姜丽娜
- 作品数：7 被引量：22H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- PHLPP2基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及对舌癌细胞Tca8113增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的构建稳定表达PHLPP2小发夹RNA(shRNA)的Tca8113细胞系,研究敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化水平和Tca8113细胞生长的影响。方法利用RNA干扰(RNAi)技术,设计并合成针对PHLPP2基因的shRNA,并将其克隆到shRNA表达载体PSIH-H1上。经测序成功后,包装病毒并感染舌癌细胞Tca8113,建立敲低PHLPP2的稳定细胞株。通过实时定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹实验检测RNAi的干扰效果。利用Western印迹实验和细胞生长曲线检测敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化及细胞生长的影响。结果经测序证明,成功构建PHLPP2 shRNA真核表达载体。qRT-PCR和Western印迹实验证明,构建的shRNA能有效抑制PHLPP2的表达,并构建敲低PHLPP2基因的Tca8113稳定细胞系。实验表明,敲低PHLPP2可促进细胞的生长并升高Akt Ser473的磷酸化水平。结论成功构建PHLPP2基因的shRNA真核表达载体,转染细胞后能有效抑制PHLPP2基因的表达,且能升高Akt Ser473的磷酸化水平并促进细胞的生长,为进一步研究PHLPP2在舌癌中的功能及机制奠定了基础。
- 林佳佳程龙杜佩云姜丽娜麦宏旭夏靖霖张菊会叶棋浓王恩群
- 关键词：舌癌慢病毒属
- 人TR基因真核表达载体的构建
- 2016年
- 目的构建人端粒酶RNA组分(h TR)的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法以人胚肾293T细胞RNA逆转录得到的c DNA为模板,采用PCR技术扩增出h TR编码序列,将其插入到p CDNA 3.0载体中;将重组质粒与空载体分别转染293T细胞,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测其表达情况,在Hep G2细胞中构建此基因的稳定细胞系并用qRT-PCR检测其效果,通过RNA结合免疫共沉淀(RIP)实验验证其和人端粒酶逆转录酶(h TERT)及角化不良蛋白(dyskerin)的相互作用,通过端粒酶重复序列扩增技术(telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测过表达h TR后Hep G2细胞的端粒酶活性。结果双酶切和测序结果表明,p CDNA3.0-h TR的真核表达载体构建成功;转染293T细胞用qRT-PCR证明成功表达;qRT-PCR证实Hep G2 p CDNA3.0-h TR稳定细胞系筛选成功;RIP实验证实了h TR与h TERT和角化不良蛋白之间存在相互作用;TRAP实验发现过表达h TR并不影响Hep G2细胞的端粒酶活性。结论成功构建了p CDNA 3.0-h TR真核表达载体,为进一步研究以针对h TR为靶标的癌症治疗奠定了基础。
- 营孙阳熊加秀麦洪旭林佳佳姜丽娜程龙叶棋浓
- 关键词：端粒酶HTR基因克隆真核表达
- 敲低SOX2基因抑制乳腺癌干细胞的含量被引量：1
- 2016年
- 目的:构建敲低SOX2基因的慢病毒表达载体,研究敲低SOX2基因对乳腺癌干细胞含量的影响。方法:将SOX2基因短发夹RNA(sh RNA)序列构建到慢病毒表达载体,利用293T细胞包装并获得敲低SOX2基因的病毒,后在MCF-7、T47D细胞系中构建敲低SOX2基因的稳定克隆,Western印迹检测SOX2蛋白的表达水平,q RT-PCR检测SOX2 m RNA水平的变化,利用流式细胞术检测敲低SOX2基因后乳腺癌干细胞含量的变化。结果:构建了表达SOX2基因sh RNA的慢病毒表达载体,在乳腺癌细胞中敲低SOX2基因后,CD44+/CD24-/low及乙醛脱氢酶阳性(ALDH+)细胞的比例明显降低。结论:敲低SOX2基因抑制了乳腺癌干细胞的含量。
- 姜丽娜程龙叶棋浓吕朝晖
- 关键词：SOX2乳腺癌干细胞乙醛脱氢酶
- 多西他赛诱导乳腺癌MCF-7耐药细胞株的建立及耐药机制分析被引量：1
- 2016年
- 目的:建立人乳腺癌MCF-7多西他赛(DTX)耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法:采用逐步提高多西他赛浓度、间歇诱导的方法,建立人乳腺癌MCF-7/DTX体外耐药细胞模型;耐药曲线检测MCF-7/DTX的耐药特性;流式细胞术比较耐药细胞株MCF-7/DTX及亲本细胞株MCF-7肿瘤干细胞含量的差异。结果:耐药曲线显示MCF-7/DTX比亲本细胞株MCF-7耐药;流式细胞分析显示MCF-7/DTX的细胞干细胞含量为2.59%,MCF-7细胞的干细胞含量为1.28%。结论:采用逐步提高浓度、间歇诱导的方法,建立了稳定、耐药性较高的MCF-7/DTX细胞株;干细胞含量升高是MCF-7/DTX的可能耐药机制之一。
- 姜丽娜杜佩云营孙阳麦宏旭程龙叶棋浓吕朝辉
- 关键词：多西他赛乳腺癌耐药干细胞
- 雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响
- 2015年
- 目的:构建特异抑制雌激素受体α(ERα)基因的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响。方法:以人的ERα核酸序列为靶标,根据sh RNA设计原则设计并化学合成特异的sh RNA序列,经退火处理后与p SIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DH5α后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和q RT-PCR检测ERα在m RNA及蛋白水平上的变化,流式细胞术检测敲低ERα能否影响MCF7乳腺癌干细胞的含量。结果:经测序分析表明目标sh RNA序列成功插入载体,q RT-PCR检测稳定克隆,发现该sh RNA能有效抑制目的基因的m RNA转录水平,同时Western印迹检测发现内源性ERα量明显下降;流式细胞术检测发现ERα敲低的MCF7稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制。结论:设计并构建的抑制ERα的sh RNA能够有效抑制ERα的表达,并下调MCF7细胞中乳腺癌干细胞的含量,为研究ERα在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础。
- 杜佩云程龙姜丽娜陈立涵林佳佳叶棋浓苏金为
- 关键词：雌激素受体Α肿瘤干细胞短发夹RNA流式细胞术
- 敲低PES1基因抑制舌癌细胞的生长
- 2015年
- 目的构建稳定表达PES1 shRNA的舌癌细胞系,研究敲低PES1基因对舌癌细胞生长的影响。方法在293T细胞中包装并获得敲低PES1基因的病毒,然后将病毒感染Tca8113、SCC6和SCC15 3种舌癌细胞并筛选稳定克隆,Western印迹检测PES1蛋白的表达水平;利用生长曲线检测敲低PES1对舌癌细胞生长的影响,流式细胞术检测敲低PES1对舌癌细胞周期的影响。结果成功构建稳定表达PES1 shRNA的舌癌细胞系,敲低PES1基因能够抑制舌癌细胞的生长,使细胞周期阻滞在G0/G1期,敲低PES1抑制cyclin D1的表达。结论敲低PES1抑制舌癌细胞的生长,诱导细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制cyclin D1的表达,因此PES1可能成为舌癌基因治疗的靶标。
- 任伟程龙杜佩云姜丽娜营孙阳林佳佳张菊会叶棋浓王恩群
- 关键词：舌肿瘤细胞生长细胞周期细胞周期蛋白D1
- 端粒酶调控研究进展被引量：19
- 2016年
- 端粒酶主要包括催化组分端粒酶逆转录酶(Telomerase reverse transcriptase,TERT)和端粒酶RNA组分(Telomerase RNA component,TERC),二者与其他端粒酶复合体亚基共同组装成具有延伸端粒末端功能的全酶,在细胞衰老和肿瘤发生过程中发挥关键的作用。端粒酶调控的分子机制复杂,调控过程包括组装前各组分的转录调节、转录后调控、翻译后修饰以及亚细胞定位的调控,还包括组装过程中各组分的运输和装配的调控,以及组装后募集到端粒末端的调控。本文从以上几个方面对端粒酶的调控机制进行了综述,旨在为端粒酶相关领域的研究以及开发以端粒酶为靶点的药物奠定理论基础。
- 营孙阳熊加秀麦洪旭林佳佳姜丽娜程龙叶棋浓
- 关键词：端粒酶端粒
