熊波
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：武汉市医学科学研究所更多>>
- 发文基金：武汉市卫生局科研项目湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Kozak序列(+4G)对携带EGFP标签的人淀粉样前体蛋白751在CHO细胞中表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:观察Kozak序列(+4G)对稳定转染的人淀粉样前体蛋白(hAPP751)-EGFP融合真核表达载体在CHO细胞中表达的影响,为APP的水解代谢研究提供细胞模型。方法:分别将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段亚克隆入pEGFP-N1表达载体,得到pEGFP-hAPP751(+4G)和pEGFP-hAPP751重组质粒,转染CHO细胞,通过G418筛选稳定转染细胞株,再用倒置荧光显微镜挑取绿色荧光强的细胞进行亚克隆,并观察融合蛋白的表达强度和细胞定位,最后用EGFP抗体通过Western印迹检测融合蛋白。结果:PCR、酶切和测序证明将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段分别连入了真核表达载体pEGFP-N1中;荧光显微镜下观察pEGFP-hAPP751(+4G)稳定转染细胞的细胞膜和细胞质产生较强的绿色荧光,其中在细胞质中成不均匀颗粒状分布,Western印迹检测到相对分子质量约156 000的融合表达蛋白,与预期相符;pEGFP-hAPP751转染细胞,其绿色荧光十分微弱且在整个细胞均匀分布,Western印迹检测到相对分子质量约26 000的EGFP,但检测不到预期的hAPP751-EGFP融合表达蛋白。结论:Kozak序列(+4G)可以明显促进hAPP751的表达,获得稳定转染且高水平融合表达hAPP751-EGFP的细胞株。
- 黄巍庞蓓蓓熊波周婷刘桥
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白
- 抗人APPβ水解位点单克隆抗体的制备及其初步鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的:制备能特异识别结合人APPβ水解位点的单克隆抗体(mAb)。方法:以APPβ水解位点短序列多抗原肽免疫BALB/c小鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA和有限稀释法进行筛选和亚克隆,获得能分泌针对APPβ水解位点mAb的杂交瘤,采用ELISA、Western blot等方法对其特异性进行检测。结果:获得2株稳定分泌抗人APPβ水解位点mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7和2H10,其Ig亚类分别为IgGl和lgG2b。Western blot显示2株抗体可以与全长APP结合。结论:成功制备了能特异识别结合APPβ水解位点的mAb,为进一步研究其对β位点封闭功能和构建小分子抗体奠定基础。
- 黄巍庞蓓蓓周婷熊波周贝刘桥
- 关键词：APP杂交瘤单克隆抗体阿尔茨海默病
