林慧
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划西安市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胃肠道间质瘤KIT及PDGFRA基因突变的检测及分析被引量：5
- 2012年
- 目的:检测胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)KIT及PDGFRA基因的突变位点及类型,探讨其在GIST发病机制中的作用。方法:收集西京医院病理科2006年10月至2010年10月胃肠道间质瘤病例38例,男性20例(52.6%),女性18例(47.4%),从福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)组织中提取基因组DNA。通过PCR扩增目的片段后测序,检测38例样本的KIT和PDGFRA基因突变类型。结果:在38例样本中共检测出KIT基因突变34例,其中32例发生在外显子1 1,突变形式有点突变、插入突变与缺失突变;2例发生在外显子9,均为重复性突变。同时还检出PDGFRA基因突变1例,其余3例样本为野生型。结论:大多数GISTs中存在KIT基因的突变,PDGFRA基因突变可见于部分缺乏KIT突变的GIST中。
- 张秀敏林慧叶菁郭风袁媛隋延仿李增山
- 关键词：胃肠道间质瘤石蜡组织KITPDGFRA基因突变
- 人胃肠道和胃肠外间质瘤microRNA表达谱的比较被引量：1
- 2011年
- 目的:比较消化道原发胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)与胃肠外间质瘤(extra-gastrointestinal stromaltumors,EGISTs)microRNA(miRNA)表达谱的差异,分析其与肿瘤原发部位、突变类型等因素间的关系。方法:收集西京医院病理科的8例石蜡样本(5例GISTs、3例EGISTs),利用安捷伦人miRNA表达谱芯片(芯片覆盖866个人miRNA)进行分析。同时通过PCR扩增后直接测序,明确8例样本的基因突变类型。结果:芯片数据经非监督层次聚类分析,显示8例样本分为3簇,具有相同突变类型的1例胃部GIST和1例EGIST构成第1簇,2例胃部GISTs构成第2簇,其余4例(2例小肠GISTs和2例EGISTs)构成第3簇。将5例GISTs按部位分成2组(胃部和肠道),3例EGISTs分别加入miRNA表型相似的组,2组比较后发现12个miRNA表达有显著差异;预测的靶基因多数参与KIT/PDGFRA的信号转导,其中有5个在肠道组显著下调,部分已有报道与肿瘤的演进相关。比较GISTs和EGISTs的表达谱,发现仅有3个miRNA的表达差异具有统计学意义。结论:GISTs和EGISTs的miRNA表型相似,均与肿瘤部位及突变类型关系密切,因此miRNA表型的分析可能有助于GISTs在分子水平上的分类。
- 林慧张秀敏李增山
- 关键词：胃肠道间质瘤胃肠外间质瘤石蜡组织
- 树突状细胞负载MAGE-n表位肽的体外免疫学效应研究被引量：1
- 2011年
- 目的:研究树突状细胞(dendritic cell,DC)负载MAGE-n表位肽QLVFGIEVV体外诱导特异性CTL的能力及其抗肿瘤效应。方法:MAGE-n表位肽以固相多肽合成技术合成,并用HPLC进行纯化,质谱法(MS)鉴定,以流式细胞仪筛选HLA-A2+人外周血PBMC,连续贴壁法分离培养人外周血来源树突状细胞,用成熟的DC负载MAGE-n表位肽QLVFGIEVV反复刺激活化诱导抗原特异性CTL,用51Cr释放法检测CTL的杀伤活性,并用抗HLA-A2分子单抗进行杀伤抑制实验。结果:用DC负载MAGE-n表位肽QLVF-GIEVV可诱导特异性CTL反应,对MAGE-n阳性表达细胞有较强的杀伤作用。结论:DC负载抗原肽QLVF-GIEVV在体外可诱发较强的特异性免疫反应。
- 张秀敏郭风林慧曲萍
- 关键词：树突状细胞疫苗MAGE-NHLA-A2
- 抗肿瘤疫苗MAGE1-MAGE3-HSP70蛋白特性及其纯化策略的研究
- 2011年
- 目的:对MAGE1-MAGE3-HSP70(M1-M3-HSP70)融合蛋白的理化性质及其纯化策略进行初步研究,为后期的临床前试验提供数据和依据。方法:以本实验室构建的菌种(BL21(DE3)pLysS-M1-M3-HSP70)为材料,采用常规细菌培养及诱导方法进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳、免疫印迹(Western blotting)对目的蛋白进行分析,然后确定盐析条件,使用ButylSepharose HP疏水相互作用层析以及阴离子交换(Source 30Q填料)对目的蛋白的纯化进行分析。结果:M1-M3-HSP70蛋白在大肠杆菌中表达后,目的蛋白分为两部分,一部分为包涵体形式(44.9%),一部分为可溶表达(55.1%)。对其可溶部分进行研究发现,细菌裂解后,目的蛋白存在聚合和降解现象;确定了盐析条件、洗脱缓冲液以及稳定的PH值范围,基本确定了目的蛋白的纯化工艺。结论:明确了M1-M3-HSP70融合蛋白的基本性质,确定了目的蛋白的纯化方法,为基于融合蛋白的肿瘤疫苗的进一步研究提供了参考。
- 张秀敏史琪琪林慧王军伟李增山
- 关键词：融合蛋白降解
- 新基因MAGE-n表位肽与人HSP70融合基因的构建及表达纯化被引量：1
- 2010年
- 目的构建MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)表位肽与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因并表达纯化。方法应用PCR方法,将QLVFGIEVV的cDNA序列融合到人HSP70基因的3'端,将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70;采用双酶切(Sac Ⅰ、Hind Ⅲ)及PCR鉴定后测序;转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达,Ni Sepharose6FF亲和填料进行分离纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果。结果经PCR扩增成功获得约2.0kb的目的片段,重组体经Sac Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切分析及PCR结果与预期结果一致,测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE分析得到71kD左右的目的蛋白条带。用Ni Sepharose6FF亲和填料分离纯化,获得了纯化的融合蛋白。结论成功构建原核表达载体pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70,并获得纯化的融合蛋白,为基于MAGE-n的肿瘤疫苗研制提供良好的抗原奠定了实验基础。
- 张秀敏史琪琪李增山叶菁王军伟林慧曲萍胡沛臻隋延仿
- 关键词：基因融合癌症疫苗MAGE-N表位肽
