王伟
- 作品数：39 被引量：60H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：“十二五”国家科技计划农村领域中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡Mx蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2013年
- Mx蛋白为GTP酶动态蛋白家族成员,已被证明具有抗禽流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的作用。为制备鸡Mx蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的鸡Mx蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,分离脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得4株稳定分泌抗鸡Mx蛋白抗体的杂交瘤细胞株。间接ELISA测定4株MAb纯化后腹水的效价介于1∶3.2×104～1∶2.5×105之间。Western blot结果证实4株MAb均具有良好的反应性;间接免疫荧光试验表明其中一株MAb与真核表达的鸡Mx蛋白发生反应。本研究为鸡Mx蛋白功能及表达鸡Mx蛋白的转基因动物等研究奠定了基础。
- 胡卫杰王伟孙建华邓瑞坡张雅春尹海畅孟庆文
- 关键词：MX蛋白单克隆抗体
- H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析被引量：2
- 2012年
- 禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒。禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,被国际兽医局（OIE）列为A类传染病。H9N2亚型AIV为低致病性禽流感病毒,虽然毒力较H5N1亚型AIV弱,
- 王寿山张超林刘春国石薇琳刘彦云王伟王伟
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒NA基因低致病性禽流感病毒A型流感病毒H5N1亚型
- 表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠模型的鉴定分析
- 目的本研究鉴定分析制备的表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠,为利用转基因小鼠模型探讨抗菌肽的生物学功能及其抗菌机制奠定基础。方法在成功获得转基因小鼠的基础上,运用PCR、Southern blot、RT-PCR、...
- 王伟尹海畅臧凤霞周长良陈洪岩孟庆文
- 关键词：CECROPIN-XJ转基因小鼠
- H3N8亚型EIV HA基因在昆虫细胞中的表达及生物学特性分析
- 2013年
- 为表达H3N8亚型马流感病毒(EIV)HA蛋白,本研究将A/equine/xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中,构建重组转移质粒pFB-XJ3-HA,并将其转化至DH10BAC感受态细胞中,与杆状病毒骨架质粒Bacmid进行重组,重组杆粒rBac-XJ3-HA转染Sf9昆虫细胞,构建重组杆状病毒rBv-XJ3-HA,并通过细胞免疫组化和western blot进行鉴定。结果表明rBv-XJ3-HA构建正确,表达的HA蛋白与抗EIV的血清反应良好;血凝试验结果表明表达的HA蛋白具有良好的血凝活性。本研究为研制EIV HA蛋白亚单位疫苗提供了实验依据。
- 刘春国王伟刘飞刘彦云王丹吕让刘明相文华
- 关键词：马流感病毒HA基因杆状病毒表达血凝活性
- ICR小鼠Mx1基因的克隆及组织表达被引量：4
- 2011年
- 为了对ICR小鼠的Mx1基因序列特征进行比较分析,揭示该基因的组织特异性表达规律,用干扰素诱导剂poly（I）/（C）诱导小鼠腹腔巨噬细胞,应用RT-PCR技术克隆小鼠Mx1基因全长编码区序列,并用半定量RT-PCR方法研究该基因在组织中的特异性表达规律。结果显示,从雌性ICR小鼠腹腔巨噬细胞中克隆的Mx1基因的CDS序列大小为1 611 bp,编码536个氨基酸。该序列与其他物种Mx基因序列的比较结果显示,核苷酸同源性为37.36%~69.98%,氨基酸同源性为38.8%~76.6%。半定量RT-PCR显示,Mx1基因在所检测组织的脾脏、肺脏中表达量较高,肝脏中度表达,心脏、肾脏低度表达,肌肉中不表达。研究结果表明,克隆的Mx1基因所编码的蛋白具有脊椎动物Mx蛋白共有的结构特征,该基因的表达具有组织特异性。
- 肖志广刘晓敏王丽李巍王伟胡卫杰王建超孟庆文
- 关键词：小鼠基因克隆
- 鸡OV启动子表达HA对禽流感病毒攻击提供完全保护
- 2018年
- 鸡卵清蛋白（ovalbumin,OV）基因5＇调控序列是构建鸡输卵管生物反应器的首选调控元件。以EGFP为报告基因,构建OV启动子真核表达载体,转染原代输卵管上皮细胞和CHO细胞,筛选得到1.1kb的高效OV启动子。构建1.1kb OV启动子表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白真核表达载体pOV_（1.1k）-HA,转染CHO细胞。PCR、RT-PCR鉴定结果证明HA基因整合至CHO细胞基因组,并进行转录;SDS-PAGE、Western blot及HA试验结果证明HA蛋白在CHO细胞内的表达,并具有免疫反应性和血凝活性。以纯化的HA蛋白免疫4周龄SPF鸡,2周后加强免疫一次,加强免疫3周HI抗体水平为6.3log2;以10~6EID_（50）H5N1（A/Goose/Guangdong/1/96）亚型禽流感病毒鼻腔接种SPF鸡,免疫组100%存活,无排毒现象,对照组100%死亡。结果表明,筛选的1.1kb OV启动子可有效驱动HA蛋白表达,表达的HA蛋白免疫SPF鸡对禽流感病毒攻击提供完全保护;为鸡输卵管生物反应器表达保护性抗原和珍贵药物蛋白奠定了基础。
- 李亚芳赵颖慧刘赛宝王伟曾为俊王金泉陈洪岩孟庆文
- 关键词：HA禽流感病毒免疫保护
- 维甲酸诱导蛋白Ⅰ在禽类抗病毒天然免疫中的研究进展被引量：2
- 2013年
- 维甲酸诱导蛋白Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)是机体先天性免疫系统中的一类重要受体,能识别细胞中的外源RNA,诱导Ⅰ型干扰素、细胞因子及趋化因子的产生,对机体抗病毒天然免疫的建立有重要作用。研究结果发现,RIG-Ⅰ在哺乳动物中能抑制流感病毒和新城疫病毒等病毒。鸡体内不含有RIG-Ⅰ,鸭RIG-Ⅰ能在鸡源细胞系中产生显著的抗禽流感病毒效果。作者重点论述了RIG-Ⅰ的作用机制,展望了RIG-Ⅰ在提高禽类抗病力和推进禽类先天性免疫基础研究方面的潜力。
- 张雅春王伟孟庆文
- 关键词：禽类天然免疫抗病毒
- 牛病毒性腹泻病毒1型、猪瘟病毒野毒株和猪瘟病毒疫苗株多重SYBR Green-1实时荧光PCR方法的建立
- 立可同时检测牛病毒性腹泻病毒-1型(BVDV-1)、猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与CSFV野毒株的快速检测方法。根据GenBank中登录的上述3种病毒的全基因组序列，设计3对特异性多重引物，建立了同时检测BV...
- 王伟符芳陈欣李雪松郎越坤田华彬张兴娟李曦
- 文献传递
- H9N2亚型禽流感病毒对海兰白鸡感染和传播特性的研究
- 2015年
- 为研究H9N2亚型禽流感病毒（AIV）对海兰白鸡的感染和传播特性,将80只4周龄海兰白鸡随机分为8组,每组10只,其中感染组5只,同居组5只,采用100～107EID50/0.4 mLH9N2 AIV以滴鼻和点眼方式攻毒,24 h后放入同居组。感染14 d内每天进行临床观察,采集咽拭子和泄殖腔拭子用于病毒分离,感染后7、10、14 d测定HI抗体滴度。结果表明：4周龄海兰白鸡感染H9N2 AIV后未出现明显的临床症状;感染剂量为10^0～10^1 EID50/0.4 mL的感染组和同居组均未分离到病毒;感染剂量为10^2～10^3 EID50/0.4 mL的感染组排毒期为2～6 d,同居组排毒期为4～6 d;感染剂量为10^4～10^7 EID50/0.4 mL感染组排毒期为1～6 d,同居组排毒期为2～8 d;感染剂量为10^2～10^7 EID50/0.4 mL感染组和同居组鸡分别于感染后7和10 d开始产生抗体,第14天感染组和同居组鸡的平均抗体滴度分别为（7.8±1.4）log2和（6.7±1.1）log2。结果显示该毒株使4周龄海兰白鸡全部感染的最低感染剂量为103EID50/0.4 mL,以106EID50/0.4 mL感染鸡,能刺激感染组与同居组产生较高的HI抗体,表明106EID50/0.4 mL H9N2亚型AIV能在海兰白鸡体内建立有效感染和传播。
- 周长良邓瑞坡王伟臧凤霞冉多良陈洪岩孟庆文
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒
- H3N8亚型马流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及其生物学特性的研究被引量：2
- 2014年
- 为了构建表达H3N8亚型马流感病毒HA蛋白的重组腺病毒,把A/Equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,将重组穿梭质粒pShuttle-XJ3HA电转化至BJ5183感受态细胞中,与人5型腺病毒骨架质粒同源重组,获得了重组腺病毒质粒pAd-XJ3HA。该质粒线性化后转染AD293细胞,包装重组腺病毒rAd-XJ3HA。通过PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot鉴定,证明HA基因已整合到腺病毒载体基因组中,并能够有效表达。该重组腺病毒在AD293细胞上连续传15代后仍表现出良好的遗传稳定性。马流感病毒HA基因重组腺病毒的成功构建为我国马流感重组病毒活载体疫苗的研究提供了技术储备。
- 刘春国刘明刘飞王伟刘大飞刘彦云吕让相文华
- 关键词：马流感病毒HA基因重组腺病毒生物学特性
