黄巍
- 作品数：24 被引量：27H指数：3
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- 高效液相色谱法测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的对高效液相色谱法(HPLC)测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)的抑制作用进行方法改进,以提高其准确度和普及性,并用于测定抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的抑制作用。方法TACE与多肽底物经37℃孵育15 min后,加入Ala-Dpa作为内标物,用高效液相色谱法进行分析。以55%甲醇水溶液为流动相,检测波长353 nm。根据剩余底物与内标物的色谱峰面积比,从校准曲线中得出底物的转化量,据此计算TACE的酶活性。结果底物与内标物的色谱峰面积比与底物浓度呈良好线性关系,相关系数为0.996 8,线性范围10μmol/L至400μmol/L。精密度试验表明,采用内标法定量,精密度得到显著改善。经测定,抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的半数抑制浓度IC50分别为317.5 nmol/L和175.8 nmol/L。结论以Ala-Dpa作内标物,HPLC测定TACE酶活性,为TACE抑制剂的筛选提供了一种更准确、更实用的方法。
- 申玲玲顾久玲黄巍赵云斌
- 关键词：高效液相色谱法内标法
- 酸性同功铁蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究
- 1999年
- 目的：探讨抗不同组织酸性同功铁蛋白（ＡＩＦ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的免疫学特性。方法：应用聚焦层析技术分别从人胎盘和原发性肝癌组织中分离出低ｐＩ值的ＡＩＦ，常规制备ＭｃＡｂ和进行免疫组织化学测定。结果：共筛选到５株抗人胎盘ＡＩＦ和２株抗人原发性肝癌（ＰＨＣ）ＡＩＦ的ＭｃＡｂ，即２ｆ８、４ｇ７、４ｇ８、５ｃ３、７ａ９和４ｃ９、４ｅ２。抗ＡＩＦＭｃＡｂｓ均与各自ＡＩＦ分子上不同抗原决定簇结合，其中针对不同组织ＡＩＦ的ＭｃＡb５ｃ３和４ｅ２作用于同一抗原决定簇。使用ＭｃＡｂ２ｆ８和４ｃ９，对正常肝组织、慢性肝炎与肝硬化和ＰＨＣ肝组织进行了免疫组织化学检查，其阳性率分别为２ｆ８：０、１０．０％、７６．３％；４ｃ９：０．６．７％、８１．６％。结论：人胎盘和ＰＨＣ组织ＡＩＦ中存在着共同的抗原决定簇，抗ＰＨＣＡＩＦＭｃＡｂ在免疫诊断中优于抗人胎盘ＡＩＦＭｃＡｂ。
- 游上游张楚瑜黄巍易先平
- 关键词：单克隆抗体免疫组织化学
- 敲低阿霉素心肌病大鼠心肌细胞ADAM10后大鼠心功能的改善及机制被引量：3
- 2018年
- 目的建立阿霉素心肌病动物模型,观察解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)小干涉RNA(siRNA)重组慢病毒对神经钙黏素(N-cadherin)加工水解途径的调控。方法 SD大鼠腹腔注射阿霉素,建立阿霉素心肌病大鼠模型。将ADAM10 siRNA重组慢病毒进行心内注射,分为模型组、重组慢病毒治疗组、空白载体组及正常对照组。分离原代心肌细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,确定感染效率。超声检测各组大鼠心功能,HE染色观察心肌组织病变情况,Western blot法检测心肌细胞N-cadherin在ADAM10水解后产生的C末端片段1(CTF1)的蛋白水平,免疫组织化学染色检测心肌组织N-cadherin的表达和分布。结果原代培养的感染后心肌细胞可见大量GFP表达,说明慢病毒成功感染心肌细胞;与阿霉素心肌病组相比,ADAM10 siRNA重组慢病毒治疗组死亡率下降,心功能及心肌组织形态明显改善,心肌细胞N-cadherin蛋白水平增加并主要定位于细胞表面、CTF1蛋白水平降低。结论敲低ADAM10水平,增加阿霉素心肌病大鼠心肌细胞N-cadherin的表达、降低CTF1的表达,改善心功能。
- 李小鸥谢莉莉何兵黄巍
- 关键词：阿霉素心肌病慢病毒
- 靶向沉默ADAM10基因对心肌细胞N-cadherin加工的影响被引量：3
- 2012年
- 目的:研究心肌细胞中解整合素金属蛋白酶家族(ADAMs)成员ADAM10在神经型钙黏蛋白(N-cadherin)底物加工过程中的重要性,为探求该加工途径在维持心肌组织结构形态和完整性中的作用打下基础。方法:将质粒sc-270165 ADAM10 siRNA(r)转染入大鼠心肌细胞(H9c2),建立ADAM10稳定沉默的心肌细胞株。通过Western blotting检测心肌细胞N-cadherin及其C末端片段(CTF)的蛋白表达,流式细胞术检测心肌细胞表面N-cadherin的表达。利用黏附实验检测其对细胞黏附能力的影响。结果:与阴性对照组相比,ADAM10基因沉默组心肌细胞N-cadherin蛋白表达提高,CTF蛋白表达减少;细胞表面N-cadherin的表达增多,心肌细胞黏附能力提高。结论:心肌细胞中ADAM10在N-cadherin的加工水解过程中可能发挥了作用。
- 李小鸥黄巍陈亚隽周丽荣
- 关键词：ADAM10细胞黏附
- 抗人APPβ水解位点单克隆抗体的制备及其初步鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的:制备能特异识别结合人APPβ水解位点的单克隆抗体(mAb)。方法:以APPβ水解位点短序列多抗原肽免疫BALB/c小鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA和有限稀释法进行筛选和亚克隆,获得能分泌针对APPβ水解位点mAb的杂交瘤,采用ELISA、Western blot等方法对其特异性进行检测。结果:获得2株稳定分泌抗人APPβ水解位点mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7和2H10,其Ig亚类分别为IgGl和lgG2b。Western blot显示2株抗体可以与全长APP结合。结论:成功制备了能特异识别结合APPβ水解位点的mAb,为进一步研究其对β位点封闭功能和构建小分子抗体奠定基础。
- 黄巍庞蓓蓓周婷熊波周贝刘桥
- 关键词：APP杂交瘤单克隆抗体阿尔茨海默病
- 心肌钙蛋白T单克隆抗体制备及应用被引量：4
- 2000年
- 目的 人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体制备及在心肌梗死诊断中的初步应用。方法 在研究心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)提纯的基础上成功地制备出 3株特异性抗cTnT单克隆抗体 ,用其中的 2株Mcab建立了检测cTnT双单克隆抗体的夹心ELISA法。结果 对 30名健康献血员和 32例心肌梗死患者血中cTnT水平进行临床检测 ,正常人血清cTnT浓度平均为 (0 .12 7± 0 .0 84) μg L ,最低为 0 ,最高为 0 .42 μg L ,以血清cTnT >0 .40 μg L为诊断心肌梗死的临界值。 32例患者血清cTnT值平均为 (2 .10 8± 1.974) μg L ,患者血清cTnT分别用BM试剂盒及ELISA法检测 ,经统计学处理 ,二者相关系数为 0 98,符合临床检测要求。结论 该法灵敏度、准确度和精确度较高 。
- 张琳游上游黄亦钧胡远贵黄巍杨军
- 关键词：肌钙蛋白T急性心肌梗塞单克隆抗体
- Kozak序列(+4G)对携带EGFP标签的人淀粉样前体蛋白751在CHO细胞中表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:观察Kozak序列(+4G)对稳定转染的人淀粉样前体蛋白(hAPP751)-EGFP融合真核表达载体在CHO细胞中表达的影响,为APP的水解代谢研究提供细胞模型。方法:分别将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段亚克隆入pEGFP-N1表达载体,得到pEGFP-hAPP751(+4G)和pEGFP-hAPP751重组质粒,转染CHO细胞,通过G418筛选稳定转染细胞株,再用倒置荧光显微镜挑取绿色荧光强的细胞进行亚克隆,并观察融合蛋白的表达强度和细胞定位,最后用EGFP抗体通过Western印迹检测融合蛋白。结果:PCR、酶切和测序证明将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段分别连入了真核表达载体pEGFP-N1中;荧光显微镜下观察pEGFP-hAPP751(+4G)稳定转染细胞的细胞膜和细胞质产生较强的绿色荧光,其中在细胞质中成不均匀颗粒状分布,Western印迹检测到相对分子质量约156 000的融合表达蛋白,与预期相符;pEGFP-hAPP751转染细胞,其绿色荧光十分微弱且在整个细胞均匀分布,Western印迹检测到相对分子质量约26 000的EGFP,但检测不到预期的hAPP751-EGFP融合表达蛋白。结论:Kozak序列(+4G)可以明显促进hAPP751的表达,获得稳定转染且高水平融合表达hAPP751-EGFP的细胞株。
- 黄巍庞蓓蓓熊波周婷刘桥
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白
- APPβ分泌酶切割位点特异性单链抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的制备针对人淀粉样蛋白前体(APP)β分泌酶切割位点的特异性单链抗体(ScFv),并进行鉴定。方法设计扩增单克隆抗体细胞株重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗人APPβ分泌酶切割位点单克隆抗体细胞株中扩增出VH和VL基因片段,然后通过重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成ScFv基因片段,再将其亚克隆入原核表达载体pET-28a中,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,目的蛋白经镍柱纯化和复性后,用SDS-PAGE、ELISA和Western blot等方法对其检测分析。结果成功从一株抗人APPβ位点单克隆抗体细胞株2H10中扩增出VH和VL并拼接成ScFv片段,片段长744 bp,编码248个氨基酸。PCR、酶切和测序表明表达载体构建成功,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导可以表达出约29 ku的目的蛋白,主要为包涵体形式,经镍柱纯化和复性后,获得纯度达90%以上的ScFv蛋白,ELISA和Western blot检测表明可溶性ScFv可以与人APPβ分泌酶切割位点序列短肽和全长APP结合。结论成功构建并表达人APPβ分泌酶切割位点的特异性单链抗体,为进一步研究其生物学活性奠定基础。
- 黄巍周丽荣周婷孙红霞黄晓刚刘桥
- 关键词：Β分泌酶单链抗体阿尔采末病Β淀粉样蛋白
- 层粘连蛋白的ELISA检测
- 1996年
- 应用本室制备的两株抗人胎盘层粘连蛋白（ＬＮ）单克隆抗体３Ａ１５和１Ｂ５及ＬＮ标准，建立了测定血清ＬＮ的双单抗夹心ＥＬＩＳＡ法。本法稳定，检测下限为１０μｇ／Ｌ，在１０～５００μｇ／Ｌ之间呈线性关系。两份样本批内平均ＣＶ为６．８％和９．２％，批间ＣＶ为５．６％和６．１％，回收率平均为８８％。
- 黄巍游上游
- 关键词：层粘连蛋白ELISA单克隆抗体肝纤维化血清
- 白藜芦醇通过SIRT1激活ADAM10促进APPα代谢被引量：1
- 2022年
- 目的:探讨白藜芦醇可否通过SIRT1激活解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)促进APPα代谢抑制Aβ分泌。方法:选取过表达人瑞典突变淀粉样前体蛋白APP695sw的细胞模型,分别设立DMSO空白对照组、SIRT1激活剂白藜芦醇组和SIRT1抑制剂EX527组。给药后,ELISA法分别检测细胞培养上清中sAPPα和Aβ的含量,免疫印记Western Blot法检测细胞SIRT1和ADAM10的蛋白水平。结果:与对照组比较,白藜芦醇组细胞培养上清sAPPα的含量增高,Aβ含量下降,sAPPα/Aβ比值增大,细胞SIRT1和ADAM10蛋白水平增高;而抑制剂EX527组与对照相比,细胞培养上清sAPPα的含量降低,Aβ含量升高,sAPPα/Aβ比值减小,细胞SIRT1和ADAM10蛋白水平降低;抑制剂下调SIRT1后各项指标与激动剂组呈现相反的趋势(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过SIRT1激活ADAM10,促进APP进行α非淀粉样代谢途径,增强sAPPα分泌并抑制Aβ产生。
- 黄巍周曦周丽荣卢坤
- 关键词：白藜芦醇ADAM10淀粉样前体蛋白Β淀粉样肽
