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植物芪类合成途径相关酶、基因和调控机制研究进展: 2013年; 植物芪类化合物,是一类具有抗菌植保作用的次生代谢产物,因具有抑菌、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性而越来越受到重视。本文对植物芪类生物合成途径中涉及到的相关酶、基因和代谢调控机制的研究现状和应用系统生物学研究芪类生物合成途径的相关酶、基因的方法进行综述,并讨论了芪类生物合成相关酶、基因研究的重要意义和应用,以期为调节芪类产量、满足药用保健需求及植物防御、作物品质改良提供帮助。; 陆娣朱宽鹏夏晚霞赵树进; 关键词：代谢调控系统生物学生物合成途径

生物催化法研究何首乌二苯乙烯苷生物合成途径中的聚酮反应: 2015年; 目的：利用生物催化法研究中药何首乌活性成分二苯乙烯苷生物合成途径中的聚酮反应。方法：以丙二酰辅酶A和4-香豆酰辅酶A为底物,利用何首乌愈伤组织粗酶进行体外酶催化,采用高效液相色谱和液质联用方法检测催化产物,硫酸铵盐析法和SDS-PAGE对不同组分的粗酶进行分析。结果：生物催化产物和白藜芦醇对照品的色谱峰保留时间均为23 min;在负离子模式下,催化产物质谱图的质荷比为227,与白藜芦醇对照品相吻合;硫酸铵盐析结果显示盐析梯度为40%~70%沉淀的粗酶具有催化活性,并且梯度为50%~60%沉淀的粗酶活性最高,不同硫酸铵盐析梯度沉淀的蛋白SDS-PAGE图谱条带差异较大,梯度为50%~60%沉淀的蛋白中发现分子量约42 k Da的条带,与芪合酶分子量一致。结论：何首乌二苯乙烯苷生物合成途径中聚酮反应的产物为白藜芦醇,并非二苯乙烯苷,从而推测二苯乙烯苷可能是由白藜芦醇转化而来,并非聚酮反应的直接产物。; 雷蕾夏晚霞邵利赵树进; 关键词：生物催化二苯乙烯苷白藜芦醇

双链RNA干扰技术在毛状根体系中对何首乌芪合酶基因Fm STS功能研究中的应用被引量：2: 2012年; [目的]将双链RNA介导的基因沉默与发根农杆菌瞬间表达渗入相结合,为植物功能基因的研究提供一套有效的方法。[方法]构建含gfp基因、CaMV 35S启动子及基于何首乌中芪合酶Fm STS基因序列设计的双链RNA的干扰重组质粒pBIN-35S-正向-反向-GFP(干扰),并将其与空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)分别导入野生型发根农杆菌MSU440中,转化何首乌无菌苗的叶片,诱导生成毛状根。[结果]双链RNA介导的芪合酶Fm STS基因表达沉默,空白对照组二苯乙烯苷含量为2.18 mg/g,是双链RNA干扰组(0.65 mg/g)的3倍多。[结论]应用dsRNA介导的RNAi能有效沉默何首乌Fm STS基因,芪合酶Fm STS基因是何首乌中二苯乙烯苷合成代谢的关键酶基因。; 朱宽鹏夏晚霞赵树进; 关键词：DSRNA 何首乌毛状根次级代谢

何首乌中Ⅲ型聚酮合酶基因FmPKS2的原核表达及鉴定: 2013年; 目的:对传统中药何首乌中Ⅲ型聚酮合酶基因FmPKS2进行原核表达并鉴定重组蛋白酶活性,为研究该酶基因在何首乌有效成分代谢合成及其调控中的功能奠定基础。方法:根据何首乌FmPKS2(GenBank登录号:GQ984139)基因序列,通过PCR扩增其全长的编码区,克隆至原核表达载体PET-28a,构建重组质粒PET-FmPKS2,将其转化原核表达菌株E.coli BL21(DE3),并用IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白可溶性,通过Ni-NTA亲和树脂纯化可溶性蛋白后以丙二酰-COA和香豆酰-COA为底物进行催化反应,TLC鉴定反应产物。结果:经过诱导,重组菌表达分子量为42KD左右的融合蛋白,其中可溶性重组蛋白最优表达条件为IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导时间6h,温度25℃。纯化后的可溶性重组蛋白催化丙二酰-COA和香豆酰-COA得到的产物经TLC鉴定为二苯乙烯类化合物白藜芦醇。结论:成功实现FmPKS2的原核表达且融合蛋白以可溶形式存在,催化反应证明FmPKS2融合蛋白具有二苯乙烯合酶的活性。; 陆娣赵炜夏晚霞赵树进; 关键词：原核表达融合蛋白活性鉴定

何首乌不同部位二苯乙烯苷含量以及芪合酶FM-STS时空表达差异被引量：1: 2012年; 目的:探究何首乌不同部位主要有效成分二苯乙烯苷含量差异以及相对应部位何首乌芪合酶基因FM-STS表达差异。方法:通过液氮碾磨提取广东德庆同一株何首乌根茎叶中的RNA以及用50%稀乙醇过夜浸提芪合物二苯乙烯苷;使用乙腈和水为流动相(体积比为20∶80),利用高效液相色谱分析其二苯乙烯苷含量差异;采用实时荧光定量PCR分析芪合酶基因Fm-STS表达差异,以β-actin作为内参对照,2-△△CT公式计算各组别中FM-STS的含量。结果:根茎叶中芪合物二苯乙烯苷含量依次为14.62mg/g、1.78mg/g和0.47mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量为叶片中最高,根是叶的1/10倍,茎是叶的1/64倍。结论:芪合酶基因FM-STS主要在何首乌叶片中表达,二苯乙烯苷主要在叶片中合成,进而转移到根块中富集。; 朱宽鹏生书晶赵炜陆娣夏晚霞赵树进; 关键词：何首乌二苯乙烯苷芪合酶基因荧光定量PCR

芪合酶基因Fm-STS在何首乌毛状根中的过量表达分析: 2013年; 目的:通过过量表达探究在何首乌中得到的芪合酶基因Fm-STS的功能。方法:由含CaMV 35S启动子驱动以及荧光标记蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的植物转基因基础表达质粒pBIN-35S-GFP构建过量表达质粒pBIN-35S-STS-GFP(阳性),并同空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)均导入野生型发根农杆菌ATCC15834中,转化何首乌外植体(无菌苗叶片),诱导生成毛状根并培养,对毛状根进行高效液相色谱分析芪合物二苯乙烯苷含量变化以及实时荧光定量检测基因Fm-STS表达差异。结果:在过表达组和空白组中毛状根中发根农杆菌Ri质粒中的rolB基因和外源基因GFP均有表达,芪合物二苯乙烯苷含量依次为4.67 mg/g和2.18 mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量:过表达组是空白组的2.41倍。结论:基因FM-STS是何首乌中芪合物二苯乙烯苷生物合成过程中的酶基因,过量表达在基因功能研究中有良好的应用。; 朱宽鹏生书晶赵炜陆娣夏晚霞赵树进; 关键词：何首乌毛状根荧光定量PCR

何首乌二苯乙烯合成酶基因FmSTS2的克隆,鉴定和与二苯乙烯苷表达关系分析被引量：1: 2013年; 克隆并鉴定何首乌中二苯乙烯合成酶基因FmSTS2,并研究其在何首乌各组织的表达与二苯乙烯苷表达的关系,为研究二苯乙烯合成酶基因在二苯乙烯苷合成及其调控中的功能奠定基础。采用互补cDNA末端快速扩增技术克隆目的片段,得到一种二苯乙烯合成酶基因FmSTS2(GeneBank登录号:JX914503),其互补cDNA全长1 644 bp。将FmSTS2连接pET-28a原核表达载体并转化BL21大肠杆菌构建原核表达系统,Ni-NTA亲和树脂纯化可溶性蛋白后以丙二酰-COA和香豆酰-COA为底物进行催化反应,HPLC鉴定反应产物为含有二苯乙烯母核的白藜芦醇,证明FmSTS2是一种二苯乙烯合成酶基因。HPLC测定何首乌各组织二苯乙烯苷含量;RT-PCR检测何首乌的块根,老藤,茎,叶中表达FmSTS2的程度依次降低,与二苯乙烯苷在各个组织的含量高低一致。; 陆娣赵炜夏晚霞赵树进; 关键词：二苯乙烯苷原核表达活性鉴定

何首乌中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（THSG）生物合成途径研究: 何首乌的现代研究最早始于对何首乌的化学成分研究,1975年hata等报道从中国首乌中分离得到了新的二苯乙烯类（芪类）化合物2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（THSG）。THSG目前已做为何首...; 夏晚霞; 关键词：何首乌悬浮细胞系生物合成途径; 文献传递

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