所起凤
- 作品数：12 被引量：60H指数：6
- 供职机构：皖南医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Sirt1基因shRNA干扰载体构建及其对细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 本实验目的在于构建Sirt1 shRNA干扰载体,探讨Sirt1对HepG2、A549和293T细胞增殖和凋亡的影响。设计并合成Sirt1的shRNA序列,重组到pGenesil-1.0质粒载体中筛选出pGenesil-1.0-Sirt1阳性克隆并测序。将构建好载体转染HepG2、A549和293T细胞,用RT-PCR、Western blot检测各细胞中Sirt1表达水平,MTT测细胞增殖活性,加入阿霉素处理三组细胞后,用MTT检测细胞凋亡情况。结果表明成功构建Sirt1 shRNA干扰载体,各细胞株中Sirt1表达水平明显下降,Sirt1 shRNA克隆细胞株增殖能力降低,阿霉素处理后,各细胞株抗凋亡能力明显减弱,Sirt1在维持细胞增殖及抗细胞DNA损伤凋亡方面发挥重要作用,为进一步研究提供理论依据。
- 杜文婷任思冲所起凤杨鸣鸣何丹刘戟
- 关键词：细胞增殖细胞凋亡
- 循环机械压力诱导下兔椎间盘退变器官模型的建立及意义被引量：9
- 2014年
- 背景:力学因素是导致椎间盘退变(IDD)的重要诱因,建立力学相关性IDD的器官模型能为IDD机制的研究提供理想的模型基础。目的:建立兔椎间盘器官模型,并施以循环机械压力,探究循环机械压力载荷对IDD的影响。方法:6月龄新西兰大白兔随机分为加力组和对照组,静脉给予1.3 ml肝素(5000 U/ml),待肝素体内循环5 min后处死。无菌条件下完整取出带部分椎骨的腰段椎间盘,放入20%胎牛血清的培养液中培养。加力组应用加力器施以0.2 MPa压力值,每日加压1次,每次30 min。经过各个时段的培养后,苏木精-伊红(HE)染色观察椎间盘大体组织形态学变化;氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色及4',6-二眯基-2-苯基吲哚(DAPI)复染检测椎间盘细胞成活率;Realtime RT-PCR和Western-blotting检测蛋白多糖(AGN)、Ⅱ型胶原(COLⅡ)的mRNA和蛋白表达。结果:对照组和加力组培养至第7 d的组织形态学无明显变化,培养至第14 d均表现为组织形态学破坏,且以加力组表现更为明显。对照组培养至第7 d的细胞成活率及AGN、COLⅡ表达与0 d相比无明显变化;对照组培养第14 d与0 d比较,培养第7 d加力组与对照组比较,培养第14 d加力组与对照组比较,均表现为细胞成活率明显下降,AGN、COLⅡ表达下调。结论:成功建立短周期兔椎间盘体外器官模型,并在此模型基础上阐明循环机械压力载荷可直接导致椎间盘退变样改变。
- 徐宏光章平治宋俊兴胡斌赵泉来吕坤钟民张梦莹所起凤
- 关键词：器官培养椎间盘退变
- 洋葱中黄酮类提取物对血脑屏障透过及神经保护作用研究被引量：9
- 2011年
- 目的研究采用乙醇回流法从洋葱中提取的黄酮类物质对血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)透过作用以及对原代培养的鼠神经元细胞增殖和凋亡的影响。方法首先原代培养成功SD鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVECs);然后原代共培养鼠BMVECs和星形胶质细胞(astro-cytes,ACs)以建立BBB体外模型。采用乙醇回流法从洋葱中提取黄酮类物质,通过透射电子显微镜观察和跨膜电阻值测量验证BBB模型;采用高效液相色谱(HPLC)检测黄酮类提取物对BBB的透过率。采用过氧化氢(H2O2)和黄酮提取物处理神经元细胞,MTT法观察其对细胞增殖和凋亡的影响;彗星电泳和免疫荧光法分析神经元细胞DNA损伤情况。结果透射电镜及跨膜电阻仪鉴定BBB体外模型构建成功;HPLC检测洋葱中黄酮类提取物BBB透过率为60.58%;该提取物在10～20μg/mL浓度对H2O2诱导的鼠神经元细胞凋亡有明显的抑制作用,并可减少神经元DNA损伤。结论采用乙醇回流法从洋葱中提取的黄酮类物质可有效透过BBB,并对H2O2诱导的鼠神经元细胞的凋亡和DNA损伤有明显抑制作用。
- 何丹杜文婷范雪娇杨鸣鸣所起凤刘戟
- 关键词：血脑屏障黄酮类物质神经元细胞DNA损伤
- 中性粒细胞CD64表达在重症患者感染中的意义被引量：14
- 2015年
- 目的探讨外周血中性粒细胞CD64的表达在重症患者感染诊断及疗效评价中的价值。方法以2013年10月至2014年9月在本院重症监护病房(ICU)住院的感染患者103例为研究对象,对照组为健康体检者25例。根据临床表现和细菌学检测结果,将重症合并感染患者分成细菌感染组(86例)、真菌感染组(9例)和病毒感染组(8例)。应用流式细胞术检测中性粒细胞CD64表达,同时检测外周血C反应蛋白(CRP)及白细胞(WBC)水平,分析各组患者之间这3个指标的差异,并对17例细菌性感染的患者抗生素治疗前后CD64指数进行比较。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算CD64指数最佳临界值,同时对CRP、WBC及CD64指数的敏感度与特异度进行比较。结果细菌性感染组患者外周血CD64指数(3.416±1.854)明显高于正常对照组(1.351±0.602)、真菌感染组(1.664±0.249)和病毒感染组(1.379±0.071)(P<0.01);败血症组CD64指数(6.081±2.009)最高,且明显高于局部细菌感染组(2.853±1.234)(P<0.01);17例细菌感染患者抗生素治疗后CD64指数(3.946±1.972)明显低于治疗前(5.849±2.185)(P<0.05)。根据ROC曲线得出CD64指数具有较高的特异度(88%)和敏感度(86%),高于白细胞计数(84%,77.9%)和C反应蛋白(76%,83.7%)。结论流式细胞术检测中性粒细胞CD64指数可作为重症患者细菌感染的早期诊断、判断病情和评价治效果的可靠指标。
- 所起凤鲁卫华唐宗生吕坤
- 关键词：中性粒细胞流式细胞术
- 过氧化氢诱导的人正常和早老细胞中DNA损伤及其修复研究被引量：7
- 2011年
- 目的研究人早老细胞和正常衰老细胞在氧化应激条件下的DNA损伤和修复。方法采用免疫荧光技术和彗星电泳技术,分别检测3组不同群体倍增数(PD)的人正常二倍体成纤维细胞BJ(青年组第14代,成年组第30代,衰老组第45代)和2组不同PD的人赫-吉二氏综合征(HGPS)细胞(青年组第8代,衰老组第17代)的DNA基础损伤程度。研究过氧化氢诱导造成以上细胞组DNA损伤及去除致损因素正常培养后的修复水平,采用免疫荧光和彗星电泳技术检测细胞在沉默DNA损伤修复蛋白着色性干皮病蛋白A(XPA)表达前后的修复能力。结果 BJ细胞衰老组DNA损伤程度较高,与成年组相比,对DNA损伤诱导因子更加敏感(P<0.05);成年组与青年组相比,对损伤诱导因子也更敏感(P<0.05)。HGPS细胞青年组的DNA基础损伤程度即已达到衰老BJ细胞类似或更高水平,且与BJ细胞具有一致的DNA损伤年龄变化趋势。经siRNA沉默XPA表达后可部分恢复HGPS细胞的修复能力,对BJ细胞则没有影响。随年龄增长无论正常还是早老细胞,DNA损伤程度增加,修复效率降低。结论 XPA功能异常抑制了HGPS细胞的损伤修复。
- 所起凤杜文婷杨鸣鸣范雪娇刘戟
- 关键词：彗星电泳免疫荧光DNA损伤DNA修复
- 系统性红斑狼疮患者血清抗内皮细胞抗体和抗β_2糖蛋白I抗体水平及其对人脐静脉内皮细胞增殖的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:检测抗内皮细胞抗体(AECA)和抗β2GP-Ⅰ抗体在SLE患者血清中的水平及探讨AECA对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。方法:收集系统性红斑狼疮(SLE)患者90例和正常对照40例,留取血清,经酶联免疫吸附法(ELISA)检测AECA和抗β2GP-Ⅰ抗体水平。收集SLE患者部分临床指标,分析AECA和抗β2GP-Ⅰ抗体水平与临床指标间的关系。将不同浓度AECA的SLE患者血清加入HUVEC培养基,应用四唑盐比色试验(MTT)法检测各组OD值判断内皮细胞增殖状态。结果:SLE患者血清中AECA和抗β2GP-Ⅰ抗体水平显著高于正常对照组(P<0.01)。在90例SLE患者中33例抗β2GP-Ⅰ抗体阳性,该33例SLE患者对应的AE-CA、APTT水平和SLE活动评分(SLEDAI)积分均显著高于其余57例SLE患者(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。同时该33例患者AECA和抗β2GP-Ⅰ抗体水平呈高度正相关(r=0.984,P<0.01),AECA和抗β2GP-Ⅰ抗体水平均与SLE-DAI呈正相关(P<0.05),抗β2GP-Ⅰ抗体水平与凝血酶原时间(PT)间存在正相关(r=0.349,P<0.05)。空白对照组、健康对照血清组和低浓度AECA血清组间OD值无差异,而高浓度AECA血清组OD值显著低于以上3组(P<0.05)。结论:AECA和抗β2GP-Ⅰ抗体与SLE疾病活动相关,AECA在体外对HUVEC增殖有抑制作用。
- 张梦莹李志吕坤钟民所起凤钟正灵
- 关键词：系统性红斑狼疮抗内皮细胞抗体人脐静脉内皮细胞
- β-连环素在人颈椎终板软骨中的表达及其意义
- 2012年
- 目的：观察β-连环素在人颈椎椎体终板软骨中的表达变化，探讨其与终板软骨退变的关系及意义。方法：选取2011年9月至2012年3月间住院接受颈前路椎体次全切手术的颈椎终板软骨标本，分为退变组（28例）和对照组（10例），运用RT—PCR和western—blot法检测终板软骨组织中β-连环素、蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Sox9基因的表达。结果：退变组和对照组均可检测到β-连环素的表达，而退变组β-连环素表达量明显高于对照组（P〈0．01），蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Sox9基因表达量明显低于对照组（P〈0．01）。结论：人退变颈椎终板软骨组织内β-连环素表达明显升高，提示其与椎体终板软骨退变存在重要关系。
- 宋俊兴徐宏光章平治李梓瑞程加峰吕坤钟民张梦莹所起凤
- 关键词：椎间盘退变Β-连环素软骨终板WNT
- 洋葱总黄酮透过血脑屏障抑制脑胶质瘤的作用研究被引量：2
- 2011年
- 目的:研究采用热水浸提和乙醇冷浸两种方法从洋葱中提取的总黄酮对血脑屏障(BBB)透过作用以及对人脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法:共培养原代鼠脑微血管内皮细胞(BMVEC)和星形胶质细胞(AC),建立血脑屏障(BBB)体外模型,通过透射电子显微镜观察和跨膜电阻值(TEER)测量验证;采用高效液相色谱(HPLC)检测黄酮类提取物对血脑屏障的透过率。两组提取物分别处理U251细胞,MTT法观察细胞的增殖抑制、彗星电泳(SCGE)分析DNA损伤及流式细胞术(FCM)分析细胞周期分布情况。结果:透射电镜及跨膜电阻仪鉴定BBB体外模型构建成功;HPLC检测证实两组黄酮类提取物尤其是乙醇冷浸法产物能有效透过血脑屏障;该提取物80μmol/L浓度即对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用,并使U251细胞阻滞于G2/M细胞周期检查点。结论:采用乙醇冷浸法从洋葱中提取的黄酮类物质可有效透过血脑屏障,并对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用。
- 何丹范雪娇杨鸣鸣所起凤杜文婷刘戟
- 关键词：洋葱总黄酮血脑屏障胶质母细胞瘤
- 循环机械压力诱导下兔椎间盘器官模型ANK蛋白的表达
- 2014年
- 目的建立兔椎间盘器官培养模型，在此基础上施以循环机械压力（CMP），观察兔椎间盘器官细胞成活率、组织形态学的变化及ANK蛋白的表达情况，并观察外源性转化生长因子（TGF）-β1，对ANK蛋白表达的调控作用。方法6月龄新西兰大白兔随机分为加力组和对照组，无菌条件下完整取出带部分椎骨的腰段椎间盘，放人含有20％胎牛血清的培养液里进行培养。加力组椎间盘应用加力器对其施以0．2MPa压力值，每日1次，每次30min。2组器官模型培养选取0、7、14天3个时间点，HE染色观察大体组织形态学变化；氯化硝基四氮唑蓝（NBT）染色及4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）复染检测细胞成活率；Western blot检测ANK蛋白的表达。另外，在加力组培养至第7天时，培养液中加入外源性TGF—β1再培养4h，Western blot检测ANK蛋白的表达。结果对照组培养至第7天时，其组织形态学、细胞成活率及ANK蛋白的表达与0天相比差异无统计学意义（P〉0．05）；培养至第14天时，组织形态学破坏，细胞成活率下降、ANK蛋白的表达下调，差异有统计学意义（P值均〈0．05）。加力组培养至第7天时，组织形态学无明显变化，但细胞成活率下降、ANK蛋白的表达下调（P值均〈0．05）；培养至第14天时，组织形态学破坏、细胞成活率下降及ANK蛋白的表达下调均更明显（P值均〈0．05）。另外，加力组培养至第7天时加入外源性TGF—β1后，ANK蛋白的表达上调（P〈0．05）。结论CMP载荷可明显增加兔椎间盘器官模型细胞和组织学结构的破坏，使ANK蛋白的表达明显下调，可能与椎间盘退变的发生、发展密切相关。而外源性TGF—β1对ANK蛋白的表达具有正向调控作用，可能对CMP作用导致的退变椎间盘具有一定的修复作用。
- 徐宏光章平治宋俊兴熊寿良吕坤钟民张梦莹所起凤
- 关键词：椎间盘器官培养转化生长因子Β1
- 槲皮素对血脑屏障的透过及胶质瘤U251细胞活性的影响被引量：10
- 2010年
- 目的研究槲皮素对血脑屏障(BBB)透过情况及对人胶质母细胞瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法原代培养脑微血管内皮细胞(BMVEC)和星形胶质细胞(AC),建立BBB体外模型,通过电子显微镜和跨膜电阻值(TEER)测量验证BBB模型,采用高效液相色谱(HPLC)检测槲皮素透过血脑屏障的情况。槲皮素处理U251细胞,用MTT观察细胞的生长、TUNEL检测细胞凋亡、彗星电泳(SCGE)分析DNA损伤及流式细胞术(FCM)分析细胞周期分布情况。结果透射电镜及TEER鉴定BBB体外模型构建成功,HPLC检测发现槲皮素对血脑屏障的透过率达到65.54%。槲皮素对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用,流式细胞仪检测提示槲皮素作用后,U251细胞阻滞于G2/M期。结论槲皮素可有效透过BBB,并对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用。
- 任思冲所起凤杜文婷潘虹杨鸣鸣王若菡刘戟
- 关键词：槲皮素血脑屏障胶质母细胞瘤彗星电泳
