周立雄
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 新月柄杆菌RsaA分泌系统用于大肠杆菌胞外递送重组蛋白的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的:构建基于新月柄杆菌RsaA外运机制的以大肠杆菌为宿主的原核胞外分泌表达载体系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将RsaA系统外运功能基因配合以异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒。以绿色荧光蛋白(GFP)为报告分子、大肠杆菌M15为宿主菌,诱导表达后通过Western Blotting检测培养上清中GFP的表达。结果:获得了与设计完全一致的pQABPS载体,利用该载体系统,在培养上清中报告分子GFP的表达明显增加,且是通过特异的RsaA外运机制被分泌至胞外的,而非渗漏表达或简单的信号肽引导。结论:在大肠杆菌中重现了RsaA分泌系统的外运功能,为该系统在基因工程领域的应用研究打下了良好基础。
- 宁亚蕾周立雄肖斌张卫军曾浩毛旭虎邹全明
- 关键词：大肠杆菌
- hIL-24的胞外分泌表达及生物学活性研究
- 目的：实现hIL-24的胞外分泌表达，并验证其体外诱导肿瘤细胞凋亡的生物学活性。
方法：克隆hIL-24并将其分泌表达至胞外培养基中，用ELISA试剂盒定量检测培养上清中重组hIL-24的表达量，用MTT法和形...
- 宁亚蕾周立雄毛旭虎肖洁张卫军杨珺肖斌邹全明
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤细胞病理细胞学生物学活性
- 文献传递
- 基于新月柄杆菌RsaA外运机制的EspA及EspA-IL-24融合蛋白胞外分泌表达研究
- 2008年
- 目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将获得的RsaA系统元件编码序列和异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒,构建新的胞外分泌表达质粒pQABP2S;以大肠杆菌为宿主菌诱导表达EspA及EspA-IL-24融合蛋白,并通过Westernblot检测目标蛋白在培养上清中的表达。结果:获得了新的胞外分泌表达载体pQABP2S;与对照相比,该载体宿主系统培养上清中目标蛋白EspA及EspA-IL-24的表达量明显增加。结论:在大肠杆菌中通过RsaA分泌系统可实现分子大小不同的EspA及EspA-IL-24融合蛋白的特异性分泌表达,进一步证实该分泌表达策略的有效性和通用性;调整调控序列以优化分泌系统的尝试,为此类基因工程技术平台的开发提供了借鉴。
- 宁亚蕾周立雄毛旭虎张卫军程琰余抒邹全明
- 关键词：白细胞介素-24分泌表达大肠杆菌
- 胞外分泌型表达系统pES2c及其制备方法
- 本发明公开了一种胞外分泌型表达系统pES2c及其制备方法。本发明利用DNA操作技术，获得所需的RsaA分泌系统功能基因及调控序列，基于相容质粒pQE30/pBIOEx，按照RsaA分泌系统功能基因的野生型组织方式安排其在...
- 邹全明宁亚蕾周立雄毛旭虎郭刚杨珺肖洁张卫军
- 文献传递
- 大肠杆菌α-溶血素分泌系统基因表达调控研究进展被引量：12
- 2004年
- 引起人泌尿道感染的大肠杆菌(UPEC)的α-溶血素分泌系统属于Ⅰ型分泌系统,能够分泌一种RTX毒素蛋白—α-溶血素。近年来α-溶血素分泌系统的应用日益广泛,特别是在减毒活载体疫苗中呈递外源抗原。本文分析了大肠杆菌α-溶血素分泌系统的遗传特性,详细介绍了其基因的表达调控,为构建更加有效的分泌型载体提供了理论基础。
- 周立雄张兆山
- 关键词：大肠杆菌分泌系统基因
- 利用α-溶血素系统分泌表达重组人白介素-6被引量：4
- 2008年
- 目的构建基于大肠杆菌α-溶血素(HlyA)分泌机制的原核胞外分泌表达载体系统,将重组人白介素6(rhIL-6)分泌至胞外培养基中。方法利用分子克隆手段,从引起人泌尿道感染的大肠杆菌UPECJ96菌株染色体上获得了α-溶血素(HlyA)系统的分泌功能基因,与外源基因片段hIL-6一起克隆至pQE30骨架载体,构建了胞外分泌表达质粒pISQ,转化E.coliTop10,诱导表达后通过Western blot检测培养上清中hIL-6的表达。结果获得了与设计完全一致的pISU载体,Western blot结果显示,可以在pISQ/E.coli Top10培养液上清中检测到与His-hIL6-HlyAs融合蛋白相对分子质量大小一致的特异条带。结论大肠杆菌HlyA分泌系统操纵子能够在染色体和质粒间传递,rhIL-6能够通过该系统被特异地分泌至胞外培养基中,以可溶形式存在,为后续生物学研究奠定了基础。
- 宁亚蕾周立雄张卫军鲁东水肖斌毛旭虎邹全明
- 胞外分泌型表达系统pES2c及其制备方法
- 本发明公开了一种胞外分泌型表达系统pES2c及其制备方法。本发明利用DNA操作技术，获得所需的RsaA分泌系统功能基因及调控序列，基于相容质粒pQE30/pBIOEx，按照RsaA分泌系统功能基因的野生型组织方式安排其在...
- 宁亚蕾邹全明周立雄毛旭虎郭刚杨珺肖洁张卫军
- 文献传递
