雷明
- 作品数：22 被引量：25H指数：3
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金海南省重点科技项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生理学更多>>
- 基因Ⅳ型猪戊型肝炎病毒重组ORF3蛋白抗原间接ELISA诊断方法的建立被引量：6
- 2009年
- 为建立检测猪戊型肝炎病毒(HEV)抗体的间接ELISA诊断方法,将HEV ORF3片段克隆至大肠杆菌表达载体pET42a(+)中,构建了原核表达载体pET42a-ORF3,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,并对表达的融合蛋白进行Ni2+-NTA柱纯化及SDS-PAGE、Western-blot鉴定,用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法。结果显示,GST-ORF3在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达的蛋白质分子质量约为45.5 ku,具有良好的抗原性。用建立的间接ELISA检测190份猪血清样品,阳性率为84.7%,与试剂盒检测结果相比,阳性符合率为91.5%。表明,建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和灵敏性,可用于猪血清HEV抗体的检测。
- 刘涛杜丽王凤阳雷明崔克成鹰陈品林王轶林杰材满初日嘎
- 关键词：猪戊型肝炎病毒ORF3原核表达间接酶联免疫吸附试验
- 一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法
- 本发明公开了一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法，首先合成能有效干扰小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子(siRNA-224.3)及阴性对照siRNA-NC，并制备成重组慢病毒；其次，将慢病毒感染小鼠巨噬细胞R...
- 杜丽王凤阳焦寒伟雷明
- 文献传递
- 海南原鸡PDCD10的克隆、表达及其蛋白的生物信息学分析被引量：5
- 2010年
- 通过克隆、表达海南原鸡程序性细胞死亡分子10(Programmed cell death10,PDCD10)基因,对其蛋白进行生物信息学分析。采用RT-PCR方法克隆得到海南原鸡PDCD10基因CDS区,将扩增产物与原核表达载体pET42a连接,构建pET42a-PDCD10重组质粒,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析;运用生物信息学软件对所获得基因的核苷酸序列进行分析,并预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。克隆获得了PDCD10639bp的CDS区核苷酸序列,融合蛋白分子量约为57ku,生物信息学分析发现,PDCD10CDS区包括1个639bp的开放读码框,编码212个氨基酸。该蛋白不含信号肽,无跨膜区,二级结构中存在大量α-螺旋。研究结果为进一步开展海南原鸡PDCD10的功能研究奠定了坚实的基础。
- 陈欢陈品林杜丽曹献英成鹰刘涛雷明吴科榜王学梅胡日查王凤阳
- 关键词：克隆生物信息学分析
- 海南普通人群中基因Ⅳ型HEV的血清流行病学调查被引量：1
- 2013年
- 目的了解基因Ⅳ型戊型肝炎病毒在海南普通人群中的感染情况,为海南防治戊型肝炎工作提供依据。方法收集海南普通人群各年龄组血清标本235份,以Ⅳ型HEV ORF3蛋白的原核表达产物为抗原,应用ELISA法检测抗-HEV IgG抗体。结果抗-HEV阳性率为3.0%,男、女性抗-HEV阳性率分别为2.7%和3.4%,差异无统计学意义(P>0.05);青壮年、中年、老年抗-HEV阳性率分别为2.0%、3.0%和3.5%,差异无统计学意(P>0.05)。结论在海南普通人群中,基因Ⅳ型戊型肝炎病毒感染多以散发形式存在。
- 杜丽雷明刘涛成鹰符生苗王凤阳
- 关键词：戊型肝炎病毒流行病学
- 水牛MD-2 cDNA基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2011年
- 为探讨水牛抵抗革兰阴性菌感染的免疫机制,克隆、表达了水牛髓样分化蛋白-2(bMD-2)基因,并用Western blot进行鉴定。采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bMD-2基因,构建pET28a-bMD-2表达载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,bMD-2基因含有一个483 bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;37℃条件下,经1 mmol/LIPTG诱导表达6 h后,His-bMD-2在E.coliBL21中表达量最高,并以包涵体的形式存在,融合蛋白的分子质量约为25 ku。结果表明水牛MD-2原核表达载体成功构建并表达,为继续深入对水牛MD-2基因功能的研究提供参考。
- 焦寒伟杜丽雷明张冬琳郝永昌张晓茹匡文华成鹰王凤阳
- 关键词：水牛MD-2克隆原核表达
- 海南坡鹿MD2 cDNA的克隆及其生物信息学分析
- 2011年
- 以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码160个氨基酸,与黄牛、人、欧洲兔、褐家鼠的核苷酸序列同源性分别为98.55%,77.43%,78.47%和74.74%。该基因编码的蛋白质相对分子质量约为19×103,理论等电点为8.18。对编码蛋白的分子结构预测发现,该蛋白为非跨膜蛋白,其二级结构中,α-螺旋占16.25%,β-折叠片占38.13%,无规则卷曲占45.63%。
- 杜丽谢少林成鹰张晓茹匡文华焦寒伟张冬琳郝永昌雷明刘涛王凤阳
- 关键词：海南坡鹿克隆生物信息学分析
- 一种抑制水牛膜分化抗原14 基因表达的小核糖核酸分子
- 本发明的一种抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子，通过建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白的人胚肾293细胞系，合成不同小核糖核酸分子，并转染人胚肾293细...
- 王凤阳杜丽雷明焦寒伟成鹰张冬琳郝永昌
- 采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(RalGDS)Ras结合结构域的空间结构
- 2015年
- Ras结合结构域(RBD)是鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子(Ral GDS)家族成员C-端的高保守区,通过它连接Ras和Ras相关蛋白。利用Red Wings和SGC-1 screens相关的悬滴法设盘结晶,按体积比1∶1加蛋白液到含1∶100胞内蛋白酶Glu-C(w/w)的结晶溶液(2 mol/L(NH4)2SO4,0.2 mol/L Na Ac,0.1 mol/L HEPES,5%MPD,p H 7.5)中,晶体3天长成可组装大小。利用X-射线晶体衍射技术解析了人Ral GDS的Ras结合域(Ral GDS-RBD)的晶体结构,对比鼠和人Ral GDS-RBD,主要是Ras结合区的C-端不同。人Ral GDS-RBD通过Glu838和Glu840在Ral GDS和Ras蛋白间形成氢键,而在同一位点,鼠Ral GDS-RBD通过Asp820和Asp822形成氢键。人Ral GDS-RBD结构中含ββαββαβ-型三维结构的泛素样构象,一个单体的C-端残基与相邻单体的β折叠形成平行βββββ结构。
- 黄雪英雷明沈阳张巍刘艳丽刘珂赵浩斌祁超
- 关键词：RAS蛋白
- 海南黄牛Cdc42 cDNA的克隆、表达及鉴定被引量：2
- 2011年
- 试验以构建的海南黄牛外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR的方法筛选出海南黄牛细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)全长cDNA,构建pET28a-Cdc42重组质粒,经IPTG诱导表达后,进行可溶性分析和蛋白纯化,并应用Western blotting对其进行鉴定。结果显示,海南黄牛Cdc42 cDNA的编码框由576个碱基组成,编码191个氨基酸,融合蛋白分子质量约为30 ku,该蛋白主要以包涵体形式存在;纯化后的蛋白经Western blotting检测,发现对应大小的特异性条带,表明本试验成功克隆Cdc42并表达。
- 张冬琳杜丽成鹰刘涛雷明满初日嘎王凤阳
- 关键词：CDC42原核表达纯化
- 一种抑制水牛膜分化抗原14 基因表达的小核糖核酸分子
- 本发明的一种抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子，通过建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白的人胚肾293细胞系，合成不同小核糖核酸分子，并转染人胚肾293细...
- 王凤阳杜丽雷明焦寒伟成鹰张冬琳郝永昌
- 文献传递
