孙霞
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：潍坊医学院口腔医学研究所更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转录因子Ets-1表达载体的构建及调控小鼠成釉细胞MMP-20的表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建转录因子Ets-1的pcDNA331／myc-HisA真核表达载体，转染小鼠成釉细胞，检测Ets-1调控小鼠成釉细胞MMP-20的表达，为研究Ets-1在牙釉质发育过程中的重要作用奠定基础。方法以从小鼠成釉细胞中提取的总RNA逆转录所得eDNA为模板，用RT-PcR法扩增得出含有kpnI和BamHI的Ets-1目的基因连接到pcDNA3．1／myc-HisA真核表达载体上。将重组质粒瞬时转染到小鼠成釉细胞中观察，并通过实时定量RT-PCR的方法检测MMP-20mRNA的相对表达量。结果①经过PCR引物扩增得到-约1399bp的基因片段，重组质粒pcDNA3．1／myc．HisA-Ets-l双酶切进行初步鉴定后，与GenBank登录基因对比显示生物公司测序结果完全正确。（爹重组质粒pcDNA3．1／myc-HisA-Ets-1转染小鼠成釉细胞后（以转染空载体pcDNA3．1／myc-HisA作为对照），实时定量RT-PCR检测MMP-20tuRNA的相对表达量上升明显。结论成功构建了Ets-1的真核表达载体，初步研究证明小鼠成釉细胞核中Ets-1可以上调MMP-20基因表达水平。
- 孙霞付显俊李江高玉光
- 关键词：转录因子ETS-1RT-PCR实时定量RT-PCR转染
- 转录因子Sp1基因克隆及表达载体的构建被引量：1
- 2012年
- 目的通过转录因子Sp1基因克隆以及真核表达载体的构建，为探讨转录因子Sp1在牙釉质发育的分子调控奠定基础。方法根据引物设计原则设计Sp1基因的PCR引物，以从小鼠成釉细胞中提取的总RNA逆转录所得eDNA为模板，进行PCR扩增，用PCR法扩增得出含有EcoRⅠ和XbaⅠ的Sp1目的基因连接到pcDNA3．1／myc-HisA真核表达载体上。结果经过PCR引物扩增得到2343bp基因片段，将获得的重组质粒pcDNA3．1／myc-HisA-Sp1双酶切分析鉴定，测序结果与GenBank登录基因完全一致。结论成功实现了Sp1基因克隆及表达载体的构建，为以后研究转录因子Sp1在牙釉质发育的分子调控方面奠定基础。
- 李江孙霞高玉光
- 关键词：转录因子SP1基因克隆RT-PCR
- 转录因子Ets-2调控小鼠成釉细胞MMP-20基因表达的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:通过研究Ets-2转录因子对调控小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(matrix metalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用,进一步明确Ets-2在釉质发育中的作用。方法:应用免疫组化方法观察出生后5d小鼠切牙成釉细胞中Ets-2的表达;在小鼠成釉细胞中分别转染200ng pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-2和Ets-2siRNA后,利用实时定量RT-PCR法检测MMP20基因表达的不同变化;用双荧光素酶报告基因检测系统分析Ets-2对MMP-20启动子突变后转录活性的影响。结果:免疫组化显示Ets-2在成釉细胞中呈阳性表达。实时定量RT-PCR研究发现Ets-2过表达后,MMP-20表达水平显著增加;当Ets-2基因沉默后,MMP-20表达水平则显著下降。双荧光素酶报告基因检测系统检测显示,转染pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-2的实验组与对照组相比,MMP-20启动子的转录活性升高;对启动子Ets潜在结合部位进行定点突变后,MMP-20启动子的转录活性显著下降,Ets-2丧失上调MMP-20启动子转录活性的作用。结论:小鼠成釉细胞核中Ets-2可通过MMP-20启动子上Ets潜在结合位点,上调MMP-20基因表达水平。
- 孙霞王青山韩婷婷李东亮孙学玲孙岩纪虹利高玉光
- 关键词：免疫组化RT-PCR
