居相春
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：上海大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- Rab GDP解离抑制因子的定位和表达
- 2013年
- 目的:构建含人GDI1和GDI2基因的真核表达载体进行定位和蛋白表达研究。方法:用PCR从U251细胞cDNA克隆GDI1和GDI2基因,构建真核表达载体pEGFP-N2-GDI1和pEGFP-N2-GDI2,转染HEK293T细胞。荧光显微镜观察GDI1和GDI2蛋白的细胞内定位,再通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定蛋白的表达。结果:成功克隆到1 341bp和1 335bp的人源GDI1和GDI2基因,并准确插入真核表达载体pEGFP-N2中,荧光观察这两个蛋白定位到细胞浆中,并能利用标签抗体检测到GDI1和GDI2的表达。结论:GDI1和GDI2能够定位到细胞浆,并能通过Western blotting检测,为进一步研究GDI1和GDI2的功能奠定了基础。
- 王海烽居相春文铁桥
- 关键词：RAB转染
- 重组小鼠树突状细胞因子DCF1的原核表达和纯化被引量：1
- 2011年
- 目的:克隆小鼠重组树突状细胞因子DCF1蛋白进行原核表达、纯化与鉴定。方法:采用PCR从小鼠脑cDNA克隆dcf1基因,构建DCF1原核表达重组质粒(pET30a-DCF1)并转化E.coli的BL21(DE3)菌株。IPTG诱导重组蛋白表达,并在变性条件下经Ni sepharose FF6亲和层析柱纯化,再通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果:成功克隆到大小为972bp的小鼠源dcf1基因片段并准确插入表达载体pET30a,0.1 mmol/L IPTG诱导转化菌2h可表达大量的DCF1蛋白,并可经Ni Sepharose FF6柱亲和层析得到高度纯化。结论:成功获得纯化的42kDa重组小鼠DCF1蛋白,为后续进行DCF1蛋白功能研究奠定了基础。
- 居相春王海烽吴婕黄海文铁桥
- 关键词：原核表达蛋白纯化
