张椿
- 作品数：13 被引量：16H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SIGIRR对H292细胞Toll样受体4、5、9致炎作用的影响及机制研究被引量：2
- 2009年
- 目的观察SIGIRR(single Ig IL-1R-related molecule)对人气道上皮细胞株H292中Toll样受体(TLR)4、5、9致炎作用的影响,并初步了解其作用机制。方法运用脂质体转染的方法,将SIGIRR-EGFP融和蛋白真核表达载体稳定转染H292细胞,通过免疫细胞化学技术观察H292细胞中SIGIRR的过表达情况;经LPS、Flagellin、CpG DNA 2006处理后,ELISA检测重组质粒(SIGIRR-EGFP)、空质粒(pEGFP-N1)转染以及未转染的H292细胞分泌致炎因子TNF-α和IL-6水平;通过免疫共沉淀的方法了解SIGIRR与MyD88之间的关系。结果激光共聚焦显微镜显示重组融合蛋白SIGIRR-EGFP与H292内源SIGIRR共定位于细胞膜上;经LPS、Flagellin、CpGDNA 2006刺激后,重组质粒转染的H292细胞分泌的IL-6和TNF-α水平显著低于空质粒转染和未转染的H292细胞(P<0.01);免疫共沉淀提示H292细胞受到刺激后,SIGIRR与MyD88有较强相互作用,可与TLR4、5、9竞争结合MyD88分子。结论SIGIRR对H292细胞TLR4、5、9致炎通路的负性调节作用,可能是通过减少MyD88分子与TLR4、5、9的结合,从而削弱了炎症信号的细胞内转导。
- 张椿钱桂生赵云峰吴学玲
- 关键词：SIGIRRMYD88TOLL样受体致炎因子免疫共沉淀
- 虚拟现实技术辅助胸部战创伤分级救治模式被引量：3
- 2021年
- 基于现代战争胸部外伤伤情特点和战伤分级救治理论,本文提出利用虚拟现实技术(virtual reality,VR)辅助建立胸部战伤分级救治模式。VR具有提供沉浸式和交互式体验、规避安全风险等优势,利用VR设计个性化胸部战伤案例,在分级救治不同的阶段对伤情评估、诊断和处置进行培训和考核,更有利于提高野战条件下战士及卫生人员综合救治能力。但VR的发展和应用仍存在诸多挑战,要实现理想的虚拟现实效果,为传统战伤救治技能培训和实战救治提供辅助,VR要集成发展,并与其他技术的融合。
- 范晔郭洁汝王旖旎赵静张椿
- 关键词：胸部外伤虚拟现实技术救治模式医学教学
- 肽抗生素hPAB-β3拷贝工程菌的发酵与重组蛋白纯化
- 2004年
- 胡金川饶贤才黎庶金晓琳李明张椿汪正清胡福泉
- 关键词：肽抗生素工程菌发酵重组蛋白
- 肽抗生素hPAB-β制备工艺中基因工程菌的改建被引量：1
- 2006年
- 目的通过重新构建新的3拷贝串联体基因工程菌phPAB-β(3)/M15,在原有肽抗生素hPAB-β制备工艺路线基础上,使发酵后目的肽的最终产量得到提高。方法重新构建含有重组质粒pQE31-hPAB-β(3)的基因工程菌M15,然后筛选出能够稳定而且高效表达目标蛋白的最佳工程菌株,进行传代稳定性分析,并明确新建工程菌中目标融合蛋白的表达形式和亲和层析的效果,最后通过相同条件下,在逐步放大的发酵规模(1L摇瓶,3.7L和10L发酵罐),与以往的3拷贝串联体工程菌phPAB-β(3)/JM109进行对比研究(湿菌产量、目标蛋白表达率),同时观察新建工程菌在10L发酵中目标蛋白的表达和遗传稳定性。结果筛选出的最佳工程菌株的目标蛋白的表达效率为34.8%,经LB培养传代10次后,点种LB(AMP、KAN)平板,生长率为100%,质粒保存率达100%。在1L摇瓶,3.7L和10L发酵罐的发酵规模下,phPAB-β(3)/M15与phPAB-β(3)/JM109一样,目标融合蛋白都以包涵体形式表达,亲和层析效果相近,目标蛋白表达率无显著性差异(P>0·05),但发酵产量大于后者,有非常显著性差异(P<0·01)。且新建工程菌在10L发酵中发酵产量达到55.15g/L,诱导表达后的第5小时,蛋白表达达到高峰,蛋白表达率为30.2%,重组质粒保存率为100%。结论新构建工程菌phPAB-β(3)/M15比起原来基因工程菌phPAB-β(3)/JM109,是更为理想且利于肽抗生素hPAB-β工业生产的基因工程菌。
- 张椿丛延广胡福泉饶贤才
- 关键词：肽抗生素发酵
- SIGIRR对LPS诱导的H292细胞TLR4表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的通过上调SIGIRR(single Ig IL-1R-related molecule)在人气道上皮细胞株H292中的表达,研究SIGIRR对LPS诱导的H292细胞TLR4表达的影响。方法构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H292,经LPS刺激后,ELISA检测转染前后上皮细胞TNF-α分泌水平的差异,Western blot(WB)检测TLR4表达的变化。结果构建的融和蛋白表达载体SIGIRR-EGFP经EcoRI和BamHI双酶切后,电泳显示其条带大小为4.7kb和1.23kb左右,经测序证实SIGIRR的序列与GenBank公布的人cDNA序列完全一致。SIGIRR-EGFP转染细胞与pEGFP-N1转染细胞和对照组细胞相比,TNF-α产生明显下降,而TLR4表达无明显变化。结论SIGIRR上调表达可抑制LPS诱导的H292细胞TNF-α的产生,对TLR4表达无影响,提示SIGIRR在该信号通路中起"刹车"作用可能是通过抑制其下游通路中某个或某些调节蛋白的表达完成的。
- 吴学玲张椿赵云峰钱桂生
- 关键词：SIGIRR绿色荧光蛋白TNF-Α
- 肽抗生素hPAB-β制备工艺优化及生物学活性初探
- 肽抗生素(peptideantibiotics)是近年来发现的生物体基因编码的具有抗微生物活性的小肽，通常是由12～60个氨基酸所组成，分子量＜10kDa，是生物体天然免疫的重要组成部分。它作为一种新型的抗感染制剂，具有...
- 张椿
- 关键词：肽抗生素蛋白表达率抗菌活性溶血活性细胞毒性
- 文献传递
- 肽抗生素hPAB-β制备工艺中基因工程菌的改建
- 目的通过重新构建新的3拷贝串联体基因工程菌phPAB-β(3) /M15,在原有肽抗生素 hPAB-β制备工艺路线基础上,使发酵后目的肽的最终产量得到提高。方法重新构建含有重组质粒pQE31-hPAB-β(3)的基因工程...
- 饶贤才张椿丛延广胡福泉
- 文献传递
- SIGIRR对CpG诱导的人气道H292细胞TLR9表达的影响
- 2009年
- 目的研究SIGIRR对未甲基化的胞嘧啶磷酸鸟苷（CpG）诱导的人气道上皮细胞株H292细胞钟形受体9（TLR9）表达的影响。方法本实验对象包括6组，分别为H292组、空质粒转染组（eH292组）、SIGIRR转染组（SH292组），以及给予CpG刺激后的H292组（CH292组）、eH292组（CeH292组）和SH292组（CsH292组）。构建SIGIRR-EGFP融合蛋白的真核表达载体，运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H292经CpG刺激后，Western blot检测人气道H292细胞TLR9的表达，ELISA检测人气道上皮细胞H292分泌IL-6的水平。结果CH292组、CeH292组和CsH292组细胞较H292组、eH292组、sH292组细胞TLR9蛋白表达量增加（P均〈0．01）；CSH292组细胞产生的IL-6（3．41±0．08pg／ml）少于CH292组（4．27±0．07pg／ml）及CeH292组（5．04±0．05pg／ml）（P均〈0．05）、而TLR9蛋白表达量差异无统计学意义。结论CpG可诱导Hm细胞表达TLR9蛋白，SIGIRR上调表达可抑制CpG诱导的H292细胞IL-6的产生，对TLR9表达无影响，
- 吴学玲张椿王兴盛钱桂生赵云峰
- 关键词：SIGIRR受体细胞表面
- SIGIRR对气道上皮TOLL样受体致炎信号通路的作用及机制研究
- 背景与目的：
TOLL样受体/(TLRs/)广泛分布于人的气道上皮细胞中,它们介导了病原微生物所致呼吸道感染时的气道炎症反应。单免疫球蛋白样白介素1受体相关蛋白/(SIGIRR/)是TIRs超家族成员,它可以负...
- 张椿
- 关键词：TOLL样受体人气道上皮细胞致炎因子
- 文献传递
- SIGIRR-EGFP真核表达载体构建及在H292细胞中的亚细胞定位研究被引量：6
- 2009年
- 目的通过增强型绿色荧光蛋白示踪技术,观察SIGIRR(single Ig IL-1R-related molecule)在人气道上皮细胞株H292中的分布特点及对上皮细胞天然免疫功能的影响。方法构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H292,再利用激光共聚焦显微镜对其进行亚细胞定位研究。经LPS刺激后,ELISA检测转染前后上皮细胞TNF-α分泌水平的差异。结果构建的融和蛋白表达载体SIGIRR-EGFP经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后,电泳显示其条带大小为4.7 kb和1.23 kb左右,经测序证实SIGIRR的序列与GenBank公布的人cDNA序列完全一致。激光共聚焦显示pEGFP-N1空载体转染表达的绿色荧光蛋白在H292细胞中均匀分布,而重组载体SIGIRR-EGFP表达的融和蛋白在H292细胞核周(膜)和细胞膜边缘上有连续分布现象。经LPS刺激后,pEGFP-N1转染的细胞和未转染细胞TNF-α水平无显著性差异(P>0.05),而SIGIRR-EGFP转染细胞与pEGFP-N1转染细胞相比,显著降低了TNF-α的产生(P<0.01)。结论成功构建了SI-GIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,并利用绿色荧光蛋白标记的方法显示了SIGIRR分子在H292细胞中细胞膜分布。过表达的SIGIRR降低了上皮细胞LPS诱导的炎症因子TNF-α产生。
- 张椿钱桂生赵云峰吴学玲
- 关键词：SIGIRR绿色荧光蛋白激光共聚焦
