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Sirt1基因shRNA干扰载体构建及其对细胞增殖和凋亡的影响被引量：1: 2011年; 本实验目的在于构建Sirt1 shRNA干扰载体,探讨Sirt1对HepG2、A549和293T细胞增殖和凋亡的影响。设计并合成Sirt1的shRNA序列,重组到pGenesil-1.0质粒载体中筛选出pGenesil-1.0-Sirt1阳性克隆并测序。将构建好载体转染HepG2、A549和293T细胞,用RT-PCR、Western blot检测各细胞中Sirt1表达水平,MTT测细胞增殖活性,加入阿霉素处理三组细胞后,用MTT检测细胞凋亡情况。结果表明成功构建Sirt1 shRNA干扰载体,各细胞株中Sirt1表达水平明显下降,Sirt1 shRNA克隆细胞株增殖能力降低,阿霉素处理后,各细胞株抗凋亡能力明显减弱,Sirt1在维持细胞增殖及抗细胞DNA损伤凋亡方面发挥重要作用,为进一步研究提供理论依据。; 杜文婷任思冲所起凤杨鸣鸣何丹刘戟; 关键词：细胞增殖细胞凋亡

MicroRNA-34a调控细胞衰老的研究被引量：2: 2013年; 目的探讨微RNA-34a(miRNA-34a)对细胞通过调控沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达,从而引起细胞衰老的作用。方法构建pre-miRNA-34a表达载体,并将其和一个不针对任何基因的微小RNA-1792(miRNA-1792)表达载体(其他实验室赠送)分别转染至HEK293和HUVEC细胞内,用RT-PCR、Western blot检测各细胞组SIRT1mRNA与蛋白表达水平,以未转染的细胞为对照;将HUVEC细胞分为转染不同质粒、未转染质粒和用SIRT1激活剂白藜芦醇(终浓度1μmol/L,作用2h)处理HUVEC细胞(HUVEC-Res)组,中性彗星电泳分析H2O2作用2h后4组HUVEC细胞的双链损伤情况;用阿霉素处理上述4组HUVEC细胞2h,β-半乳糖甘酶(SA-β-gal)染色检测各细胞不同时间点的衰老情况。结果测序结果表明pre-miRNA-34a表达载体构建成功;RT-PCR、Western blot显示HEK293-pre-miRNA-34a和HUVEC-pre-miRNA-34a中SIRT1mRNA和蛋白质表达的水平明显下降(P<0.001);中性彗星电泳检测发现经H2O2处理后,HUVEC-Res组DNA损伤最轻,而HUVEC-miRNA-34a组DNA损伤程度最为严重;SA-β-gal染色显示DNA损伤后HUVEC-miRNA-34a衰老程度较其它3组严重,而HUVEC-Res组的衰老程度最为轻微。结论 miRNA-34a通过抑制SIRT1表达调控细胞衰老。; 杨鸣鸣范雪娇杜文婷任鹏亮刘戟

洋葱中黄酮类提取物对血脑屏障透过及神经保护作用研究被引量：9: 2011年; 目的研究采用乙醇回流法从洋葱中提取的黄酮类物质对血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)透过作用以及对原代培养的鼠神经元细胞增殖和凋亡的影响。方法首先原代培养成功SD鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVECs);然后原代共培养鼠BMVECs和星形胶质细胞(astro-cytes,ACs)以建立BBB体外模型。采用乙醇回流法从洋葱中提取黄酮类物质,通过透射电子显微镜观察和跨膜电阻值测量验证BBB模型;采用高效液相色谱(HPLC)检测黄酮类提取物对BBB的透过率。采用过氧化氢(H2O2)和黄酮提取物处理神经元细胞,MTT法观察其对细胞增殖和凋亡的影响;彗星电泳和免疫荧光法分析神经元细胞DNA损伤情况。结果透射电镜及跨膜电阻仪鉴定BBB体外模型构建成功;HPLC检测洋葱中黄酮类提取物BBB透过率为60.58%;该提取物在10～20μg/mL浓度对H2O2诱导的鼠神经元细胞凋亡有明显的抑制作用,并可减少神经元DNA损伤。结论采用乙醇回流法从洋葱中提取的黄酮类物质可有效透过BBB,并对H2O2诱导的鼠神经元细胞的凋亡和DNA损伤有明显抑制作用。; 何丹杜文婷范雪娇杨鸣鸣所起凤刘戟; 关键词：血脑屏障黄酮类物质神经元细胞 DNA损伤

过氧化氢诱导的人正常和早老细胞中DNA损伤及其修复研究被引量：7: 2011年; 目的研究人早老细胞和正常衰老细胞在氧化应激条件下的DNA损伤和修复。方法采用免疫荧光技术和彗星电泳技术,分别检测3组不同群体倍增数(PD)的人正常二倍体成纤维细胞BJ(青年组第14代,成年组第30代,衰老组第45代)和2组不同PD的人赫-吉二氏综合征(HGPS)细胞(青年组第8代,衰老组第17代)的DNA基础损伤程度。研究过氧化氢诱导造成以上细胞组DNA损伤及去除致损因素正常培养后的修复水平,采用免疫荧光和彗星电泳技术检测细胞在沉默DNA损伤修复蛋白着色性干皮病蛋白A(XPA)表达前后的修复能力。结果 BJ细胞衰老组DNA损伤程度较高,与成年组相比,对DNA损伤诱导因子更加敏感(P<0.05);成年组与青年组相比,对损伤诱导因子也更敏感(P<0.05)。HGPS细胞青年组的DNA基础损伤程度即已达到衰老BJ细胞类似或更高水平,且与BJ细胞具有一致的DNA损伤年龄变化趋势。经siRNA沉默XPA表达后可部分恢复HGPS细胞的修复能力,对BJ细胞则没有影响。随年龄增长无论正常还是早老细胞,DNA损伤程度增加,修复效率降低。结论 XPA功能异常抑制了HGPS细胞的损伤修复。; 所起凤杜文婷杨鸣鸣范雪娇刘戟; 关键词：彗星电泳免疫荧光 DNA损伤 DNA修复

洋葱总黄酮透过血脑屏障抑制脑胶质瘤的作用研究被引量：2: 2011年; 目的:研究采用热水浸提和乙醇冷浸两种方法从洋葱中提取的总黄酮对血脑屏障(BBB)透过作用以及对人脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法:共培养原代鼠脑微血管内皮细胞(BMVEC)和星形胶质细胞(AC),建立血脑屏障(BBB)体外模型,通过透射电子显微镜观察和跨膜电阻值(TEER)测量验证;采用高效液相色谱(HPLC)检测黄酮类提取物对血脑屏障的透过率。两组提取物分别处理U251细胞,MTT法观察细胞的增殖抑制、彗星电泳(SCGE)分析DNA损伤及流式细胞术(FCM)分析细胞周期分布情况。结果:透射电镜及跨膜电阻仪鉴定BBB体外模型构建成功;HPLC检测证实两组黄酮类提取物尤其是乙醇冷浸法产物能有效透过血脑屏障;该提取物80μmol/L浓度即对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用,并使U251细胞阻滞于G2/M细胞周期检查点。结论:采用乙醇冷浸法从洋葱中提取的黄酮类物质可有效透过血脑屏障,并对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用。; 何丹范雪娇杨鸣鸣所起凤杜文婷刘戟; 关键词：洋葱总黄酮血脑屏障胶质母细胞瘤

槲皮素对血脑屏障的透过及胶质瘤U251细胞活性的影响被引量：10: 2010年; 目的研究槲皮素对血脑屏障(BBB)透过情况及对人胶质母细胞瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法原代培养脑微血管内皮细胞(BMVEC)和星形胶质细胞(AC),建立BBB体外模型,通过电子显微镜和跨膜电阻值(TEER)测量验证BBB模型,采用高效液相色谱(HPLC)检测槲皮素透过血脑屏障的情况。槲皮素处理U251细胞,用MTT观察细胞的生长、TUNEL检测细胞凋亡、彗星电泳(SCGE)分析DNA损伤及流式细胞术(FCM)分析细胞周期分布情况。结果透射电镜及TEER鉴定BBB体外模型构建成功,HPLC检测发现槲皮素对血脑屏障的透过率达到65.54%。槲皮素对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用,流式细胞仪检测提示槲皮素作用后,U251细胞阻滞于G2/M期。结论槲皮素可有效透过BBB,并对人胶质母细胞瘤U251细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用。; 任思冲所起凤杜文婷潘虹杨鸣鸣王若菡刘戟; 关键词：槲皮素血脑屏障胶质母细胞瘤彗星电泳

沉默交配型信息调节因子2同源蛋白Sirt1被引量：1: 2011年; 沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,Sirt1)是哺乳动物中与酵母沉默信息调节蛋白2(silencing information regulator 2,Sir2)高度同源的蛋白质,它是一种依赖NAD+的III类组蛋白去乙酰化酶(HDAC III),在细胞分化、衰老、凋亡、DNA损伤修复、能量及内分泌代谢调节中起重要作用,同时在基因沉默、表观遗传学修饰、转录调控及信号转导调节中发挥重要的生物学功能。本文对其近年的研究进展做一概述。; 何丹杜文婷任思冲刘戟; 关键词：SIRT1 DNA损伤修复 MIRNA

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杜文婷

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