隋延仿
- 作品数：206 被引量：551H指数：12
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术经济管理更多>>
- 超抗原SEA(D227A)的构建及其免疫活性鉴定被引量：6
- 2004年
- 目的 构建SEA(D2 2 7A)基因的原核表达载体 ,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定。方法 采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使SEA基因第 6 80位碱基由A突变为C ,致使SEA成熟蛋白的第 2 2 7位氨基酸残基由天冬氨酸 (GAT)突变为丙氨酸 (GCT) ,构建pGEX SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,在大肠杆菌DH5α中原核表达 ,再通过淋巴细胞增殖实验对其免疫活性进行测定。结果 构建的SEA(D2 2 7A)基因经测序证实与设计的序列一致 ;成功地构建pGEX SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌DH5α ,通过IPTG诱导、GSTrapFF柱分离纯化及凝血酶切除GST后 ,得到Mr 为 2 70 0 0的目的蛋白。淋巴细胞增殖实验显示 ,10 0ng mL重组SEA(D2 2 7A)可明显刺激淋巴细胞增殖。结论 成功地构建了SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中得到高效表达 ,所得重组SEA(D2 2 7A)能够刺激淋巴细胞增殖 ,但作用与野生型SEA相比较温和。该结果为寻找有效、毒副作用低的超抗原提供了线索。
- 宋宏萍隋延仿叶菁李增山陈广生张秀敏
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A超抗原原核表达点突变
- 肿瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性细胞毒性T细胞表位的预测及合成鉴定被引量：13
- 2003年
- 目的 采用表位重建技术 ,对预测MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位结合活性进行研究。方法 用SYFPEITHI超基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法 ,筛选新的MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位作为候选表位。对预测的抗原表位进行多肽合成 ,并用HPLC进行纯化 ,质谱法 (MS)鉴定。候选表位与HLA A2位点的亲和力及结合稳定性用竞争结合抑制实验、T2结合稳定性实验及MHC 肽复合体稳定性实验测定。结果 用表位预测法筛选MAGE n抗原 5个HLA A2限制性CTL表位为候选表位。QLVFGIEVV(15 9 16 7)、IMPKTGFLI(195 2 0 3)和FLIIVLVMI(2 0 1 2 0 9) 3个表位具有较高的HLA A2结合力 (IC50 <15 μM)和结合稳定性 (DT5 0 >6h) ,可作为MAGE n抗原HLA A2限制性CTL候选表位进行进一步研究。结论 表位预测结合表位重建方法可提高肿瘤抗原CTL表位研究的效率。MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位经免疫学鉴定后 ,可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究 ,为临床肝癌特异性治疗奠定基础。
- 董海龙隋延仿叶菁李增山曲萍张秀敏陈广生禄韶英
- 关键词：肿瘤抗原MAGE-NHLA-A2细胞毒性免疫学鉴定
- 肝硬变、病毒性肝炎及正常肝组织中间隙连接蛋白Cx32的表达
- 1998年
- 间隙连接（ｃｏｎｎｅｘｉｎ，Ｃｘ）是细胞间的蛋白通道结构，由相邻胞膜上的连接子（ｃｏｎｎｅｘｏｎ）相互衔接而成。通过Ｃｘ介导的细胞间连接通讯（ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，ＧＪＩＣ），对细胞的增殖、分化进行...
- 马向东隋延仿王文亮
- 关键词：肝硬变病毒性肝炎间隙连接蛋白
- 肝细胞肝癌和正常肝细胞间隙连接蛋白Connexin32,Connexin43蛋白质酪氨酸磷酸化分析被引量：9
- 2002年
- 目的 研究肝细胞肝癌和正常肝细胞间隙连接蛋白Cx32、Cx43酪氨酸磷酸化作用的信号转导机制 ,及其对肝癌的重要意义。方法 应用细胞培养 ,Westernblot分析技术 ,研究肝癌细胞系HHCC ,SMMC 772 1和正常肝细胞系QZG中 ,间隙连接蛋白Cx32、Cx43的表达及酪氨酸磷酸化作用。结果 Westernblot分析表明 ,Cx32蛋白在正常肝细胞系QZG细胞中高表达 ,但未出现酪氨酸磷酸化作用 ,Cx32蛋白在HHCC ,SMMC 772 1无明显表达及酪氨酸磷酸化作用。Cx43蛋白在QZG ,SMMC 772 1细胞一定水平的表达仅在SMMC 772 1细胞表现出酪氨酸磷酸化现象 ,在QZG细胞中无酪氨酸磷酸化作用。Cx43蛋白在HHCC细胞中无明显表达及酪氨酸磷酸化现象。结论 肝癌细胞Cx32、Cx43蛋白翻译后水平酪氨酸位点磷酸化修饰作用 ,是调控间隙连接通讯功能的关键 ,间隙连接基因connexin32 ,connexin43翻译后水平调节和信号转导机制异常可能与肝癌的发生密切相关。
- 马向东马兴隋延仿王文亮
- 关键词：信号转导
- 肝癌“双弹头”免疫导向药物的实验研究被引量：4
- 1994年
- 以肝细胞癌单克隆抗体ＨＡｂ１８为载体，用葡聚糖作桥的间接交联方法和氯胺Ｔ法，同时将阿霉素（ＡＤＭ）和１３１Ｉ连接到ＨＡｂ１８上，制备出“双弹头”肝癌免疫导向药物１３１Ｉ－ＨＡｂ１８－ＡＤＭ。其免疫结合率为４３．５％。细胞毒实验结果显示，１３１Ｉ－ＨＡｂ１８－ＡＤＭ对靶肿瘤细胞ＳＭＭＣ－７７２１的杀伤效果较单独应用ＡＤＭ相同浓度的ＨＡｂ１８－ＡＤＭ和比放射性相同的１３１Ｉ－ＨＡｂ１８时，有明显的增强。１３１Ｉ－ＨＡｂ１８－ＡＤＭ具有选择性高效杀伤的作用，它集中了化疗与内放射治疗的优点，互相补充，展示了肿瘤导向治疗的良好前景。
- 刘利隋延仿陈志南刘彦仿
- 关键词：单克隆抗体阿霉素肝细胞瘤抗体
- 一组抗人肝癌单抗相应抗原的表达及位点分析
- 1995年
- 目的：为分析肿瘤细胞的异质性，解决导向诊治中的问题．方法：我们用流式细胞仪定量地测定了四株抗人肝癌单抗在五种不同人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，ＢＥＬ－７４０２，ＱＧＹ－７７０１人肝癌细胞系ＨＨＣＣ，ＨＨＣＣ－９２０４和正常人肝细胞ＱＺＧ中的相应抗原表达及抗原位点分析．结果：Ｈ１８，Ｈ２７和Ｅ５相应抗原在五种人肝癌细胞株中均有表达，Ｆ１１在ＳＭＭＣ－７７２１，ＱＧＹ－７７０１两种肝癌细胞株有表达，但表达量均不相同．Ｈ１８和Ｈ２７有较高的表达，Ｅ５和Ｆ１１低表达．Ｈ１８，Ｈ２７和Ｅ５三株单抗，两两组合其ＡＩ值均大于４０％，表明其抗原位点不同．结论：这为肝癌单抗的导向诊断和治疗提供了指导性的依据．
- 米力陈志南张盈华王茜刘彦仿隋延仿
- 关键词：单克隆抗体流式细胞仪抗原位点肝细胞癌
- 肝癌细胞CD80表达与MHC-Ⅰ分子的关系被引量：4
- 2000年
- 目的：研究共刺激分子CD80在肝癌细胞中的表达与MHC－I（Majorhistocompatibilitycomplex）分子相互关系，以探讨在肿瘤细胞所诱发的免疫排斥反应中共刺激分子对抗原提呈机制的影响。方法：通过逆转录病毒载体介导，将CD80基因转入肝癌细胞系HHCC，以流式细胞仪检测其表面MHC－I分子的表达情况。同时检测LAK细胞对转染前后的细胞的杀伤效果。结果：表达CD80的肝癌细胞其表面MHC－I分子表达明显增高（P＜0.01），而γ－INF刺激对细胞表面MHG-I分子的表达情况并无影响（P＞0.05）。LAK细胞对转染后细胞的杀伤作用远远大于未转染组（P＜0．01），而γ-INF刺激前后的细胞毒活性几乎无改变（P＞0．05）。结论：转染CD80后肝癌细胞高表达MHC-I分子，增强抗原提呈作用的同时又表达第二信号—共刺激分子CD80，从而可诱发更强的免疫排斥反应。
- 李增山hotmail.com隋延仿叶菁
- 关键词：肝癌细胞CD80MHC-I细胞毒基因转染
- MAGE-1与人HSP70融合基因真核表达载体的构建
- 目的构建MAGE-1(melanoma antigen 1)与人HSP70(heat shock protein70)融合基因的真核表达载体pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法利...
- 陈广生隋延仿宋宏萍叶菁黄亚渝马加海张秀敏
- 文献传递
- MAGE-1与人HSP70融合基因真核表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的构建MAGE-1(melanomaantigen1)与人HSP70(heatshockprotein70)融合基因的真核表达载体pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法利用PCR方法扩增人HSP70基因,经测序后连入真核表达载体pCDNA3.1,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因,测序后插入HSP70基因的5'端,构建了MAGE-1与人HSP70融合基因表达载体pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70。结果成功地扩增了人HSP70基因与MAGE-1基因,测序结果表明与GenBank公布的序列一致,成功地构建了pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70真核表达载体。结论成功地构建MAGE-1与人HSP70融合基因的真核表达载体pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70,为进一步DNA肿瘤疫苗研究提供了实验基础。
- 陈广生隋延仿宋宏萍叶菁黄亚渝马加海张秀敏
- 关键词：融合基因
- 肝癌细胞稳定转染B7.1后的免疫学特性被引量：7
- 2000年
- 目的探讨赋予肝癌细胞第二信号分子B7.1、增强癌细胞与淋巴细胞之间的识别与激活作用 ,从而达到增强淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤或抑制作用。方法利用逆转录方法 ,转染B7.1分子至包装细胞系PA317。筛选获得高滴度的克隆后 ,以病毒上清感染肝癌细胞 ,使其表达B7.1分子 ,最后以LDH释放法测定LAK细胞的细胞毒活性。结果肝癌细胞可稳定表达B7.1分子 ,阳性率达94.3% ,未转染的细胞无表达 ;其所诱发的LAK细胞的细胞毒活性明显强于未转染的肝癌细胞组(P<0.01)。结论B7.1分子在淋巴细胞与癌细胞之间的识别过程中起着重要作用 ,可介导淋巴细胞对癌细胞的粘附和识别 ,从而增强淋巴细胞的杀伤作用。这一结果可为今后进一步深入研究B7.1的作用机制 ,以及与其它细胞因子、粘附分子的相互作用打下基础。
- 李增山隋延仿叶菁郭爱林
- 关键词：肝癌细胞B7.1免疫学特性
