王丹
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- H3N8亚型EIV HA基因在昆虫细胞中的表达及生物学特性分析
- 2013年
- 为表达H3N8亚型马流感病毒(EIV)HA蛋白,本研究将A/equine/xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中,构建重组转移质粒pFB-XJ3-HA,并将其转化至DH10BAC感受态细胞中,与杆状病毒骨架质粒Bacmid进行重组,重组杆粒rBac-XJ3-HA转染Sf9昆虫细胞,构建重组杆状病毒rBv-XJ3-HA,并通过细胞免疫组化和western blot进行鉴定。结果表明rBv-XJ3-HA构建正确,表达的HA蛋白与抗EIV的血清反应良好;血凝试验结果表明表达的HA蛋白具有良好的血凝活性。本研究为研制EIV HA蛋白亚单位疫苗提供了实验依据。
- 刘春国王伟刘飞刘彦云王丹吕让刘明相文华
- 关键词：马流感病毒HA基因杆状病毒表达血凝活性
- H3N8亚型马流感病毒M1基因在昆虫细胞中的表达及活性分析
- 2013年
- 为建立H3N8亚型马流感血清学诊断方法,将H3N8亚型马流感病毒A/equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)M1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中,构建重组转移质粒pFastBac Dual-M1;将pFastBac Dual-M1转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选重组穿梭质粒rBD-M1;在脂质体转染试剂介导下将rBD-M1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,拯救重组杆状病毒rBV-M1;rBV-M1感染Sf9细胞后,通过Western-blotting和免疫组织化学染色进行蛋白表达分析。结果表明,获得了分子质量为27ku的特异性M1蛋白,而且该蛋白具有良好的免疫活性。M1蛋白的成功表达为以M1蛋白作为诊断抗原的研究奠定了基础。
- 王伟王伟刘春国刘明张超林刘飞刘彦云王寿山王丹吕让
- 关键词：马流感病毒杆状病毒表达
- 稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2基因的MDCK细胞系的建立被引量：2
- 2014年
- 为建立稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)基因的MDCK细胞系,本研究采用RT-PCR扩增TMPRSS2基因,克隆于逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-TMPRSS2。采用脂质体转染的方式将重组质粒pLXSN-TMPRSS2、pGP和pE-ampho共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒。将逆转录病毒样颗粒感染MDCK细胞,经G418加压筛选和有限稀释法克隆及RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)等试验的鉴定,建立了稳定表达TMPRSS2基因的MDCK细胞系。此外,红细胞凝集试验和IFA结果还显示,流感病毒可以在无外源胰酶存在的条件下在该细胞系中增殖,从而为流感细胞培养型病毒株的大规模生产奠定了基础。
- 吕让王丹宋彩玲齐宾宾刘明
- 关键词：逆转录病毒TMPRSS2
