沈之君
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南通大学医学院更多>>
- 发文基金：江苏省盐城市医学科技发展计划项目江苏高校优势学科建设工程项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TRPM7参与AngⅡ对心肌细胞镁离子平衡的调节被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨TRPM7在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞镁离子平衡调节中的作用。方法:采用原代培养的小鼠心肌细胞作为研究对象,实验分对照、AngⅡ、AngⅡ+氯沙坦(Losartan,AngⅡ的Ⅰ型受体阻断剂)及AngⅡ+2-APB(TRPM7通道阻断剂)组。实验试剂直接加入培养液中与细胞共孵育,应用mag-fura-2镁离子荧光探针动态检测心肌细胞内镁离子水平的变化,实时定量PCR(qPCR)和Western Blotting检测TRPM7在原代培养心肌细胞中的表达水平。结果:与对照组相比,AngⅡ组心肌细胞胞内游离镁离子水平在细胞外生理镁离子浓度及高镁离子浓度环境下均有显著下降;应用Losartan或2-APB均可显著降低AngⅡ所致的游离镁离子下降的作用。qPCR和Western Blotting检测结果提示,AngⅡ对原代培养心肌细胞中TRPM7的表达水平无影响。结论:AngⅡ可通过Ⅰ型受体对原代培养心肌细胞的镁离子代谢产生显著影响,其机制可能是AngⅡ增强了心肌细胞TRPM7的功能而不影响其表达水平。
- 郭瑞娜李小青沈之君
- 关键词：心肌细胞MG^2+
- N-糖基化对KCNE1功能的影响
- 2013年
- 目的:探究N-糖基化在KCNE1功能中的作用。方法:根据N-糖基化序列特征"Asn-X-Ser/Thr"分析和N-糖基化特异消化酶实验检测KCNE1是否存在N-糖基化,通过点突变构建N-糖基化位点突变体并通过蛋白质印迹法检测其蛋白表达,细胞免疫荧光染色检测突变体亚细胞定位;免疫共沉淀检测突变体与KCNQ1的相互作用。结果:KCNE1存在N-糖基化,N5和N26是其可能位点;点突变获得KCNE1-N5Q、KCNE1-N26Q和KCNE1-N5,26Q 3个突变体。蛋白质印迹法确定N5和N26为KCNE1的两个糖基化位点;与野生型相比,突变体在细胞内呈现不同程度的蛋白囤积现象,KCNE1-N26Q表现尤为显著,KCNE1-N5,26Q和KCNE1-N5Q则表现略轻;KCNE1 N-糖基化突变体仍能与KCNQ1结合。结论:N-糖基化在KCNE1转运中发挥重要作用,其中N26较为关键;N-糖基化在KCNE1与KCNQ1之间的相互作用中不起重要作用。
- 李小青茅家慧胡亚娥施海燕沈之君
- 关键词：N-糖基化KCNE1转运KCNQ1
- 沉默MagT1影响大鼠心肌细胞内Mg^(2+)水平和细胞凋亡的研究被引量：1
- 2018年
- 目的使用siRNA沉默大鼠心肌细胞的镁离子转运蛋白1(MagT1),检测细胞内Mg^(2+)浓度变化和细胞凋亡情况。方法设计并合成MagT1siRNA序列,转入原代培养大鼠心肌细胞沉默MagT1,使用反转录PCR和Western blot检测MagT1mRNA和蛋白表达情况,荧光显微镜检测细胞内Mg^(2+)浓度变化情况,流式细胞法检测细胞凋亡情况。结果相比阴性siRNA组,MagT1siRNA转染大鼠心肌细胞48h,MagT1mRNA的沉默效率为51.83%(P<0.05),MagT1蛋白的沉默效率为56.75%(P<0.05),胞内Mg^(2+)浓度降低29.13%(P<0.05),细胞凋亡率为31.18%(P<0.01);转染60h,MagT1mRNA的沉默效率为86.91%(P<0.01),MagT1蛋白质的沉默效率为83.85%(P<0.01),细胞内Mg^(2+)浓度降低41.32%(P<0.01),细胞凋亡率为40.61%(P<0.01)。结论 MagT1被显著沉默后,细胞内Mg^(2+)浓度显著降低,细胞凋亡显著提高,细胞生命活动受到较大影响。
- 滕飞翔沈之君赵洪侠张栋梁杨留才
- 关键词：细胞凋亡肌细胞SIRNA
