李彬罗锐陈焕春肖少波
- 关键词：伪狂犬病毒
