相文华
- 作品数：230 被引量：401H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 猪肺炎支原体的研究近况被引量：13
- 2003年
- 支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3～0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态.它不同于细胞,也不同于病毒.支原体用普通染色法不易着色,用姬姆萨染色很浅,革兰氏染色为阴性.支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长,营养要求比细菌高.支原体的种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大,涉及人、动物、植物及昆虫等多个领域,给人类健康带来不利影响.
- 于敏王文军李景鹏杨建德相文华沈荣显
- 关键词：肺炎支原体病原学分子生物学疫苗免疫接种
- 山羊关节炎-脑炎荧光抗体制备及初步应用
- 1993年
- 山羊关节炎-脑炎(CAE)是年80年代新发现的一种由反转录病毒科慢病毒亚科成员引起的山羊慢病毒传染病。由于该病与马传染性贫血(EIA)、绵羊进行性肺炎(OPP)以及人类艾滋病(AIDS)等慢病毒密切相关而引起极大重视,相继建立了CAE琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验等诊断方法。流行病学普查结果表明,美洲CAE感染率为83％,欧洲为61％,我国在1985年从进口萨能氏奶山羊检出CAE阳性羊。迄今为止,
- 相文华丁思雨吕晓玲秦运安沈荣显
- 关键词：羊病山羊关节炎脑炎抗体
- 马流感病毒血凝素基因甲病毒复制子重组表达质粒的构建及其免疫效力评价被引量：1
- 2012年
- 为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/c鼠能够检测到特异性抗体产生,而且HI抗体水平持续升高,同时小鼠体内IFN-γ、IL-4分泌水平也有所升高。攻毒后小鼠表现轻度临床症状,但病毒分离和RT-PCR均未检测到病毒。上述结果表明,该重组质粒pSFV1CS-EIV-HA具有良好的免疫原性并且可以诱导免疫动物产生较高免疫应答的能力。
- 仇铮郭巍孙元戚亭仇华吉相文华
- 关键词：马流感病毒
- 抗马动脉炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及B细胞抗原表位的鉴定
- 2013年
- 为鉴定马动脉炎病毒(EAV)N蛋白的抗原表位,利用原核表达系统表达N蛋白,用其免疫6周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合获得杂交瘤细胞,通过以重组N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法筛选出2株能稳定分泌抗N蛋白的单克隆抗体(MAb),分别将其命名为2B3和2B9,其重链属于IgG1,轻链属于κ链。Western-blot证明,2株MAbs均能识别重组N蛋白。间接免疫荧光(IFA)试验证明,2株MAbs均与EAV呈阳性反应。用肽扫描法将N基因截短为具有相互部分重叠的11段,表达带HIS标签的重组蛋白,与MAb 2B3和MAb 2B9进行Western-blot和ELISA反应后,针对表位序列11 ASFRNGRRRQPTSYND26,进一步通过合成短肽对2株MAbs进行精确定位;结果表明,2B3识别的抗原表位为18 RRQPTSYND26,2B9针对的抗原表位为18 RRQPTSYND26。本研究结果为建立EVA的血清学检测方法及研究N蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 赵世华戚亭郭巍田志革朱超相文华
- 关键词：马动脉炎病毒单克隆抗体表位
- 中国华南、华中、东北和西北地区马动脉炎病毒(EAV)感染马血清流行病学调查被引量：6
- 2012年
- 马病毒性动脉炎(EVA)是一种由马动脉炎病毒(EAV)引起马属动物主要通过呼吸系统和生殖系统传播的传染病,是危害养马业及赛马业的重要疾病之一。本试验应用纯化EAV全病毒为抗原建立EAV-IgG间接ELISA方法与西班牙INGEZIM-ARTERITIS试剂盒分别检测华南、华中、东北和西北地区共计383份马血清样品。其结果为:华南地区赛马动脉炎阳性率为26%,华中地区赛马动脉炎阳性率为0,东北地区役用马动脉炎阳性率为8.26%,西北地区役用马动脉炎阳性率为7.55%。鉴于此,有必要加强EVA检测,掌握EVA在我国分布,以有效的预防和控制本病传播。
- 李红梅侯玉杰时成龙郭巍胡兰赵立平相文华
- 关键词：赛马马动脉炎病毒流行病学调查
- 斜生褐孔菌多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究
- 2009年
- 研究了斜生褐孔菌多糖对人类肝癌HepG-2细胞凋亡的诱导作用。采用噻唑蓝法(MTT法)观察了斜生褐孔菌多糖对HepG-2细胞生长的影响,用透射电镜观察了细胞形态,用DNA Ladder检测了细胞凋亡,用流式细胞仪检测了细胞凋亡率;同时采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR法)研究了不同浓度斜生褐孔菌多糖作用后HepG-2细胞中Bax和Bcl-2基因mRNA转录水平的变化。结果表明斜生褐孔菌多糖能抑制HepG-2细胞增殖,并呈时间剂量依赖关系;电镜观察、DNALadder和流式细胞仪检测均证实了斜生褐孔菌多糖能够诱导HepG-2细胞凋亡;经斜生褐孔菌多糖处理后,HepG-2细胞中Bax基因mRNA转录水平增强,而Bcl-2基因mRNA无明显变化。证明了斜生褐孔菌多糖具有抑制HepG-2细胞生长及诱导HepG-2细胞凋亡的作用,这可能与调节Bcl-2和Bax基因表达水平有关。
- 安晓丽赵敏董露璐何平平相文华
- 关键词：大型真菌多糖抗肿瘤BCL-2基因BAX基因
- 马传染性贫血琼扩抗原生产工艺的改进被引量：2
- 2005年
- 赵立平许井君朱远茂相文华薛飞杨建德王晓钧吕晓玲木拉提沈荣显
- 关键词：传染性贫血琼扩抗原生产工艺传染性贫血病毒
- 中国株EIAV S2基因逆向突变感染性克隆的构建及体外感染性评价被引量：3
- 2009年
- 以中国株EIAV的驴强毒株EIAVDV115与疫苗株EIAVFDDV15的S2基因变化规律为依据,利用反向遗传技术对EIAV弱毒疫苗株全基因组感染性克隆pFDDV3-8的S2基因区进行逆向突变,构建了含有强毒株EIAVDV115S2基因区内4个稳定点突变的克隆质粒pFDDVS2r1-3-4-5,将该质粒转染FDD后进行体外继代盲传,经RT-PCR、逆转录酶活性、间接免疫荧光等检测后,显示经EIAV克隆质粒pFDDVS2r1-3-4-5转染的FDD盲传3代后,可在转染的FDD细胞培养物的上清液中检测到EIAV逆转录酶活性;该细胞培养物经RT-PCR和间接免疫荧光检测均呈EIAV阳性;在电镜下可观察到典型EIAV粒子。证明已成功拯救经EIAVS2基因逆向突变后的衍生病毒vpFDDVS2r1-3-4-5。比较vpFDDVS2r1-3-4-5衍生病毒与亲本克隆衍生病毒的复制动力学,表明前者的复制比后者略滞后。以上结果提示,对疫苗株S2基因的突变未明显影响EIAV的体外复制。
- 高旭姜成刚韩秀娥赵立平沈荣显相文华周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒S2基因感染性克隆
- 重组猪戊型肝炎病毒ORF2区主要抗原域的原核表达及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的:在大肠杆菌中表达猪戊型肝炎病毒ORF2区主要结构蛋白,并对其进行血清学鉴定。方法:通过RT-PCR技术从一份猪粪中扩增并克隆戊型肝炎病毒主要的结构基因片段,将该片段插入pET-32a表达载体,在原核系统中融合表达蛋白,Western blot和间接ELISA方法分析该蛋白的抗原性。结果:SDS-PAGE分析结果表明,获得45kD的目的蛋白,该重组蛋白可以与HEV阳性血清反应,而不与阴性血清反应,表明该蛋白具有良好的抗原性。结论:本研究获得了猪戊型肝炎病毒重组抗原,可与HEV阳性血清产生特异性的结合反应,可以作为诊断用的重组蛋白,为研制敏感、特异的HEV诊断试剂盒,行之有效的HEV基因工程疫苗及为HEV感染的预防和临床治疗提供资料。
- 于婧曲娟娟于敏赵立平相文华
- 关键词：原核表达重组抗原BLOT
- 裂蹄木层孔菌子实体水提物诱导HepG2细胞凋亡的初步研究被引量：2
- 2009年
- 研究裂蹄木层孔菌子实体水提物(WEPL)对人类克隆肝癌细胞系HepG2生长的作用。用裂蹄木层孔菌子实体水提物处理HepG2细胞后,噻唑蓝法(MTT法)可见浓度和时间依赖性抑制细胞增殖;电镜下观察凋亡小体的出现,流式细胞仪技术显示Annexin-Ⅴ染色呈阳性,都证明了HepG2细胞发生了凋亡。RT-PCR和Western Blot分析证实WEPL刺激Bax表达量上调、Bcl-2表达量下调进而诱导了细胞凋亡。结果表明WEPL诱发的克隆人类肝癌细胞系HepG2的细胞凋亡可能是通过上调Bax、下调Bcl-2活性来实现的。
- 董露璐赵敏安晓丽何平平相文华
- 关键词：大型真菌BAXBCL-2
