刘萱
- 作品数：53 被引量：75H指数：5
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- 相关领域：生物学医药卫生理学更多>>
- Plk1调节c-Abl表达机制的初步研究
- 2017年
- 目的 研究Polo样激酶1（Polo-like kinase1,Plk1）对非受体酪氨酸激酶（cellular-abelsongene,c-Abl）表达水平的调控及其作用机制.方法 在293T细胞中过表达带有不同标签的Plk1,研究随着外源Plk1表达量的增加,内源c-Abl表达是否变化.分别通过放线菌酮翻译抑制实验和荧光定量PCR实验,研究Plk1是通过影响c-Abl蛋白稳定性还是转录活性来调节其表达.结果 细胞内c-Abl的表达随着外源Plk1的表达量的增加而增加,Plk1不影响c-Abl蛋白稳定性,但可调节c-Abl转录水平.结论 Plk1可在转录水平调节c-Abl表达.
- 宋秀军李伟李伟靳彦文靳彦文李平刘萱刘萱
- H1启动子siRNA载体的构建及应用被引量：4
- 2004年
- 利用双链RNA(dsRNA)调控基因表达已经成为研究基因功能的有力工具。用人H1启动子构建了pBS/H1PS小干扰RNA(siRNA)表达载体,用于在哺乳动物细胞中产生特异性dsRNA转录产物。通过对293细胞中的PSMA7分子进行表达抑制,证明该siRNA载体能够有效产生针对靶基因的RNA干扰(RNAi)效应。
- 刘萱李楚芳李平曹诚军
- 关键词：小干扰RNA293细胞PSMA靶基因双链RNA哺乳动物细胞
- hPLIC-2可溶性表达及多克隆抗体的制备被引量：3
- 2004年
- 利用多聚酶联反应(PCR)扩增获得人hPLIC-2基因,并将该基因克隆到原核表达载体pGEX-2T上。转化大肠杆菌JM109,在27℃经IPTG诱导后,GST-hPLIC-2融合蛋白获得高效可溶性表达,并通过GlutathioneSephorase4B获得纯化。使用结合有GST-hPLIC-2的GlutathioneSephorase4B凝胶珠免疫大白兔制备了兔抗hPLIC-2多克隆抗体,抗体滴度大于1∶16000。该抗体制备为研究hPLIC-2的功能提供了有用的工具。
- 李楚芳刘萱李平马清钧曹诚军
- 关键词：多克隆抗体可溶性表达多聚酶大白兔抗体滴度IPTG
- 利用CRISPR/Cas9系统构建HeLa细胞Cdc25C基因敲除稳定细胞株被引量：3
- 2017年
- 目的使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类宫颈癌细胞HeLa中的细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cycle 25 homolog C,Cdc25C)基因,构建Cdc25C基因稳定敲除细胞株。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性识别Cdc25C基因第一外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),构建真核重组表达质粒。测序鉴定后,将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选稳定敲除Cdc25C基因细胞株,再用免疫印迹方法鉴定细胞Cdc25C敲除效果。最后用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响。结果筛选出稳定敲除Cdc25C基因细胞株,且Cdc25C敲除显著影响G2/M期进程。结论利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源Cdc25C基因敲除细胞株,为研究Cdc25C在细胞周期进程的功能以及相关癌症的发生奠定了基础。
- 姚叶豹王广菲董钦才曹诚刘萱
- 关键词：HELA细胞细胞周期
- 4E-BP1、4E-BP1-4A重组慢病毒载体的构建及对胃癌细胞HGC27生长的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:构建4E-BP1及其T37A、T46A、S65A、T70A突变体4E-BP1-4A基因表达的重组慢病毒载体,研究其对胃癌HGC27细胞生长的影响。方法:PCR扩增4E-BP1基因及其突变体4E-BP1-4A基因并克隆到pCDH载体,构建成pCDH-4E-BP1、pCDH-4E-BP1-4A,将其与包装载体共转染293T细胞,包装成Lenti-4E-BP1及Lenti-4E-BP1-4A重组慢病毒载体,将此慢病毒感染胃癌HGC27细胞,Western印迹鉴定病毒载体介导的4E-BP1、4E-BP1-4A蛋白的表达,MTT、克隆形成和软琼脂方法研究过量表达4E-BP1、4E-BP1-4A对胃癌HGC27细胞生长的影响。结果:包装成Lenti-4E-BP1及Lenti-4E-BP1-4A重组慢病毒载体,并将此慢病毒载体感染胃癌HGC27细胞;MTT、克隆形成、软琼脂实验表明过量表达4E-BP1可抑制胃癌HGC27细胞的生长,过量表达4E-BP1-4A时抑制效果更明显。结论:构建了4E-BP1、4E-BP1-4A的重组慢病毒表达载体,在胃癌HGC27细胞中过量表达4E-BP1可抑制细胞生长,过量表达4E-BP1-4A的抑制效果更明显。
- 罗国兰王洪涛伍飞马李海量张晓清薛萌王健李山虎赵亚丽刘萱周建光
- 关键词：慢病毒载体胃癌细胞生长
- 一种新的Srrm1/SRm160可变剪接体经历无义突变介导的mRNA降解被引量：1
- 2010年
- 目的:研究基因Srrm1/SRm160的可变剪接。方法:应用RT-PCR研究Srrm1/SRm160的可变剪接,通过蛋白质的翻译抑制和RNA干扰研究剪接异构体是否经历无义突变介导的mRNA降解(NMD)过程。结果:获得Srrm1/SRm160新的可变剪接异构体,该异构体产生提前终止密码子,翻译抑制和RNA干扰证实含有提前终止密码子的剪接体经过NMD而降解。结论:Srrm1/SRm160通过可变剪接和NMD调节自身的表达水平,作为剪接因子进一步调节其他基因的可变剪接。
- 何章荣瞿秀华刘萱李晓明靳彦文李平曹诚
- 关键词：可变剪接
- 抗siRNA的GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定细胞系的构建
- 2015年
- 目的:构建GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定转染细胞系。方法:设计Polo样激酶1(Plk1)si RNA序列及相对应的同义突变引物,并利用二次PCR方法扩增Plk1基因,定向克隆到p Rex-EGFP-IRES-Hygro载体中,构建p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro表达载体;利用逆转录病毒感染的方法,构建He La/GFP-r Plk1稳定细胞系;利用免疫印迹及激光共聚焦显微镜,验证Plk1 si RNA的干扰效果及稳定细胞系的构建。结果:双酶切鉴定和测序结果表明构建的p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro正确;免疫印迹实验证明Plk1 si RNA序列可以有效抑制He La/GFP-r Plk1细胞中内源性Plk1蛋白的表达,但不能干扰掉外源GFP-r Plk1蛋白;在荧光共聚焦显微镜下,观察到有丝分裂的前中期和末期,GFP-r Plk1分别定位于着丝粒和中间体上。结论:构建了Plk1同义突变表达载体p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro和He La/GFP-r Plk1稳定细胞系,为下一步研究Plk1在有丝分裂期的调控机制提供了模型。
- 李伟李峰生于楠刘萱李平江其生曹诚
- 关键词：PLK1稳定细胞系
- 超抗原SEA增强小鼠对HBV DNA疫苗的免疫反应被引量：5
- 2005年
- 观察超抗原SEA(D227A)的真核表达载体(pmSEA),对HBVDNA疫苗诱导Balbc小鼠(H2d)免疫应答的调节作用。肌内注射空载体pcDNA3、HBVDNA疫苗加pmSEA佐剂(pHBVS2S+pmSEA)或不加佐剂(pHBVS2S);ELISA法测定血清抗HBs;ELISPOT检测分泌IFNγ的脾淋巴细胞;4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性。HBVDNA佐剂组免疫小鼠抗HBsAg抗体滴度明显高于不加佐剂组,其IgG1IgG2a的比例不同于多肽免疫组,二者分别为0.282与10。HBVDNA佐剂组均能增强IgG1和IgG2a的产生,是不加佐剂组的1.36、1.73倍。佐剂组小鼠脾淋巴细胞IFNγ的分泌量是不加佐剂组2～3倍。CTL细胞杀伤活性(E:T=100)佐剂组与不加佐剂组分别为:69.77%±7.5%、42.81%±7.7%,差异显著(P<0.05)。HBVDNA疫苗具有较强的免疫原性,能够诱导机体产生特异性的抗体及CTL反应;pmSEA佐剂能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答,有望成为DNA疫苗的免疫佐剂。
- 靳彦文李平胥全彬刘萱黄维王云龙曹诚马清钧
- 关键词：DNA疫苗乙型肝炎表面抗原SEA小鼠
- c-Abl蛋白酪氨酸激酶形成同源二聚体(英文)被引量：1
- 2005年
- cAbl是非受体酪氨酸激酶,它在细胞内被一些基因毒性的、氧化的及其它形式的压力所激活。目前研究证明:应用标记的cAbl发现其在细胞内可以相互形成同源二聚体,并且一分子cAbl的N末端区域与相应的另一分子的C末端相互作用形成二聚体。实验进一步表明:cAblSH3结构域结合到另一cAbl分子富含脯氨酸的C末端约958982氨基酸区域。如果去除cAbl富含脯氨酸的结构域,就会阻止二聚体的形成。这些结果首先证实了cAbl在细胞内可以相互形成同源二聚体,并暗示着二聚体的形成可能影响着cAbl活性的调节。
- 魏玲刘萱易艳萍李楚芳王云龙曹诚
- 关键词：C-ABL相互作用同源二聚体
- 冠状病毒核衣壳蛋白与延伸因子-1α的相互作用被引量：1
- 2007年
- 目的:分析SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(N蛋白)和229E冠状病毒(HCoV-229E)核衣壳蛋白与细胞延伸因子(EF)-1α的相互作用、翻译抑制效应及与多核细胞形成的关系。方法:构建、表达及纯化SARS-N蛋白和229E-N蛋白的GST融合蛋白,用GST-pull down方法分析其与过表达的EF-1α及内源EF-1α之间的相互作用;构建和表达SARS-N蛋白和229E-N蛋白的GFP融合表达载体,转染293T细胞,通过共聚焦显微镜分析SARS-N蛋白和229E-N蛋白的亚细胞定位及多核细胞的形成;在293T细胞中过表达SARS-N蛋白或229E-N蛋白,通过Co-IP分析其与EF-1α的相互作用。分别在细胞内和体外翻译系统中分析二者抑制报告基因翻译的程度。结果:SARS-N蛋白和229E-N蛋白都定位于细胞质,并不像其他冠状病毒的N蛋白那样定位到细胞核;二者都能诱导形成多核细胞,但229E-N蛋白导致细胞形成多核细胞的时间要晚;二者都能与EF-1α相互作用并且共定位于细胞质,二者都能导致EF-1α形成多聚体;二者在细胞内及细胞外对报告基因都有抑制翻译效应。结论:SARS冠状病毒和229E冠状病毒的核衣壳蛋白均定位于细胞胞质,可与EF-1α相互作用,导致EF-1α形成多聚体,抑制报告基因翻译及导致细胞形成多核。
- 王秋娜周冰刘萱杨尧李晓明陈亮靳彦文李平马清钧曹诚
- 关键词：SARS冠状病毒核衣壳蛋白多聚体
