朱宽鹏
- 作品数：8 被引量：17H指数：2
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- 芪合酶基因Fm-STS在何首乌毛状根中的过量表达及dsRNA干扰被引量：9
- 2012年
- 目的:建立一套探究植物基因功能的方法体系,验证由芪合酶基因保守序列通过RACE扩增技术在何首乌中得到的基因Fm-STS的功能。方法:由含CaMV 35S启动子驱动的gfp基因的植物转基因表达基础质粒pBIN-35S-GFP构建过表达质粒pBIN-35S-STS-GFP(阳性)和双链RNA干扰重组质粒pBIN-35S-正向-反向-GFP(阴性),并同空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)均导入野生型发根农杆菌ATCC15834中,转化何首乌外植体,诱导生成毛状根并培养,对毛状根进行高效液相色谱分析以及实时荧光定量检测。结果:在过表达组、空白组和干扰组中毛状根中发根农杆菌Ri质粒中的rolB基因和外源基因gfp均有表达,高效液相色谱法分析芪合物二苯乙烯苷含量依次为4.67mg/g、2.18mg/g和0.65mg/g,在mRNA水平上测试荧光定量检测基因Fm-STS表达量:RNAi组是空白组的1/433.53,过表达组是空白组的2.41倍。结论:结果表明过量表达与双链RNA干扰相结合在植物基因功能研究中有良好的应用,何首乌中芪合酶Fm-STS是二苯乙烯苷主要的合成酶。
- 朱宽鹏赵树进
- 关键词：DSRNA毛状根荧光定量PCR
- 何首乌二苯乙烯苷含量差异性研究被引量：7
- 2014年
- 目的：为筛选二苯乙烯苷含量差异显著的何首乌样本,为通过mRNA水平筛选与二苯乙烯苷合成相关酶基因,研究二苯乙烯苷合成途径打下基础。方法：HPLC,流动相为乙腈∶水（25∶75）;柱温：27℃;流速：1.0mL.min-1;进样量：10μL;紫外检测波长：320nm;进样时间：10min。结果：线性回归方程：y=41.233x＋1.6644,R2=1。结论：对水浴和室温冷浸两种萃取方法的比较发现水浴40min和冷浸12h效果无明显差异;冷浸12h和冷浸30h无显著差异;不同产地何首乌块根二苯乙烯苷含量差异显著（6.4%～0.0011%）,同一产地何首乌含量差异亦存在明显差异（6.4%～1.5%）;同株何首乌不同组织二苯乙烯苷含量存在较大差异,依次是：根〉茎〉叶;新叶〉老叶;老藤〉新藤。
- 赵炜朱宽鹏生书晶姚焱赵树进
- 关键词：何首乌二苯乙烯苷HPLC
- 双链RNA干扰技术在毛状根体系中对何首乌芪合酶基因Fm STS功能研究中的应用被引量：2
- 2012年
- [目的]将双链RNA介导的基因沉默与发根农杆菌瞬间表达渗入相结合,为植物功能基因的研究提供一套有效的方法。[方法]构建含gfp基因、CaMV 35S启动子及基于何首乌中芪合酶Fm STS基因序列设计的双链RNA的干扰重组质粒pBIN-35S-正向-反向-GFP(干扰),并将其与空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)分别导入野生型发根农杆菌MSU440中,转化何首乌无菌苗的叶片,诱导生成毛状根。[结果]双链RNA介导的芪合酶Fm STS基因表达沉默,空白对照组二苯乙烯苷含量为2.18 mg/g,是双链RNA干扰组(0.65 mg/g)的3倍多。[结论]应用dsRNA介导的RNAi能有效沉默何首乌Fm STS基因,芪合酶Fm STS基因是何首乌中二苯乙烯苷合成代谢的关键酶基因。
- 朱宽鹏夏晚霞赵树进
- 关键词：DSRNA何首乌毛状根次级代谢
- 何首乌二苯乙烯苷含量差异性研究
- 目的为筛选二苯乙烯苷含量差异显著的何首乌样本,为通过mRNA水平筛选与二苯乙烯苷合成相关酶基因,研究二苯乙烯苷合成途径打下基础。方法 HPLC进行检测,条件为:流动相为乙腈∶水(25∶75);柱温:27℃;流速:1.0m...
- 赵炜朱宽鹏生书晶姚焱赵树进
- 文献传递
- 植物芪类合成途径相关酶、基因和调控机制研究进展
- 2013年
- 植物芪类化合物,是一类具有抗菌植保作用的次生代谢产物,因具有抑菌、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性而越来越受到重视。本文对植物芪类生物合成途径中涉及到的相关酶、基因和代谢调控机制的研究现状和应用系统生物学研究芪类生物合成途径的相关酶、基因的方法进行综述,并讨论了芪类生物合成相关酶、基因研究的重要意义和应用,以期为调节芪类产量、满足药用保健需求及植物防御、作物品质改良提供帮助。
- 陆娣朱宽鹏夏晚霞赵树进
- 关键词：代谢调控系统生物学生物合成途径
- 何首乌不同部位二苯乙烯苷含量以及芪合酶FM-STS时空表达差异被引量：1
- 2012年
- 目的:探究何首乌不同部位主要有效成分二苯乙烯苷含量差异以及相对应部位何首乌芪合酶基因FM-STS表达差异。方法:通过液氮碾磨提取广东德庆同一株何首乌根茎叶中的RNA以及用50%稀乙醇过夜浸提芪合物二苯乙烯苷;使用乙腈和水为流动相(体积比为20∶80),利用高效液相色谱分析其二苯乙烯苷含量差异;采用实时荧光定量PCR分析芪合酶基因Fm-STS表达差异,以β-actin作为内参对照,2-△△CT公式计算各组别中FM-STS的含量。结果:根茎叶中芪合物二苯乙烯苷含量依次为14.62mg/g、1.78mg/g和0.47mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量为叶片中最高,根是叶的1/10倍,茎是叶的1/64倍。结论:芪合酶基因FM-STS主要在何首乌叶片中表达,二苯乙烯苷主要在叶片中合成,进而转移到根块中富集。
- 朱宽鹏生书晶赵炜陆娣夏晚霞赵树进
- 关键词：何首乌二苯乙烯苷芪合酶基因荧光定量PCR
- 芪合酶基因Fm-STS在何首乌毛状根中的过量表达分析
- 2013年
- 目的:通过过量表达探究在何首乌中得到的芪合酶基因Fm-STS的功能。方法:由含CaMV 35S启动子驱动以及荧光标记蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的植物转基因基础表达质粒pBIN-35S-GFP构建过量表达质粒pBIN-35S-STS-GFP(阳性),并同空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)均导入野生型发根农杆菌ATCC15834中,转化何首乌外植体(无菌苗叶片),诱导生成毛状根并培养,对毛状根进行高效液相色谱分析芪合物二苯乙烯苷含量变化以及实时荧光定量检测基因Fm-STS表达差异。结果:在过表达组和空白组中毛状根中发根农杆菌Ri质粒中的rolB基因和外源基因GFP均有表达,芪合物二苯乙烯苷含量依次为4.67 mg/g和2.18 mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量:过表达组是空白组的2.41倍。结论:基因FM-STS是何首乌中芪合物二苯乙烯苷生物合成过程中的酶基因,过量表达在基因功能研究中有良好的应用。
- 朱宽鹏生书晶赵炜陆娣夏晚霞赵树进
- 关键词：何首乌毛状根荧光定量PCR
- 芪合酶基因Fm-STS在何首乌毛状根中过量表达与dsRNA干扰
- 二苯乙烯苷被2010年中国药典确定为何首乌质量控制的指标性成分，其含有多个酚羟基，在抗氧化、抗衰老、降血脂以及保护心血管方面都有很好的应用前景，潜在的社会需求大（与之有相同结构母核的白藜芦醇苷已被日本、美国等国家作为日常...
- 朱宽鹏
- 关键词：二苯乙烯苷DSRNA
- 文献传递
