赵孟孟
- 作品数：32 被引量：35H指数：4
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PRRSV XH-GD株NSP9缺失感染性克隆的构建被引量：1
- 2016年
- PRRSV的非结构蛋白NSP9是病毒的一种高度保守的非结构蛋白,为了研究病毒NSP9基因是否为病毒复制所必需基因,将PRRSV XH-GD株的NSP9基因通过融合PCR方法进行缺失,将缺失NSP9基因的感染性克隆转染BHK细胞并进行病毒的拯救。结果表明:不能进行有效的拯救,对照组可以成功拯救。说明NSP9基因的缺失对病毒产生致死的影响,而不是操作手段的问题导致无法成功拯救。
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- 关键词：PRRSV感染性克隆拯救
- 针对nsp9基因的siRNA在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响被引量：3
- 2017年
- 为了验证猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp9基因对PRRSV的复制影响,化学合成针对nsp9基因的siRNA,转染到Marc-145细胞中,接种PRRSV之后分别通过荧光定量和Western blot方法来测定病毒的滴度变化和表达情况。结果发现,转染siRNA的Marc-145细胞中病毒的滴度低于未转染特定siRNA的对照组,同时N蛋白的mRNA和蛋白水平均低于未转染特定siRNA的对照组。初步得出结论nsp9基因为病毒复制关键基因,针对nsp9基因的siRNA会在Marc-145细胞中抑制PRRSV的复制。
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- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒SIRNA滴度
- Nsp9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化被引量：3
- 2016年
- 试验旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）Nsp9基因的实时荧光定量PCR检测方法,并探究其在感染细胞过程中表达量的变化。根据PPRSV Nsp9基因序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的实时荧光定量PCR。结果显示,PRRSV Nsp9基因在1×104~1×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,扩增产物的熔解曲线只有1个单特异峰,无引物二聚体。该方法与猪戊肝病毒（HEV）、猪流感病毒（SIV）、伪狂犬病病毒（PRV）基因组均无交叉反应,可重复性好,组内变异系数小,可用于临床PRRSV检测。在病毒感染细胞过程中,Nsp9基因表达量逐步升高,36h达到最高。本研究为探究病毒复制规律与临床疫苗生产奠定了理论基础。
- 赵孟孟冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR实时荧光定量PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒强、弱毒株Nsp9基因的反向遗传学替换改造被引量：2
- 2016年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用。为了探索Nsp9基因与病毒的毒力、复制能力及细胞嗜性的相关性,本研究利用反向遗传学技术将PRRSV弱毒疫苗毒CH-1R的Nsp9基因进行克隆,酶切后连接到强毒株XH-GD的感染性克隆上,进行病毒的拯救。结果表明,成功构建替换了CH-1RNsp9基因的重组病毒。对重组病毒的生物学特性研究发现,拯救病毒的生长速度和病毒滴度明显高于亲本毒株rXH-GD,但是低于疫苗毒CH-1R,重组毒株的噬斑大小与CH-1R相似,初步推测疫苗株CH-1R的聚合酶有助于提高病毒的滴度。本试验为进一步研究Nsp9基因对病毒毒力的影响奠定基础。
- 赵孟孟钱娟娟崔甜甜冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传学病毒拯救
- NSP9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化
- <正>猪繁殖与呼吸综合征病毒对养猪业危害巨大,未有有效的药物和疫苗,猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用。根据猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因序列设计引物,建立基于S...
- 赵孟孟张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光检测基因表达量
- 文献传递
- 2007-2011年华南地区PRRSV ORF5基因序列分析显示可能出现新亚群
- 引言 猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的高度接触性传染病.为了更好的了解广东地区PRRS病毒分子流行病学情况,在200...
- 谢本雄查云峰张民泽黄震王衡崔进孙龙赵孟孟张桂红
- 针对NSP9基因的siRNA在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响
- <正>猪繁殖与呼吸综合征病毒对养猪业危害巨大,未有有效的药物和疫苗,猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用。为了验证猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因对PRRSV的复制影...
- 赵孟孟张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒小干扰RNA病毒复制
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定被引量：2
- 2016年
- 根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础。
- 赵孟孟张二芹冯松林郭依嘉阮海宇王文佳邢星张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体杂交瘤
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 引言猪繁殖与呼吸障碍综合征已成为危害中国养猪业的主要疫病之一,猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用,并且与毒力密切相关,针对Nsp9的抗体只在病毒复制过程中出现,这对病...
- 赵孟孟张二芹马红芳冯松林郭伊嘉阮海宇王文佳邢星张桂红
- 文献传递
- 猪乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白的原核表达、纯化及活性检测
- 2017年
- 在大肠杆菌BL21(DE3)中表达乙脑病毒(JEV)EDⅢ蛋白、镍柱纯化并检测表达蛋白。采用RT-PCR方法扩增EDⅢ基因片段,构建重组表达载体p ET-28a-EDⅢ并转化到BL21(DE3)菌,经IPTG诱导蛋白表达,表达可溶性产物经NiNTA亲和层析纯化,最后通过SDS-PAGE和Western-Blot检测表达蛋白。结果成功构建原核表达载体p ET-28a-EDⅢ;EDⅢ蛋白在BL21(DE3)菌已表达,经Ni-NTA获得纯化蛋白,并经Western-Blot检测具有反应活性。
- 张二芹滕蔓罗俊赵孟孟许倩茹赵东邓瑞广张改平
- 关键词：乙脑病毒表达蛋白
