李劲
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金解放军总医院医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中高表达体系的建立
- 2008年
- 目的:将带有DNA聚合酶iota(DNA Polymerase iota,Polt)目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,建立DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中的高表达体系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础。方法:用脂质体2000(Lipofectamine2000)将带有目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,通过G418筛选抗性克隆,用一步法提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测出高表达克隆。结果:通过G418筛选筛选出了具有G418抗性的克隆,通过RT-PCR技术检测出高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系。结论:建立了高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础。
- 周虎传杨劲曾益军位全芳何凤田赵谦李劲刘洋李杰
- 关键词：HEK-293细胞DNA损伤DNA修复
- Pol■与移行细胞癌发生关系的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的:检测DNA聚合酶■(Pol■)在膀胱肿瘤细胞株及移行细胞癌组织中的表达,探讨Pol■在移行细胞癌组织中表达的意义。方法:培养膀胱肿瘤细胞株BIU87细胞、T24细胞株,利用RT-PCR方法检测Pol■在膀胱肿瘤细胞株中的表达;收集人膀胱粘膜正常组织、临床膀胱肿瘤和肾盂癌的移行细胞癌组织标本,利用RT-PCR方法检测组织标本中Pol■的表达。结果:Pol■在膀胱肿瘤细胞株中丰富表达,显著高于膀胱正常粘膜组织(P<0.01);Pol■在膀胱肿瘤及肾盂癌组织的表达显著高于膀胱正常粘膜组织的表达(P<0.01),且与移行细胞癌的分级相关。结论:Pol■在移行细胞癌组织中的高表达可能与膀胱肿瘤的发生、发展相关,为进一步研究Pol■在膀胱肿瘤中表达的意义打下基础。
- 赵谦杨劲金锡御陈志文宋波曾益军位全芳季惠翔李劲周虎传
- 关键词：DNA聚合酶移行细胞癌
- Tet-on控制的Luciferase和SupF突变报告基因质粒的构建及其在顺铂致突变作用中的应用研究
- 2008年
- 目的研究TCR在顺铂导致的细胞内DNA损伤和突变过程中的分子机制,并为进一步研究转录偶联修复与突变发生的分子机制提供重要分子生物学依据。方法首先将SupF突变报告基因克隆到带有双向真核启动子的含有Tet调控元件TRE的表达载体pBI-L的多克隆位点(MCS)上,获得pTCR-1,再将SV40ori元件插入pTCR-1载体,最终获得pTCR-2质粒。酶切和DNA测序证实后,用顺铂将pTCR-2进行体外DNA损伤后瞬时转染至Tet-on293细胞,在Dox诱导下培养48h,从细胞内提取质粒,纯化后转化SY204菌株,蓝白斑筛选挑取白色突变斑,计算突变频率并进行DNA测序检测突变频谱。结果经酶切鉴定和测序分析,插入片段长度和序列正确。在Dox诱导下取得了SupF报告基因在转录偶联修复途径中的突变频率与频谱。结论重组的pTCR-2质粒具有在真核细胞中Tet启动的转录活性,应用于顺铂致突变研究中,使转录条件下的突变情况能够得以反映。
- 李劲宋波杨劲陈志文位全芳
- 关键词：质粒顺铂突变频率
- 重组人PCNA突变体的克隆与稳定表达
- 2008年
- 目的:构建重组人PCNA突变体(mutant PCNA,mPCNA)的真核表达质粒,并建立稳定高表达该目的蛋白的宫颈癌细胞系Hela,为进一步研究PCNA在DNA损伤修复中重要的生物学功能奠定基础。方法:将含有定点突变的PCNA cDNA序列克隆到T栽体中,然后再亚克隆到真核表达栽体pCDNA3.1/V5-His A上,构建真核表达载体质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA,稳定转染到Hela细胞中;Western B1otting法检测蛋白的表达情况;白细胞记数法测定细胞的生长速率。结果:真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA经酶切、测序分析与实验设计的序列完全一致;稳定建系后,Western Blotting结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;稳定高表达mPCNA的细胞系与野生型细胞相比两者的生长速率基本一致。结论:成功构建了真核表达质粒pCD- NA3.1/V5-His A-mPCNA;建立了稳定高表达该突变体的Hela细胞系;PCNA突变体的高表达不影响Hela细胞的正常生长。
- 位全芳杨劲曾益军周虎传李劲刘洋李杰
- 关键词：增殖细胞核抗原突变体稳定转染HELA细胞
- Polι在膀胱尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织中mRNA的表达被引量：3
- 2008年
- 目的检测DNA聚合酶ι(Polymerase iota,Polι)在尿路上皮癌细胞株及肿瘤组织的表达,探讨Polι在尿路上皮癌组织表达的意义。方法培养尿路上皮癌细胞株BIU87、T24,反转录聚合酶链式反应(Reverse transciptase-polymer-ase chain reaction,RT-PCR)检测Polι在尿路上皮癌细胞株的表达;收集人膀胱黏膜正常组织及临床膀胱尿路上皮癌、肾盂尿路上皮癌组织标本,检测组织标本中Polι的表达。结果Polι在尿路上皮癌细胞株有丰富表达,显著高于膀胱正常黏膜组织;Polι在膀胱尿路上皮癌及肾盂癌组织的表达显著高于膀胱正常黏膜组织的表达(P<0.01),并与尿路上皮癌的分级有关。结论Polι在尿路上皮癌组织的高表达可能与尿路上皮癌的发生、发展有关。
- 赵谦曾益军杨劲金锡御陈志文宋波位全芳季惠翔李劲周虎传
- 关键词：DNA聚合酶POLL尿路上皮癌
- 泌尿生殖肿瘤细胞对顺铂损伤敏感性与DNA修复能力变异的相关性研究
- 目的:细胞正常的DNA修复功能是细胞维持遗传稳定性的重要机制,细胞基因组DNA受到内源和外源因素损伤后,将通过不同信号途径产生DNA修复,旁路复制或凋亡等生物学效应。因此
- 陈志文宋波李劲徐志刚
- 文献传递
