位全芳
- 作品数：23 被引量：36H指数：4
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金解放军总医院医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- DNA聚合酶Polι在紫外损伤诱导基因组高突变中的作用
- 2008年
- 目的研究DNA聚合酶Polι在紫外损伤耐受及基因组高突变产生中的生物学作用。方法紫外线照射稳定高表达DNA聚合酶iota(DNA polymerase iota,Polι)的HEK293T细胞系(Polι-HEK293T),MTT法检测紫外损伤后细胞的存活率;supF报告基因体内突变检测系统检测基因的突变频率。结果MTT法结果提示紫外照射后稳定高表达Polι的细胞系与对照组相比细胞存活率没有显著差异;supF报告基因结果显示稳定高表达Polι的细胞系其基因突变频率高于对照组细胞。结论DNA聚合酶Polι的高表达对紫外损伤后细胞的存活率没有显著影响,不能提高细胞对紫外损伤的耐受,在紫外损伤中polι主要参与诱发体内基因组高突变的产生。
- 曾益军周虎传位全芳赵谦杨劲
- 关键词：突变
- 梨果飘香
- 2014年
- 样品：鲑鱼精子表面形态
电镜型号：日立S-3400N
制作方法：鲑鱼精子样品经常规梯度酒精脱水、叔丁醇干燥，后离子溅射仪镀膜，扫描电镜观察其形态。
作品说明：精子的头部呈椭圆型，就像一个个成熟的梨子，黄灿灿、绿油油的，非常形象的展现了梨子的外貌特征；精子的尾巴就像梨树的枝桠，纵横交错，一派丰收的繁荣景象。
- 路菊位全芳
- 关键词：扫描电镜观察梨果表面形态叔丁醇椭圆型
- 六甲基二硅胺烷(HMDS)在细胞与生物材料共培养及扫描电镜样本制备中的应用
- 随着扫描电镜的不断发展和分辨率的提高,其在生物学及材料科学方面也得到了广泛的应用.扫描电镜主要用于观察样品的表面形貌和微小形态特征,因此通过观察其细胞与生物材料共培养样品,第一原则强调尽可能完好的保持活体状态下细胞和生物...
- 位全芳糜建红陶忠芬黄文琪路菊
- PCNA泛素化修饰对DNA损伤应答途径的调控
- 2014年
- 机体细胞在多种化学物质和内外环境不断攻击下会诱发DNA损伤。为了维持基因组的稳定性,细胞内拥有一系列完善而精确的细胞应答机制来保护基因组DNA的完整性。细胞首先通过DNA损伤检测点,然后通过一系列细胞信号转导通路,启动细胞周期阻滞,进而介导细胞修复或凋亡。大量研究表明泛素化作为一种重要的蛋白质翻译后修饰方式,参与调控了多种细胞生理过程。近期研究表明,DNA损伤导致复制应激可诱发PCNA的翻译后泛素化修饰,泛素化修饰的PCNA可能参与了多种DNA损伤应激过程,影响细胞选择不同的DNA损伤应答途径,导致细胞截然不同的转归。因此,更好地了解PCNA泛素化的作用及其影响DNA损伤应答通路可为我们更深入地了解人类细胞如何调控异常的DNA代谢过程和癌症的发生和发展机制提供依据。
- 常宇骁朱琼杨劲位全芳
- 关键词：PCNA泛素化SUMO
- 不同制样溶剂及基底对纳米银线扫描电镜观测效果的影响被引量：1
- 2015年
- 目的选用不同溶剂和基底进行纳米银线扫描电镜样品制备,探讨不同制样溶剂及基底对纳米银线扫描电镜观测的影响。方法选用去离子水和乙醇作为纳米银线的分散剂,样本充分混匀后,分别滴加在盖玻片和云母片上进行制样,用扫描电镜观察效果。结果以去离子水对样品进行分散,盖玻片为基底的制样方法,纳米银线出现成片的聚积和重叠。而采用乙醇为分散剂,云母片为基底进行制样时,纳米银线分散均匀,易于外部形貌的观测。结论选择乙醇为溶剂,云母片为基底,制样方便快捷,能够获得理想的扫描电镜观测效果。
- 路菊黄毅位全芳
- 关键词：溶剂基底扫描电镜
- lncRNA PACER促进脓毒症急性肺损伤炎症反应的实验研究被引量：8
- 2019年
- 目的探讨lncRNA PACER对小鼠脓毒症急性肺损伤炎症反应的促进作用。方法分离和培养急性肺损伤和健康非吸烟者的肺泡巨噬细胞,以及获取细菌脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织,采用qRT-PCR方法检测lncRNA PACER的表达;过表达或敲低PACER后,ELISA方法检测THP-1和RAW264.7细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达;对LPS所致ALI小鼠,尾静脉注射PACER siRNA慢病毒后,ELISA检测小鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6的表达,HE染色观察肺组织病理学变化。结果 ALI患者肺泡巨噬细胞和ALI小鼠肺组织中lncRNA PACER表达均显著升高(P<0.01);细胞过表达PACER后,细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达升高,而敲低PACER后,炎性因子TNF-α、IL-6的表达则降低(P<0.01); ALI小鼠敲低PACER后,小鼠肺组织和血清中炎性因子TNF-α、IL-6的表达均显著降低(P<0.01),肺组织损伤程度明显减弱。结论 lncRNA PACER可显著促进脓毒症急性肺损伤炎症反应,为明确lncRNA PACER作为ALI防治的靶标提供了依据。
- 史柳嫣辛伟位全芳甘志新王丹胡明冬
- 关键词：长链非编码RNAPACER脓毒症急性肺损伤炎性因子
- 人PCNA泛素化修饰在顺铂诱导的DNA损伤应答反应中作用的实验研究
- 细胞在多种内外环境及化学物质不断攻击下会诱发DNA损伤。为了维持基因组的稳定性,细胞内拥有一系列相互独立又密切联系的完善而精确细胞应答机制来应对这些损伤。细胞首先通过DNA损伤检查点,启动细胞周期阻滞,进一步实施DNA修...
- 位全芳
- 关键词：PNCA泛素化修饰稳定转染HELA细胞顺铂
- 文献传递
- Tet-on控制的Luciferase和SupF突变报告基因质粒的构建及其在顺铂致突变作用中的应用研究
- 2008年
- 目的研究TCR在顺铂导致的细胞内DNA损伤和突变过程中的分子机制,并为进一步研究转录偶联修复与突变发生的分子机制提供重要分子生物学依据。方法首先将SupF突变报告基因克隆到带有双向真核启动子的含有Tet调控元件TRE的表达载体pBI-L的多克隆位点(MCS)上,获得pTCR-1,再将SV40ori元件插入pTCR-1载体,最终获得pTCR-2质粒。酶切和DNA测序证实后,用顺铂将pTCR-2进行体外DNA损伤后瞬时转染至Tet-on293细胞,在Dox诱导下培养48h,从细胞内提取质粒,纯化后转化SY204菌株,蓝白斑筛选挑取白色突变斑,计算突变频率并进行DNA测序检测突变频谱。结果经酶切鉴定和测序分析,插入片段长度和序列正确。在Dox诱导下取得了SupF报告基因在转录偶联修复途径中的突变频率与频谱。结论重组的pTCR-2质粒具有在真核细胞中Tet启动的转录活性,应用于顺铂致突变研究中,使转录条件下的突变情况能够得以反映。
- 李劲宋波杨劲陈志文位全芳
- 关键词：质粒顺铂突变频率
- DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中高表达体系的建立
- 2008年
- 目的:将带有DNA聚合酶iota(DNA Polymerase iota,Polt)目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,建立DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中的高表达体系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础。方法:用脂质体2000(Lipofectamine2000)将带有目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,通过G418筛选抗性克隆,用一步法提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测出高表达克隆。结果:通过G418筛选筛选出了具有G418抗性的克隆,通过RT-PCR技术检测出高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系。结论:建立了高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础。
- 周虎传杨劲曾益军位全芳何凤田赵谦李劲刘洋李杰
- 关键词：HEK-293细胞DNA损伤DNA修复
- 增殖细胞核抗原突变体的稳定高表达对HeLa细胞顺铂敏感性的影响被引量：2
- 2008年
- 目的建立稳定高表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)或突变体PC-NA(mutant PCNA,mPCNA)目的蛋白的宫颈癌细胞系HeLa细胞,观察PCNA在顺铂诱导的DNA损伤修复中的作用。方法采用显性负突变策略,通过构建重组人PCNA或mPCNA的真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-PCNA(His-PCNA)和pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA(His-mPCNA),稳定转染到HeLa细胞中,G418筛选建立稳定高表达目的蛋白的HeLa细胞系;Western印迹法检测蛋白的表达情况;MTT法测定顺铂损伤后不同细胞系的细胞存活率。结果真核表达质粒经酶切、测序分析与实验设计完全一致;稳定建系后,Western印迹结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;MTT结果显示稳定高表达突变体PCNA的细胞系与对照组相比,其细胞存活率呈明显下降趋势。结论成功构建了真核表达质粒His-PCNA和His-mPC-NA;建立了稳定高表达该质粒的HeLa细胞系;稳定高表达突变体PCNA的细胞系对顺铂损伤更敏感。
- 位全芳曾益军杨劲周虎传刘洋徐志刚袁方赵友光
- 关键词：增殖细胞核抗原稳定转染HELA细胞顺铂
