- 利用CRISPR/Cas9系统构建HeLa细胞Cdc25C基因敲除稳定细胞株被引量：3
- 2017年
- 目的使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类宫颈癌细胞HeLa中的细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cycle 25 homolog C,Cdc25C)基因,构建Cdc25C基因稳定敲除细胞株。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性识别Cdc25C基因第一外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),构建真核重组表达质粒。测序鉴定后,将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选稳定敲除Cdc25C基因细胞株,再用免疫印迹方法鉴定细胞Cdc25C敲除效果。最后用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响。结果筛选出稳定敲除Cdc25C基因细胞株,且Cdc25C敲除显著影响G2/M期进程。结论利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源Cdc25C基因敲除细胞株,为研究Cdc25C在细胞周期进程的功能以及相关癌症的发生奠定了基础。
- 姚叶豹王广菲董钦才曹诚刘萱
- 关键词：HELA细胞细胞周期
- PA200和乙酰化介导核心组蛋白通过蛋白酶体降解
- 本发明公开了PA200蛋白在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下（1）至（4）中的至少一种：（1）结合乙酰化蛋白质；（2）促进乙酰化蛋白质降解；（3）参与体细胞DNA损伤修复；（4）参与精子形成。本发明在如下四个方面取...
- 邱小波钱民先逄也刘翠华王广菲朱倩倩张晓旭刘珊
- 文献传递
- 人Polo样激酶1基因的克隆表达及其影响c-Abl表达水平功能的初探
- 2013年
- 目的:克隆并在293细胞中表达人Polo样激酶1(Plk1)基因,探索Plk1对非受体型酪氨酸激酶c-Abl表达水平的影响。方法:利用PCR法扩增Plk1基因,分别定向克隆至pcDNA3-Flag及pCMV-Myc真核表达载体,将上述质粒分别转染293细胞进行瞬时表达,Western印迹检测Plk1蛋白的表达;将上述质粒分别与c-Abl表达质粒共转293细胞,检测带有不同标签的Flag-Plk1或Myc-Plk1对细胞中c-Abl激酶表达的影响。结果:构建了Flag-Plk1和Myc-Plk1真核表达质粒,其在293细胞中均可表达,蛋白的相对分子质量为68×103;与其共转的c-Abl激酶表达水平显著下调。结论:在293细胞中表达了Flag-Plk1和Myc-Plk1蛋白,且初步发现Plk1可以抑制c-Abl的表达。
- 李伟刘萱江其生王广菲李平曹诚
- 关键词：POLO样激酶1C-ABL激酶
- 利用双萤光素酶报告系统研究FoxM1转录活性调控
- 2014年
- 目的:构建细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)启动子萤光素酶报告系统,用于转录因子FoxM1转录活性调控研究。方法:利用瞬时转染、实时荧光定量PCR及Western印迹,验证人胚肾HEK293细胞中FoxM1对Cyclin B1 mRNA的转录及蛋白表达的调节作用;利用PCR技术从人宫颈癌HeLa细胞基因组中钓取人源Cyclin B1的启动子序列,克隆至pGL3-Basic Vector中,构建含有Cyclin B1启动子的萤火虫萤光素酶报告质粒pGL3-Cyclin B1;通过瞬时转染、Western印迹及萤火虫/海肾萤光素酶双报告系统,研究c-Abl酪氨酸激酶对FoxM1转录活性的调控作用。结果:构建了Cyclin B1萤火虫萤光素酶报告系统,该报告系统可用于FoxM1转录活性研究;c-Abl酪氨酸激酶能够显著抑制FoxM1靶向Cyclin B1启动子的转录活性,且抑制作用依赖c-Abl的激酶活性。结论:pGL3-Cyclin B1萤光素酶报告系统可用于研究c-Abl酪氨酸激酶介导的FoxM1转录活性调节。
- 董钦才王广菲蒋雪峰李平曹诚刘萱
- 关键词：细胞周期蛋白B1启动子
- 非受体酪氨酸激酶c-Abl/Arg对细胞微管结构的影响
- 2010年
- 王广菲李大培李平曹诚张部昌刘萱
- 关键词：RNA干扰微管蛋白
- 非受体酪氨酸激酶c-Abl调节微管组装的机理研究
- 非受体型酪氨酸激酶c-Abl是Abelson鼠白血病病毒v-abl原癌基因在哺乳动物细胞内的同源基因，在哺乳动物中广泛表达。C-Abl蛋白具有丰富的结构域，其中SH3结构域能特异地识别富含脯氨酸残基的蛋白区域，SH2结构...
- 王广菲
- 关键词：微管PLK1FOXM1
- PA200和乙酰化介导核心组蛋白通过蛋白酶体降解
- 本发明公开了PA200蛋白在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下（1）至（4）中的至少一种：（1）结合乙酰化蛋白质；（2）促进乙酰化蛋白质降解；（3）参与体细胞DNA损伤修复；（4）参与精子形成。本发明在如下四个方面取...
- 邱小波钱民先逄也刘翠华王广菲朱倩倩张晓旭刘珊
- 文献传递
