李然
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
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- H9N2流感病毒HA蛋白跨膜区置换增加交叉免疫原性
- H9N2亚型流感病毒是目前我国鸡群中阳性率最高的流感病毒,给我国养禽业造成了巨大的影响.先前实验表明,血凝素(HA)跨膜区(TM)半胱氨酸突变会影响流感病毒的生物学特性.同时,小鼠实验显示了置换为H3 HA TM的重组H...
- 魏颖薛春宜曹永长刘康王洋刘启亮徐舜周健强郑婧李然尹丽娟
- 关键词：流感病毒HA蛋白
- 文献传递
- 华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位
- 2011年
- 目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。
- 邓传欢余新炳王乐旬黄灿黄艳李文芳李然徐劲
- 关键词：华支睾吸虫生物信息学克隆
- H9N2流感病毒HA蛋白跨膜区置换增加交叉免疫原性（英文）
- 流感是一种经呼吸道传播的急性传染性疾病,极大地威胁着人类健康和全球经济。H9N2亚型流感病毒是目前我国鸡群中阳性率最高的流感病毒,给我国养禽业造成了巨大的影响。先前实验表明,血凝素(HA)跨膜区(TM)半胱氨酸突变会影响...
- 魏颖刘康王洋刘启亮徐舜周健强郑婧李然尹丽娟薛春宜曹永长
- 关键词：A型流感病毒H9N2跨膜区生物学特性
- 文献传递
- 华支睾吸虫钙调理蛋白的克隆表达、组织定位及功能的初步研究
- 2013年
- 目的克隆和原核表达华支睾吸虫钙调理蛋白(CsCALP),并初步研究其功能及免疫学意义。方法利用生物信息学相关软件分析CsCALP蛋白的基本理化特征和三维结构;将CsCALP基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,诱导表达CsCALP蛋白并用镍离子亲和层析柱进行纯化;通过凝胶覆盖(Gel overlay)试验鉴定纯化的CsCALP蛋白与F-Actin的结合能力;使用纯化的CsCALP蛋白免疫SD大鼠,获得抗血清,通过Western blot分析其免疫学特性;应用免疫荧光化学法观察华支睾吸虫CsCALP蛋白在成虫的定位。结果 CsCALP基因编码序列长度为1086bp,编码361个氨基酸,理论分子质量单位为39.7708ku,具有1个calponin homology结构域和5个calponin-like repeat结构域;该基因在大肠埃希菌BL21/DE3中可被表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别;CsCALP蛋白主要定位于虫体富含肌肉组织,包括口、腹吸盘、咽部以及皮下肌层;Gel-overlay试验显示CsCALP蛋白能与F-Ac-tin结合。结论构建的pET-28a(+)-CsCALP能在大肠埃希菌中表达可溶性CsCALP蛋白。该蛋白具有良好的抗原活性,主要分布在华支睾吸虫成虫肌肉组织中,可能为分泌排泄抗原的组分之一。
- 李然余新炳陈庭金邓传欢王乐旬李文芳黄艳徐劲
- 关键词：华支睾吸虫克隆免疫组化
- 一种华支睾吸虫亲肌素样基因的克隆、表达与免疫学功能初步研究被引量：1
- 2012年
- 目的对新发现的华支睾吸虫亲肌素样蛋白(CsMLP)进行克隆、原核表达,初步了解其重组产物的免疫学功能。方法应用生物信息学分析软件,分析CsMLP的序列特点和基本理化特征;将CsMLP基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,诱导表达并用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,用纯化的CsMLP蛋白免疫SD大鼠获得抗血清;用Westernblot进行免疫反应性及免疫原性分析;应用免疫荧光方法观察CsMLP在华支睾吸虫成虫的定位。结果该cDNA序列全长为900bp,编码190个氨基酸,具有Calponin功能域;PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-CsMLP重组质粒构建成功;SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中获得高效表达,分子量为21300Mr;经亲和层析获得了高纯度蛋白;重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清、感染了华支睾吸虫的SD大鼠血清识别;CsMLP主要定位于虫体富含肌肉组织的口、腹吸盘、咽部,在表膜、肠壁也有分布。结论 CsMLP可在原核表达系统中呈现高效的可溶性表达,具有免疫原性,其主要分布在华支睾吸虫肌肉丰富的组织。
- 李文芳黄艳余新炳胡月李然徐劲
- 关键词：华支睾吸虫基因克隆免疫原性免疫组化
