刘娅梅
- 作品数：21 被引量：28H指数：4
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金江苏省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 氯化锦葵色素-3-O-葡萄糖苷对TNF-α诱导内皮细胞炎症的抑制作用
- 2013年
- 目的研究氯化锦葵色素-3-O-葡萄糖苷(Mv-3-glc-Cl)对细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)所产生炎症的抑制作用。方法实验分为,空白组(DMSO)、10 g/L T NF-α刺激组、浓度为1、10、50、100 mol/L MV-3-gle-Cl+10 g/L TNF-α刺激组,通过ELISA方法检测细胞上清中可溶性单核细胞趋化蛋白(MCP-1)蛋白含量的变化;用实时荧光定量PCR检测细胞中MCP-1 mRNA表达量变化;Western blot检测IκBα蛋白含量的变化;通过免疫荧光方法测定核转录因子κB的核异位变化。结果 Mv-3-glc-Cl呈浓度依赖性的抑制细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MCP-1蛋白表达,其抑制作用可能与NF-κB信号通路有关。结论 Mv-3-glc-Cl对TNF-α诱导HUVEC的炎症反应起到抑制作用。
- 王健李春阳黄午阳郑其升刘娅梅
- 关键词：单核细胞趋化蛋白核转录因子KB
- 应用荧光定量PCR方法检测伪狂犬病病毒弱毒株在猪体组织中的分布
- 2023年
- 为了解伪狂犬病病毒(PRV)TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪体组织中的分布情况,针对PRV gB基因保守区设计并合成1对特异性引物,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法特异性强且敏感度高,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株免疫仔猪后可少量存在于大脑、小脑、肝脏、脾脏、肺脏、扁桃体和颌下淋巴结中,部分仔猪鼻甲骨病毒含量较高。应用本研究建立的荧光定量PCR方法阳性检出率为79.2%,而常规PCR方法阳性检出率仅为45.8%。结果表明,本研究建立的荧光定量PCR方法为了解弱毒株在猪体的分布提供了快速、敏感的检测手段。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪组织中的分布情况为进一步揭示其组织嗜性、安全性和免疫机制提供了数据。
- 许梦微朱来旭陈赛赛张传健张传健郑亚婷王志胜童玲曹瑞兵刘娅梅
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 几株伪狂犬病病毒的增殖特性与保存条件被引量：1
- 2020年
- 高滴度的抗原是制备优质疫苗的首要条件。对6株伪狂犬病病毒在仓鼠肾(baby hamster kidney,简称BHK)细胞和猪睾丸细胞(swine testicular,简称ST)细胞上的增殖效率进行了比较,同时测定不同保存温度和冻融条件对病毒滴度的影响。结果表明,几株伪狂犬病病毒在BHK细胞和ST细胞上增殖效率均很高,可达到生产要求。相较于ST细胞,各毒株在BHK细胞上出现病变时间更早。然而,所有毒株在ST细胞上的病毒滴度都高于同期在BHK细胞上的滴度。强毒株AH02LA株在2种细胞上滴度可达108.0 TCID 50/0.1 mL以上,表现为发生病变早,病毒增殖快,峰值到来早的特性。通过强毒株AH02LA株获得的基因缺失株LA-A株和自然传代缺失致弱株LA2017株峰值均达108.0 TCID 50/0.1 mL,展现出优良疫苗株的潜质。保存条件试验表明,PRV在-70℃保存30 d和4℃保存12 d内滴度相对稳定,而-20℃保存的病毒滴度下降明显。多次冻融后,滴度有所下降,相较于-70℃,-20℃条件下冻融病毒滴度下降更为显著,建议避免多次冻融。本试验结果可为PRV疫苗抗原在实际生产中制备与保存提供科学依据。
- 陈赛赛郑亚婷郭容利王志胜王志胜刘娅梅许梦微王彩楠刘娅梅
- 关键词：伪狂犬病病毒冻融
- 猪伪狂犬病病毒AH02LA株的分离鉴定及其对仔猪致病性研究被引量：12
- 2016年
- 从安徽六安某爆发伪狂犬病猪场送检的流产仔猪脑组织样品中分离获得1株病毒,经鉴定为伪狂犬病毒（pseudorabies virus,PRV）,命名为PRV AH02LA株。PRV AH02LA株的糖蛋白g D和g I基因序列与2011年以来我国分离的变异株同源性最高（99.5%~100%）,而与其他毒株同源性低。该分离株在BHK21细胞上增殖能力强,最高滴度达到109.0TCID50/m L。该分离株对4~5周龄和9~10周龄的PRV阴性猪能引起100%发病和死亡。临床上4~5周龄猪有严重的神经症状,也有明显的呼吸道症状;而9~10周龄猪主要表现呼吸道症状。说明本研究分离获得的PRV AH02LA是一株伪狂犬病毒变异株,其对仔猪的致病力较强。
- 乔永峰顾一奇柳畅呙荣兵许梦微王志胜刘娅梅郭容利刘芳侯继波王继春
- 关键词：伪狂犬病病毒变异株糖蛋白D
- 猪源伪狂犬病病毒变异株传代致弱株LA2017株的获得与鉴定
- 2021年
- 将猪源伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的强毒变异株AH02LA株在鸡胚成纤维细胞上进行连续传代,获得了不同代次的弱毒株,检测其安全性、免疫效力、生长特性及稳定性,并对其gE基因上、下游片段进行测序。对PRV AH02LA株的F151代进行3轮挑斑纯化,获得了1个毒株并将其命名为PRV LA2017株。用该毒株接种(剂量为106.00TCID50/头)试验猪,在接种后14 d内无任何临床症状;在免疫(106.00 TCID50/头)后21 d攻毒(106.50TCID50/头),所有试验猪未出现任何猪伪狂犬病症状,体温正常,没有排毒。在攻毒前用ELISA检测,PRV gB抗体全部为阳性,PRV gE抗体全部为阴性;在攻毒后14 d这两种抗体均为阳性,体现出良好的安全性与保护性。对照组BarthaK61在攻毒后试验猪全部发病,体温高至40.5℃以上,且均检出排毒。测序结果显示LA2017株的gI部分基因与gE全部基因缺失。该毒株在CEF细胞及ST细胞上生长良好,在CEF上的滴度达到108.0TCID50/mL,在ST细胞上的滴度最高达109.5TCID50/mL,能满足活疫苗生产的要求。LA2017株安全性好,免疫效力强,生长滴度高,可以作为研制针对PRV变异株疫苗的候选毒株。
- 郑亚婷郭容利陈赛赛乔永峰乔永峰许梦微王志胜张传健许梦微王继春
- 关键词：变异株基因缺失免疫效力
- 伪狂犬病病毒双基因缺失弱毒株及其应用
- 本发明提供伪狂犬病病毒双基因缺失弱毒株及其应用，属于动物医学的疫苗领域。伪狂犬病病毒LA1206‑80株，保藏编号为：CGMCC No.14329。本发明还提供伪狂犬病病毒双基因缺失弱毒株在制备伪狂犬病疫苗中的应用、一种...
- 王继春宋增财郭容利乔永峰王志胜许梦微刘娅梅郑亚婷范红杰侯继波
- 一种新型火鸡疱疹病毒的细菌人工染色体、构建方法与应用
- 本发明提供一种新型火鸡疱疹病毒的细菌人工染色体、构建方法与应用，涉及动物医学领域。所述细菌人工染色体,是将HVT基因组中的gC基因敲除，并替换为mini‑F质粒序列。所述细菌人工染色体的构建方法：扩增HVT基因组中gC基...
- 王继春王志胜许梦微刘芳乔永峰刘娅梅侯继波
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株及其应用
- 本发明提供伪狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株及其应用，属于动物医学疫苗领域。所述疫苗株，是将伪狂犬病病毒Bartha K61株基因组中的gC基因替换为伪狂犬病病毒AH02LA株的gC基因、gD基因替换为伪狂犬病病毒AH02L...
- 王继春刘娅梅张传健陈赛赛乔永峰呙明鹏王志胜许梦微郑亚婷郭容利侯继波
- 文献传递
- 猪源伪狂犬病病毒AH02LA株糖蛋白的基因序列测定与对比分析被引量：3
- 2017年
- 为了分析猪源伪狂犬病病毒AH02LA株糖蛋白的基因序列特征,本研究设计了17对特异性引物,通过PCR扩增AH02LA株的11个糖蛋白基因并进行序列测定,然后将其与PRV变异株(TJ株与HeN1株)和PRV经典株(Bartha株与Kaplan株)作比对分析。结果:成功扩增了11个糖蛋白基因序列,序列比对发现,AH02LA株的gB、gD、gG、gK和gM基因与PRV变异株的同源性为100%,而与PRV经典株的同源性为98%~99%;AH02LA株的gC、gE和gI基因与PRV变异株的同源性为99%,而与经典株的同源性为95%~97%,而且AH02LA株的gB、gC、gD、gE、gI和gN基因的插入或缺失也与变异株完全一致。研究表明,AH02LA株的主要糖蛋白基因序列与变异株高度同源,该毒株是一株典型的变异株。
- 许梦微王义伟乔永峰王志胜刘娅梅侯继波王继春
- 关键词：伪狂犬病毒变异株糖蛋白
- 猪源伪狂犬病病毒传代致弱LA2017株的安全性和免疫效力研究被引量：4
- 2020年
- 为检测猪源伪狂犬病病毒变异株AH02LA株作为疫苗后选株的安全性及免疫效力。本研究对4日龄初生仔猪和产前1个月妊娠母猪免疫LA2017株后的安全性、28~35日龄仔猪免疫效力以及免疫猪后排毒和同群传播性进行了研究。结果显示:滴鼻接种4日龄仔猪和肌肉注射产前1个月的妊娠母猪,均无任何临床症状,表明该疫苗株具有良好的安全性;肌肉注射接种28~35日龄的仔猪,免疫后7 d产生对PRV变异株AH02LA的完全保护并且可以阻止排毒,免疫14 d后攻毒均未发病和排毒,而PRV Bartha K61株免疫猪后7 d攻毒,有4头猪出现了体温升高,鼻拭子样品均检出病毒,免疫后14 d和21 d时对试验猪攻毒,PRV Bartha K61株免疫组均有猪发病,且鼻拭子样品均检出病毒;在抗体产生水平方面,PRV LA2017株免疫后14 d产生高水平中和抗体,PRV中和指数抗体≥10 000,且维持至免疫后5个月,而Batha-K61组免疫后1个月至3个月针对PRV变异株AH02LA的中和指数仅为178~1000,且4个月就开始下降;在同群感染方面,PRV LA2017株肌肉注射接种28~35日龄仔猪后14 d内均未从鼻拭子和肛门拭子检出排毒,gB抗体全部转为阳性,同群非免疫接种猪PRV gB和gE的ELISA抗体均为阴性,表明PRV LA2017株安全性好,无横向传播,不引起同群感染。结果表明,PRV LA2017株作为疫苗株对猪伪狂犬变异株的保护效果显著优于Bartha K61株,该毒株安全性好、抗体水平高和持续时间长,是一株极具开发价值的猪伪狂犬病流行株的弱毒疫苗候选株。
- 王志胜刘名江刘名江乔永峰乔永峰郑亚婷许梦微郭容利张传健许梦微王继春
- 关键词：猪伪狂犬病病毒安全性
