张卫军
- 作品数：145 被引量：418H指数：10
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- 新月柄杆菌RsaA分泌系统用于大肠杆菌胞外递送重组蛋白的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的:构建基于新月柄杆菌RsaA外运机制的以大肠杆菌为宿主的原核胞外分泌表达载体系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将RsaA系统外运功能基因配合以异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒。以绿色荧光蛋白(GFP)为报告分子、大肠杆菌M15为宿主菌,诱导表达后通过Western Blotting检测培养上清中GFP的表达。结果:获得了与设计完全一致的pQABPS载体,利用该载体系统,在培养上清中报告分子GFP的表达明显增加,且是通过特异的RsaA外运机制被分泌至胞外的,而非渗漏表达或简单的信号肽引导。结论:在大肠杆菌中重现了RsaA分泌系统的外运功能,为该系统在基因工程领域的应用研究打下了良好基础。
- 宁亚蕾周立雄肖斌张卫军曾浩毛旭虎邹全明
- 关键词：大肠杆菌
- 人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位重组蛋白纯化及免疫活性研究被引量：3
- 2001年
- 王缚鲲邹全明张卫军杨珺田文标郭学青郭红
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白免疫活性
- 重组幽门螺杆菌热休克蛋白A的纯化研究
- 2005年
- 目的对重组幽门螺杆菌热休克蛋白A大肠杆菌工程菌表达的rHspA蛋白进行纯化研究。方法酵后的重组大肠杆菌进行高压破菌后,采用镍离子亲和柱层析和凝胶过滤柱层析相结合的方法分离纯化rHspA,使用SDS-PAGE和HPLC鉴定蛋白纯度,注射免疫家兔检测纯化后的rHspA的免疫学活性。结果所纯化获得的rHspA蛋白纯度>98%,总回收率为60%,并且保持了良好的免疫学活性。结论建立了从重组大肠杆菌中纯化高纯度rHspA的工艺,为Hp疫苗的进一步研究提供了材料。
- 郭鹰邹全明朱永红吴超张卫军
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白柱层析
- 坚固专业思想,深化检验医学教学改革被引量：4
- 2007年
- 随着人类医学的飞速发展,如何培养高素质的检验医学复合型人才成为新课题。为了适应新时期医学发展及教学改革的需要,探索医学院校检验专业教学新模式,在对医学检验专业本科学员专业思想以及专业授课情况调查分析的基础上,探索课堂教学的基本规律,大力开展教学改革,提高实验课质量、加强专业理论课与临床实际的联系,不断提高教学质量。
- 郭刚邹全明童文德刘开云吴超张卫军
- 关键词：教学改革
- EspA-Stx2A1融合蛋白的表达、纯化及其免疫学活性被引量：3
- 2008年
- 目的在原核表达系统中表达肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHECO157∶H7)Ⅲ型分泌蛋白EspA与Stx2毒素A1亚单位(Stx2A1)的融合蛋白,并对表达蛋白进行纯化及免疫学活性检测。方法PCR扩增espA和stx2A1全长基因,利用重叠延伸PCR技术获得espA-stx2A1融合基因,T-A克隆后插入表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET-28a(+)-espA-stx2A1,转化大肠杆菌BL21(DE3),分别在37℃和25℃用IPTG诱导表达。以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化目的蛋白,免疫小鼠,检测其免疫原性及抗血清的反应原性,并以天然Stx2毒素攻击,观察保护效果。通过细胞毒试验检测免疫小鼠抗血清的体外中和作用。结果重叠延伸PCR方法扩增出1319bp的融合基因片段,重组表达质粒构建正确;目的蛋白在25℃时的表达量明显高于37℃,约占菌体总蛋白的40%。两种温度下,目的蛋白均主要以包涵体形式存在;纯化后蛋白纯度可达90%。Western blot结果证实,融合蛋白与EspA单克隆抗体和Stx2A1单克隆抗体均发生特异性反应。融合蛋白免疫小鼠制备的抗血清能分别与O157∶H7的EspA、Stx2A发生特异性免疫反应。融合蛋白免疫小鼠能够抵御致死剂量天然Stx2毒素的攻击,保护率达95%。免疫小鼠血清可以中和天然Stx2毒素对HeLa细胞的毒性作用。结论已成功表达了EspA-Stx2A1融合蛋白,纯化的蛋白显示出较好的免疫保护效果,为研制EHECO157∶H7基因工程多亚单位疫苗奠定了基础。
- 程琰罗萍张卫军顾江邹全明毛旭虎
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7融合蛋白免疫学活性
- 人和易感动物0157菌基因工程多价亚单位疫苗及制备方法
- 本发明属生物制药领域，涉及一种用于人和易感动物O157菌感染免疫预防和治疗的基因工程多价亚单位疫苗及制备方法。该疫苗选用紧密粘附素(Intimin)和志贺毒素I结合亚单位(Stx1B)、志贺毒素II结合亚单位(Stx2B...
- 邹全明易勇毛旭虎朱永红程建平郭刚罗平张卫军
- 文献传递
- 一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗及制备方法
- 本发明涉及一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗，其包含抗原亚单位EspA、IntiminC300和Stx2B，上述抗原亚单位来源于肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7；本发明还涉及上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗的...
- 毛旭虎邹全明肖大平宁元元刘艳青王庆旭易勇余抒程建平童文德张卫军马颖
- 文献传递
- 肠出血性大肠埃希菌O157：H7 tccP基因敲除菌株的构建
- 2009年
- 目的构建肠出血性大肠埃希菌O157∶H7介导和宿主细胞的粘附与擦拭(A/E)损伤相关基因tccP敲除菌株。方法根据GenBank公布的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7基因序列,设计PCR引物,分别扩增克隆tccP基因两端外侧的DNA片段,并与氯霉素耐药基因Cam连接后亚克隆于pBluescriptSKⅡ质粒,通过同源重组替换野生型tccP基因,采用PCR、RT-PCR以及Westernblot分别从DNA、RNA及蛋白质水平鉴定tccP基因是否被敲出。结果在DNA、RNA及蛋白质3个水平均证实Cam片段已成功替换tccP基因而整合进入O157∶H7基因组中。结论成功构建肠出血性大肠埃希菌O157∶H7tccP基因敲除菌株。
- 肖大平郭鹰张卫军顾江王海光朱凤才毛旭虎
- 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157:H7同源重组基因敲除
- EHECO157∶H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化被引量：5
- 2006年
- 目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin2B,Stx2B),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2b基因约210bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coliBL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%。结论EHEC O157∶H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究。
- 马颖毛旭虎邹全明易勇程建平曾明张卫军
- 关键词：基因克隆原核表达纯化
- 重组幽门螺杆菌热休克蛋白A基因工程疫苗制备中的纯化方法
- 本发明公开了重组幽门螺杆菌热休克蛋白A基因工程菌疫苗制备中的纯化方法。采用对基因工程菌进行高压破菌、过滤，镍离子亲和层析纯化、浓缩裂解、凝胶过滤层析及复性等技术，获得高纯度的重组幽门螺杆菌热休克蛋白A。该发明纯化工艺简捷...
- 邹全明郭鹰冉向阳朱永红吴超张卫军童文德
- 文献传递
