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猪寡腺苷酸合成酶OAS1a基因荧光定量SYBR Green检测方法的建立与运用被引量：2: 2019年; 为建立一种可以有效检测猪寡腺苷酸合成酶OAS1a表达方法,为检测机体抗病毒免疫提供参考,设计猪寡腺苷酸合成酶OAS1a基因特异荧光定量引物,扩增后连接pMD18-T载体,构建标准质粒,倍比稀释生成标准曲线。结果表明,引物特异,无二聚体,扩增效果良好,运用该方法测定猪繁殖与呼吸综合征病毒感染巨噬细胞中以及干扰素和Poly(I∶C)刺激细胞过程中该基因表达以及在不同猪脏器组织中分布。结果表明,该基因在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染之后表达量逐步升高,36 h达到最高,干扰素及其诱导剂Poly(I∶C)刺激均可以提高该基因表达,组织分布结果表明,该基因在多种组织中都有分布,肝脏和淋巴结中分布较高。; 李存法王瑞宁李华玮冯丽丽张二芹张雅何健赵孟孟; 关键词：荧光定量猪繁殖与呼吸综合征病毒干扰素

兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒血清在Marc-145细胞上对病毒复制影响被引量：1: 2016年; 制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,探索其对病毒复制影响,通过大量培养猪繁殖与呼吸综合征病毒XH-GD株病毒,高速离心后蔗糖梯度纯化浓缩并免疫新西兰大白兔,4免后采集抗血清,ELISA法测定效价。同时将抗血清与病毒共同孵育接种Marc-145细胞,荧光定量PCR和TCID50测定病毒复制情况。成功制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,效价达1640,抗血清可以在m RNA水平和TCID50上降低病毒滴度。结果表明,兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清可以在Marc-145细胞上抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制。; 赵孟孟孙龙陈耀张雅张二芹冯松林张桂红; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清 MARC-145细胞滴度

针对nsp9基因的siRNA在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响被引量：3: 2017年; 为了验证猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp9基因对PRRSV的复制影响,化学合成针对nsp9基因的siRNA,转染到Marc-145细胞中,接种PRRSV之后分别通过荧光定量和Western blot方法来测定病毒的滴度变化和表达情况。结果发现,转染siRNA的Marc-145细胞中病毒的滴度低于未转染特定siRNA的对照组,同时N蛋白的mRNA和蛋白水平均低于未转染特定siRNA的对照组。初步得出结论nsp9基因为病毒复制关键基因,针对nsp9基因的siRNA会在Marc-145细胞中抑制PRRSV的复制。; 赵孟孟李华玮何健冯松林张雅张二芹张桂红; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 SIRNA 滴度

猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白的亚细胞定位与功能预测被引量：2: 2016年; 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白9(NSP9)的亚细胞定位,并探索NSP9蛋白在PRRSV复制过程中的定位变化,首先预测NSP9蛋白的生物信息学功能,之后将含有NSP9基因的质粒转染Marc-145细胞,并接种PRRSV,通过间接免疫荧光方法检测NSP9蛋白的表达与定位情况。功能预测结果表明,NSP9蛋白内部存在双向核定位序列、酰胺化位点、N-糖基化位点、酪蛋白激酶磷酸化位点、N-豆蔻酰化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、细胞结合位点、酪氨酸激酶磷酸化位点、伸展蛋白重复区域、RNA聚合酶结合区域。间接免疫荧光检测结果显示,PRRSV感染之初,NSP9蛋白定位在Marc-145细胞质中,围绕在细胞核附近,随PRRSV感染时间延长,其逐步往细胞核内转移,转移的面积也逐步增多。可见,PRRSV感染会引起NSP9蛋白向核内转移。; 赵孟孟冯丽丽张二芹马红芳冯松林崔甜甜杨春辉王文佳邢星张雅冯嘉萍张桂红; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒真核表达亚细胞定位

PRRSV强、弱毒株Nsp9基因对PRRSV复制的影响被引量：1: 2017年; 为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)强、弱毒株的Nsp9基因对PRRSV复制的影响,构建含有PRRSV XH-GD强毒株、CH-1R弱毒株Nsp9全长基因的质粒p IRes2-EGFP-Nsp9-XH-GD、p IRes2-EGFP-Nsp9-CH-1R,并将重组质粒分别转染到Marc-145细胞中,以MOI=1的剂量接种PRRSV XH-GD毒株,通过TCID50试验测定病毒的滴度,采用荧光定量PCR和Western Blot方法来测定病毒的N蛋白表达情况。结果表明,转染弱毒株CH-1R Nsp9基因的Marc-145细胞中,PRRSV的N蛋白在mRNA水平、蛋白质水平上的表达量均高于转染强毒株XH-GD组,且病毒的滴度也显著高于转染强毒株XH-GD组。综上,在Marc-145细胞中,弱毒株CH-1R Nsp9基因对PRRSV复制的促进作用优于强毒株XH-GD。; 赵孟孟冯丽丽冯松林马红芳张二芹王文佳邢星张雅冯嘉萍张桂红; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒滴度

猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a基因克隆与序列分析及其在Marc-145细胞上对PRRSV复制的影响被引量：2: 2018年; 旨在探索猪2’，5’寡腺苷酸合成酶OASla对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRs）的复制是否有抑制作用，进而为探索抑制病毒复制寻求新的思路。从PAM猪肺泡巨噬细胞中克隆了猪2’，5‘寡腺苷酸合成酶OASln基因，将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3．1中，测序与序列分析之后将该基因转染Marc-145细胞，然后接种PRRSV病毒，与对照组比较病毒的抑制效果。结果显示，病毒的滴度明显下降，病毒的RNA水平也明显下降，由此推断猪2’，5，寡腺苷酸合成酶OAS1a可以在Marc-145细胞上抑制PRRS的复制。; 赵孟孟张雅张雅陈静陈静罗雪刚刘迎琦黄晓静乔松林乔松林; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒滴度 MARC-145细胞

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张雅