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张二芹: 作品数：48 被引量：128H指数：7; 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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转猪轮状病毒VP6基因烟草的杂交检测被引量：1: 2008年; 为了确定VP6基因是否已整合到烟草的基因组中,通过PCR-Southern、Dot-Blot和Western-Blot方法检测转基因烟草,结果表明,VP6基因已经成功地转化到烟草中。; 张二芹王云高婉丽陶爱丽李世访; 关键词：转基因烟草杂交

禽脑脊髓炎病毒(VR株)接种鸡胚的病理变化被引量：1: 2008年; 通过卵黄囊接种法,将禽脑脊髓炎病毒接种到8日龄SPF鸡胚内,继续在孵化箱内孵化。第17天收病毒,经观察,接毒的鸡胚局部有出血点、体重减轻、爪子弯曲等病理变化。; 马强张二芹王丽高婉丽王明伟王金玲赵振华; 关键词：禽脑脊髓炎病毒

猪乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白的原核表达、纯化及活性检测: 2017年; 在大肠杆菌BL21(DE3)中表达乙脑病毒(JEV)EDⅢ蛋白、镍柱纯化并检测表达蛋白。采用RT-PCR方法扩增EDⅢ基因片段,构建重组表达载体p ET-28a-EDⅢ并转化到BL21(DE3)菌,经IPTG诱导蛋白表达,表达可溶性产物经NiNTA亲和层析纯化,最后通过SDS-PAGE和Western-Blot检测表达蛋白。结果成功构建原核表达载体p ET-28a-EDⅢ;EDⅢ蛋白在BL21(DE3)菌已表达,经Ni-NTA获得纯化蛋白,并经Western-Blot检测具有反应活性。; 张二芹滕蔓罗俊赵孟孟许倩茹赵东邓瑞广张改平; 关键词：乙脑病毒表达蛋白

HPV45-L1和HPV58-L1蛋白植物表达载体的构建及水稻转基因植株的鉴定被引量：2: 2017年; 利用水稻胚乳细胞生物反应器,构建含有HPV45-L1和HPV58-L1基因的重组植物表达载体,为HPV-45L1和HPV58-L1蛋白的表达提供一种新的高效、低廉的表达方式。利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV45-L1和HPV58-L1蛋白编码基因,将其重组于中间载体pMP3和植物表达载体pCAMBIA-1300中,构建含HPV45-L1和HPV58-L1基因的植物表达载体pCAMBIA-1300-pMP3-HPV45-L1、pCAMBIA-1300-pMP3-HPV58-L1,随后采用根癌农杆菌侵染水稻愈伤组织介导的水稻遗传转化,获得HPV-L1转基因水稻植株。PCR检测结果表明,HPV45-L1和HPV58-L1基因已整合到水稻基因组中,说明已成功构建水稻胚乳特异性表达载体。; 王聚财刘运超陈玉梅孟凤丽王爱萍张二芹许倩茹邓瑞广张改平; 关键词：转基因水稻根癌农杆菌

禽脑脊髓炎病毒Van Roekel株衣壳蛋白基因原核表达及其ELISA检测研究被引量：3: 2005年; 利用RT PCR方法扩增了禽脑脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因 ,分别插入pGEX 4T 1原核表达载体 ,转化到E .coliER2 566表达菌内 ,经IPTG诱导表达后 ,SDS PAGE分析表达产物。结果表明 ,表达的VP0、VP3、VP1融合蛋白分子量分别为 53 ,53 ,56ku。以电洗脱法纯化VP0、VP3、VP1表达蛋白抗原并分别建立了间接ELISA方法 ,用阳性血清和阴性血清进行检测。结果显示 ,表达VP1蛋白反应活性相对高于VP0、VP3蛋白反应活性 ,最后再将自制VP1板用自配试剂检测其活性 ,同时用美国试剂盒检测VP1活性 ,美国ELISA试剂盒、琼脂扩散试验检测同样 1 0份血清作比较 ,三组ELISA检测结果 ,其中有 8份被检血清为阳性 ;2份被检血清为阴性。这一结果与琼脂扩散试验检测结果一致。说明VP1表达蛋白活性达到预期要求。; 张二芹赵心力赵振华孙明陈西钊钱爱东; 关键词：禽脑脊髓炎病毒原核表达 ELISA

猪寡腺苷酸合成酶OAS1a基因荧光定量SYBR Green检测方法的建立与运用被引量：2: 2019年; 为建立一种可以有效检测猪寡腺苷酸合成酶OAS1a表达方法,为检测机体抗病毒免疫提供参考,设计猪寡腺苷酸合成酶OAS1a基因特异荧光定量引物,扩增后连接pMD18-T载体,构建标准质粒,倍比稀释生成标准曲线。结果表明,引物特异,无二聚体,扩增效果良好,运用该方法测定猪繁殖与呼吸综合征病毒感染巨噬细胞中以及干扰素和Poly(I∶C)刺激细胞过程中该基因表达以及在不同猪脏器组织中分布。结果表明,该基因在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染之后表达量逐步升高,36 h达到最高,干扰素及其诱导剂Poly(I∶C)刺激均可以提高该基因表达,组织分布结果表明,该基因在多种组织中都有分布,肝脏和淋巴结中分布较高。; 李存法王瑞宁李华玮冯丽丽张二芹张雅何健赵孟孟; 关键词：荧光定量猪繁殖与呼吸综合征病毒干扰素

乙脑病毒Henan-09-03株E蛋白结构与功能生物信息学分析被引量：2: 2015年; 利用生物信息学软件对Henan-09-03株乙型脑炎病毒(JEV)病毒E蛋白(囊膜蛋白)进行生物信息学分析、预测,为研究JEV的E蛋白基因工程疫苗提供依据。结果表明:E蛋白的分子质量为53 k Da,等电点是7.75,消光系数是66 515,不稳定系数为27.05,疏水平均值为-0.007,无信号肽,有2个跨膜区、27个蛋白修饰位点、5个二硫键、15个蛋白质结合位点,二级结构为α-β混合型、三级结构以同源四聚体形式存在。; 张二芹滕蔓罗俊王瑞宁许倩茹邓瑞广张改平; 关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白生物信息学分析

肉鸡骨髓细胞瘤病的PCR诊断和病理学研究被引量：3: 2004年; 对曾感染ALV-J的某肉种鸡场的5只肉鸡进行了PCR检测和病理学研究。结果:5只鸡中有3例PCR呈阳性,5只鸡的骨髓、肝、脾、肾、肺、十二指肠固有膜等组织中均有不同数量的局灶性或单个散在的髓细胞样瘤细胞,瘤细胞胞浆内含有大量圆球形嗜酸性颗粒,表明该鸡场仍有骨髓细胞瘤病的存在。其中2只鸡还同时有增生性肉芽肿,提示有大肠杆菌的混合感染。; 王金玲赵振华杨玉莹张二芹; 关键词：病理学研究 PCR诊断胞浆骨髓细胞瘤病肉鸡 ALV-J

猪轮状病毒VP6基因的原核表达载体构建和表达被引量：4: 2008年; 根据已报道的猪轮状病毒VP6基因序列设计了2对引物,利用pGEM-T-Easy-VP6重组质粒为模板,经PCR扩增获得了1 194 bp的产物。将扩增片段分别插入到pET5α和pGEX-4T-2构建表达载体,并分别在大肠杆菌BL21(DE3)Plyss和ER2566中表达。结果表明:成功构建了重组质粒,而且该片段在大肠杆菌中也成功表达,获得了大小为44 kD的蛋白。; 张二芹马强王会岩闫明田; 关键词：猪轮状病毒 VP6基因原核表达

高效多基因表达家蚕生物反应器技术平台的构建及其应用: 姚伦广阚云超孙京臣刘宗才刘飞李娜慧丰立张二芹焦铸锦梁子安杨建伟金鹏飞卢楠; 新型高效多基因表达家蚕生物反应器具有构建重组家蚕杆状病毒时间短、效率高、同时表达外源基因数目多、表达量显著提高、生产成本低等特点。在国内外首次建立了适于同时表达多至10个基因的高效多基因表达家蚕生物反应器技术平台并应用于...; 关键词：; 关键词：家蚕生物反应器蛋白饲料