张改平
- 作品数：851 被引量：1,999H指数：18
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技攻关计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的表达及纯化被引量：9
- 2008年
- 利用PCR方法从含禽流感病毒HA基因的质粒T-HA上扩增HA基因,再将其克隆到原核表达载体pET28a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为60kD,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,表达蛋白能与H5亚型AIV阳性血清特异性反应,具有良好的抗原性。ELISA检测结果表明,用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV血凝素抗体具有良好的灵敏性。
- 李清州郝惠芳王丽赵绪永朱礼倩张丽萍邓瑞广张改平
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型原核表达
- 脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响被引量：12
- 2009年
- 研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明，脂多糖浓度（1-1000ng／mL）对IL-1β、TNF-α影响显著（P％0．05）；刺激时间（1-24h）对IL-1β、TNF-α影响显著（P〈0．05），且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。
- 冯丽丽张丽萍张改平乔松林田晓辉万博王秋霞
- 关键词：脂多糖猪肺泡巨噬细胞白细胞介素-1Β肿瘤坏死因子-Α
- 核因子I/A(NFIA)依赖其N末端的DNA结合结构域抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制被引量：2
- 2020年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害世界养猪业,目前仍无有效防控策略,因此探究宿主内源性蛋白拮抗PRRSV的分子机理意义重大。前期试验发现核因子I/A(nuclear factor I/A,NFIA)可以有效抑制PRRSV复制,故本试验以非洲绿猴胚胎肾细胞Marc-145细胞为模型,对NFIA抑制PRRSV复制的分子机理进行了深入探究。首先,构建NFIA的N末端DNA结合结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-ΔN和C末端转录激活结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-ΔC并分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后用qRT-PCR和Western blot的试验方法分别检测病毒N蛋白的RNA和蛋白表达水平。结果显示ΔC仍能有效降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,但ΔN则不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,这表明NFIA的N末端结构域是抑制病毒的关键。其次,对NFIA全长质粒pcDNA3.1-Flag-WT进行N末端结构域内不同功能位点的双碱基突变,分别破坏掉NFIA的促腺病毒复制功能(Mut1,YR86~87WL)、DNA结合功能(Mut2,LR119~120VD)和二聚化功能(Mut3,LF135~136VD),将突变质粒分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后通过qRT-PCR和Western blot检测发现,Mut2和Mut3不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,说明N端结构域的DNA结合功能位点和二聚化功能位点是NFIA抑制PRRSV复制的关键。结果表明,核因子I/A(NFIA)主要依赖其DNA结合结构域的二聚化与DNA结合功能来抑制PRRSV复制。
- 赵旭阳史西保张小转陈静王丽邓瑞广张改平
- 鸡传染性法氏囊病研究进展
- 对鸡传染性法氏囊病的病原及基因组、危害、流行新特点、临床诊断及病理变化特点、疫苗与免疫、综合防治措施等方面的最新研究进行了综述.并对该病疫苗免疫和中西药治疗等方面的研究方向进行了讨论和展望.建议引入'预防为主,合理免疫、...
- 宋海涛张红段艳华李学伍王丽赵光辉张改平
- 关键词：传染性法氏囊病疫苗免疫病理变化鸡传染病中西药治疗
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α(nsp1α)的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需被引量：1
- 2015年
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。NLRP3炎症小体作为先天性免疫的重要组分在机体抗病毒中发挥重要作用。前期研究发现PRRSV能够激活NLRP3炎症小体,但PRRSV是否存在拮抗NLRP3炎症小体的组分还未见报道。本研究首先在缺失内源性炎症小体的HEK293T细胞中,共转染NLRP3、ASC、procaspase-1和pro-IL-1β四个真核表达质粒,建立NLRP3炎症小体的体外研究模型。然后,在该炎症小体模型细胞和猪肺泡巨噬细胞中,转染PRRSV nsp1α的真核表达质粒,结果表明nsp1α能够明显拮抗炎症小体的活化,而进一步的突变试验表明缺失N端锌指(ZF)结构或者突变ZF结构的nsp1α均不能抑制NLRP3炎症小体活化。本研究不仅首次发现了拮抗NLRP3炎症小体活化的PRRSV蛋白——nsp1α,而且发现nsp1α的N端锌指结构是其抑制NLRP3炎症小体活性所必需。本研究进一步发现了PRRSV拮抗天然免疫的新机制,并为PRRSV的防控提供了潜在的分子靶点和理论指导。
- 王超史西保史西保王丽陈静王爱萍王爱萍邓瑞广
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒IL-1Β
- 人FcγRⅡ线性配体结合表位
- 本发明涉及人FcγRII线性配体结合表位，该表位的氨基酸序列为Cys－Thr－Gly－Asn－Ile－Gly－Tyr－Thr－Leu－Phe－Ser－Ser－Lys－Pro－Val－Thr－Ile－Thr－Val，本发明...
- 张改平席俊郭军庆王选年赵东杨艳艳张利娜苗现伟乔松林张红郅玉宝邓瑞广
- 文献传递
- 早孕因子中具有免疫抑制作用的关键活性肽段
- 本发明涉及动物繁殖免疫学领域，特别是涉及哺乳动物早孕因子的部分肽段，该肽段的氨基酸序列为Phe Arg Asp Gly Asp Ile Leu Gly Lys Tyr Val。该肽段为早孕因子的部分合成肽段。本发明首次合...
- 张改平王爱萍权凯赵东杨苏珍陈其新郅玉宝柴书军王选年乔松林邢广旭李清洲赵旭永邓瑞广陈理盾肖曙光
- 文献传递
- 鸡传染性法氏囊病单抗快速诊断试剂盒的研制及初步应用被引量：12
- 2000年
- 以感染传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)的鸡法氏囊组织制备免疫抗原 ,免疫 BALB/c系小鼠 ,取其脾细胞与 NS0浆细胞进行细胞融合 ;以 AC-ELISA筛选阳性细胞克隆 ,经 3次有限稀释克隆化及鉴定 ,获得 2株识别 IBDV不同抗原决定簇的高亲和力单克隆抗体株。以该 2株单克隆抗体制备快速诊断试剂 ,组装了鸡传染性法氏囊病快速诊断试剂盒。该试剂盒由若干 4 0孔酶标板 ,1号酶标液 ( HRP标记 IBDV单抗 )、2号洗涤液、3号显色液 ( TMD显色底物 )、4号显色液 (供氢体 )等反应液 ,0 .0 1 mol/L PBS( p H7.2 )阴性对照、IBDV阳性对照 (提取的 IBDV蛋白 )组成 ,并对试剂盒特异性、敏感性、重复性及稳定性等进行了鉴定。应用该快速诊断试剂盒对来源于不同地区的临床诊断疑似 IBD的法氏囊病料各 2 0份进行了检测 ,并与琼扩试验、常规ELISA检测结果作了比较 ,结果表明 ,该快速诊断试剂盒的检测结果与常规 ELISA的检测结果相似 ,操作程序简便 ,可在 1 0～ 1 5min内完成 。
- 郭军庆张改平杨艳艳李青梅王爱萍阎玉河李学伍邓瑞广
- 关键词：鸡传染性法氏囊病单克隆抗体快速诊断试剂盒
- 猪流行性乙型脑炎弱毒活疫苗的效价测定及保存稳定性研究被引量：4
- 2015年
- 为评估市售商品化猪乙型脑炎(JE)弱毒活疫苗的质量以及实验室条件下疫苗的保存稳定性,采用TCID50效价测定和RT-PCR检测病毒的保守基因(E基因和C/pr M基因)2种方法对2012年市场销售的主要国产疫苗产品进行了质量评估,同时将供试疫苗产品置-30℃保存3、6、9、12个月后分别取样测定乙脑病毒(JEV)TCID50效价。结果表明,市售的猪乙脑同类疫苗中不同品牌产品之间活病毒含量差异较大,最高可达104.33TCID50/头份,但部分产品含量极低,甚至难以检测到活病毒;E基因和C/pr M基因的RT-PCR扩增产物丰度的差异与TCID50测定结果基本一致。多数疫苗产品在有效期内病毒效价基本稳定,同一厂家生产的疫苗保存期越短,其中相对活病毒越多,效价越高。
- 滕蔓罗俊樊剑鸣禹乐乐胡博李秀杰邓瑞广张改平
- 关键词：乙型脑炎疫苗TCID50RT-PCR
- PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后特异性抗体的中和活性分析被引量：1
- 2020年
- 为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体的中和活性,研究以原核表达的重组蛋白GP5和M为抗原分别与霍乱毒素B亚基(CTB)佐剂按10∶1的比例混合制备成CTB黏膜佐剂疫苗,滴鼻免疫小鼠,于首次免疫后0,7,14,21,28,35,42 d收集唾液和血清样品,利用间接ELISA方法分别检测免疫小鼠唾液中特异性抗体IgA,结果均于28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶2;血清中特异性抗体IgG分别于21,28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶800。通过本实验室建立的基于PAM细胞中和试验方法分别检测唾液中特异性抗体IgA和血清中特异性抗体IgG中和滴度均<1∶2,结果表明PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体未达到免疫保护作用的中和抗体水平。
- 许瑞勤孙杨杨孔令昊刘创创李想通李闻魏凤灵杨国宇夏平安张改平
- 关键词：PRRSVGP5M蛋白
