许雯
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：华南农业大学林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省林业科技创新专项资金项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 松墨天牛表皮蛋白基因的克隆及表达分析被引量：9
- 2014年
- 【目的】本研究旨在探索松墨天牛Monochamus ahernatus Hope中昆虫表皮蛋白（ICP）基因在幼虫各组织中和不同发育阶段的时空表达模式。【方法】用cDNA末端快速扩增方法（rapid amplification of cDNAends，RACE）克隆了松墨天牛表皮蛋白基因，用实时荧光定量PCR分析了该基因在幼虫体内和不同虫态中的表达。【结果】克隆获得的松墨天牛幼虫表皮蛋白基命名为MoallCP（GenBank登录号：AGX00998．1），开放阅读框长408bp，编码135个氨基酸，推测得到的蛋白的分子量为14．51kDa。由MoallCP推导的蛋白与桑天牛Apriona germariICP（AAM66718．1）氨基酸序列一致性为79％；与丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennisICP（NP-001161297．1）、果蝇Drosophila mojavensisICP（XP_002005461．1）、玉带凤蝶Papilio polytesICP（BAMl8876．1）等19种昆虫表皮蛋白的氨基酸序列一致性在35％～45％之间；在第10—26位氨基酸位处含有一个跨膜片段。MoallCP在幼虫头、体壁、脂肪体、血细胞、中肠和马氏管均有表达；在蛹和成虫中的表达量分别是在幼虫中的44％和161％。【结论】MoallCP与其他昆虫有较高的氨基酸序列一致性。MoallCP在松墨天牛幼虫内广泛表达；在各个发育阶段中，以成虫中的表达量最高。本文为进一步研究松墨天牛表皮蛋白基因的生理功能和松墨天牛的表皮化学奠定基础。
- 许雯罗淋淋吴华俊韦春梅林同
- 关键词：松墨天牛表皮蛋白基因克隆荧光定量PCRRACE
- 松墨天牛肌钙蛋白T基因全长cDNA克隆及分析被引量：2
- 2015年
- 采用c DNA末端快速扩增(RACE)方法获得了松墨天牛(Monochamus alternatus)肌钙蛋白T基因c DNA,全长1531bp,命名为Ma Tn T(Gen Bank:KJ756400).该基因开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,等电点为9.26,推测的编码蛋白质分子质量为37.29 ku.同源比对结果表明:Ma Tn T与褐飞虱(Nilaparvata lugens)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)等12种昆虫肌钙蛋白氨基酸同源性为87%-88%;构建的系统发育树显示Ma Tn T处于独立分支;Ma Tn T没有信号肽和跨膜螺旋,属于亲水性氨基酸,二级结构包含了螺旋和不规则卷曲两种形式,含有丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位点数分别为8、9、3个.RT-q PCR检测表明,Ma Tn T基因在幼虫、蛹和成虫中均有表达;在成虫触角和足中表达量最高.
- 吴华俊许雯林同
- 关键词：松墨天牛肌钙蛋白基因克隆PCR
- 松墨天牛原肌球蛋白基因的克隆和表达检测被引量：1
- 2015年
- 利用先前构建的c DNA文库和RACE方法,克隆了松墨天牛原肌球蛋白基因的c DNA全长,该序列长1 203 bp,命名为Ma Tm(Gen Bank登录号:KM099072),其中开放阅读框长852 bp,编码283个氨基酸.Ma Tm的氨基酸序列与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)相似性最高,为97%,与家蚕相似性(Bombyx mori)为94%.松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一个分支上.用RT-q PCR分析了Ma Tm的相对表达量,结果显示:蛹和幼虫的表达量低于成虫;成虫足和头的表达量高于对照;在幼虫各组织中均有表达,且差异显著(p<0.05),其中在体壁的表达量最高.
- 罗淋淋蔡紫玲许雯林同
- 关键词：松墨天牛原肌球蛋白基因表达PCR
- 同安钮夜蛾核型多角体病毒Opdi108基因的分子克隆和细胞定位(英文)被引量：1
- 2012年
- 【目的】同安钮夜蛾Ophiusa disjungens(鳞翅目,夜蛾科)是危害桉树的主要害虫之一。同安钮夜蛾核型多角体病毒(OpdiNPV)是从O.disjungens中分离到的新病毒。本研究主要目的是从分子水平上了解该病毒。【方法】对一条PstⅠ的酶切片段进行了克隆、测序和分析。【结果】在基因数据库中通过对碱基序列的比对,发现了一个Ac108的同源基因,命名为Opdi108(GenBank登录号为EU732666)。该基因的开放阅读框含有225对碱基,其编码蛋白与其他已知杆状病毒同源物有16%～37%的氨基酸序列一致性。在起始密码子ATG上游有一个晚期启动子TAAG。C末端含有His-tag的Opdi108基因在大肠杆菌中Escherichiacoli进行了表达,融合蛋白的分子量为28.7kDa。以荧光蛋白EGFP为标记物,构建了Opdi108与EGFP的重组体,利用Bac-to-Bac表达系统实现了与AcMNPV的重组,用该重组病毒vEGFP-Opdi108感染斜纹夜蛾Trichoplusiani细胞。感染24和72h后分别用共聚荧光显微镜观察,发现Opdi108定位在细胞质内。【结论】本研究从分子生物学角度研究OpdiNPV,为进一步利用该病毒防治包括同安钮夜蛾在内的害虫,以及构建重组杀虫剂等奠定基础。
- 常润磊刘莉韦春梅郎国俊许雯毛珊珊林同
- 关键词：核型多角体病毒细胞定位
