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A型肉毒神经毒素轻链人源性抗体的筛选、表达与检测被引量：4: 2016年; 目的从全合成人源性噬菌体单链抗体库中筛选抗A型肉毒神经毒素轻链(Bo NT/A LC)特异性单抗,并进行全抗的表达、纯化与鉴定。方法根据大肠杆菌密码子偏好性优化并合成Bo NT/A LC序列,克隆至p TIG质粒,转化BL21(DE3)plys S感受态细胞,IPTG诱导表达后Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白。利用纯化的轻链蛋白从噬菌体抗体库中经"吸附-洗脱-扩增"程序淘选富集抗体并进行特异性筛选。PCR扩增抗体轻重链可变区分别连入L293-CL和H293载体,瞬时共转染293-F细胞,培养上清经Protein A柱纯化,通过SDS-PAGE、Western印迹和ELISA检测抗体纯度和特异性。结果可溶性表达的Bo NT/A LC占全菌蛋白的36.8%,纯化后蛋白纯度达99%。从噬菌体抗体库中筛选到10株单抗,选择其中特异性最好的两株单抗Lab1、Lab2制备了全抗,Western印迹和ELISA检测结果显示其可特异性识别结合Bo NT/A LC蛋白。结论该研究得到了两株特异性的Bo NT/A LC抗体,可能用于A型肉毒毒素检测和肉毒中毒治疗。; 赵鹏胡颖安佳佳韦娜熊向华汪建华张惟材徐威; 关键词：噬菌体抗体库

突触泡蛋白2研究进展被引量：1: 2007年; 突触泡蛋白2(SV2)是一类跨膜糖蛋白,定位于脊椎动物神经元及内分泌细胞,与神经递质的释放、内分泌泡胞吐作用、突触泡稳态的维持、神经肌肉接头的形成及肾上腺素能受体α2C的定位密切相关。最近还发现SV2是肉毒神经毒素BoNT/A的受体,介导BoNT/A进入神经元。SV2可作为突触泡标记蛋白,广泛应用于生物学研究及肿瘤诊断。此外,SV2还是抗癫痫药物的作用靶标。; 韦娜张惟材; 关键词：神经调节

突触小体相关蛋白SNAP25的原核表达、纯化及鉴定: 2011年; 目的:克隆突触小体相关蛋白(SNAP25)基因,原核表达、纯化并鉴定SNAP25蛋白。方法:PCR扩增SNAP25基因,克隆至表达质粒pTIG-Trx,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western印迹分析肉毒神经毒素BoNT/A轻链对该蛋白的裂解情况。结果:构建了pTIG-SNAP25表达质粒,经IPTG诱导表达,目的蛋白占全菌蛋白的26.2%,表达形式为可溶性表达,表达量达115.4mg/L,纯化后蛋白纯度达95%以上;经SDS-PAGE及Western印迹分析,SNAP25蛋白可被BoNT/A轻链特异降解。结论:克隆了SNAP25基因,在原核系统中表达、纯化并鉴定了重组SNAP25蛋白。; 安佳佳韦娜熊向华汪建华张惟材; 关键词：基因克隆可溶性表达

A型肉毒毒素中和抗体S25全抗体的表达: 2011年; 目的:用HEK293细胞表达A型肉毒毒素(BoNT/A)中和抗体S25。方法:按哺乳动物偏好密码子设计合成S25可变区编码序列,κ链可变区序列构建到带有轻链恒定区的载体L293,重链可变区构建到带有重链恒定区的载体H293,轻、重链载体共转染至HEK293细胞,进行瞬时表达;用重链C端(HCC)及S25中和表位突变的HCC与细胞培养上清ELISA检测S25表达。结果:测序结果表明正确设计合成了S25可变区编码序列;ELISA结果显示分泌表达上清可以与抗原结合,而不能与S25中和表位突变的HCC结合。结论:按哺乳动物偏好密码子设计的S25编码序列可以用HEK293细胞进行表达,并且具有活性。; 韦娜王双林建波孙志伟陈惠鹏张惟材; 关键词：A型肉毒毒素中和抗体 HEK293细胞

SDH-SV2C-L4融合蛋白的表达及山梨糖脱氢酶活性检测被引量：1: 2011年; 目的:构建SDH-SV2C-L4融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中表达具有山梨糖脱氢酶(SDH)活性的融合蛋白。方法:将C亚型突触囊泡蛋白2大突环L4(SV2C-L4)基因与SDH基因以GGGS柔性接头连接,在大肠杆菌DH5α中表达;用NBT染色和DCIP脱色的方法检测融合蛋白的SDH活性。结果:DNA测序及SDS-PAGE结果显示构建了融合蛋白表达载体,并表达了SDH-SV2C-L4融合蛋白,相对分子质量约80×103;DCIP脱色及NBT染色均检测到融合蛋白的SDH活性。结论:与SV2C-L4融合的SDH仍具有活性,为下一步SV2C-L4活性检测方法的建立及SDH与SV2C-L4的其他相关研究奠定了基础。; 韦娜陈惠鹏张惟材; 关键词：山梨糖脱氢酶融合蛋白

氧化葡糖杆菌吡咯喹啉醌合成蛋白系统及其编码的基因簇: 本发明公开了一种吡咯喹啉醌合成基因簇及其编码蛋白系统，其由1)由SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ ID No.9、SEQ ID No.11所示的蛋白质组成；或由2)在EQ I...; 熊向华张惟材汪建华杨延新智静娟杨璐李淼鑫韦娜安佳佳; 文献传递

食甲基菌吡咯喹啉醌合成相关基因簇及其编码蛋白系统: 本发明公开了一种食甲基菌吡咯喹啉醌合成基因簇及其编码蛋白系统，分别为pqqABCDE和pqqFG。本发明还公开了编码上述吡咯喹啉醌合成基因簇，其核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.12所示。本发明提供...; 熊向华张惟材汪建华杨璐李淼鑫智静娟杨延新韦娜安佳佳; 文献传递

A型肉毒毒素受体和中和抗体研究: 肉毒毒素(botulinum neurotoxin,BoNT)是一类由肉毒梭菌产生的神经毒素,为已知毒性最强的物质,通过阻断神经-肌肉突触传递引起松弛性麻痹发挥毒性作用。肉毒毒素包括A-G 7种血清型,其中A、B、E和F...; 韦娜; 关键词：A型肉毒毒素受体噬菌体抗体库中和抗体重链; 文献传递

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韦娜