刘培
- 作品数：8 被引量：4H指数：2
- 供职机构：南开大学医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项中国博士后科学基金更多>>
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- 重组人心肌肌钙蛋白I纯化方法的对比
- 2014年
- 目的对比两种重组人心肌肌钙蛋白I(rhcTnI)纯化方法,获取稳定的rhcTnI,促进心肌肌钙蛋白(cTnI)诊断标准化的研究。方法超声破碎工程菌获取rhcTnI包涵体,经2%Tritonx-100,2mol/L脲洗涤后溶解在8mol/L脲中,分别经CMFF柱上复性和稀释复性纯化rhcTnI,对比两种方法纯化rhcTnI的获得率及其产物在4、-20、-80℃及冻干条件下的稳定性,确立高效获取稳定的cTnI的纯化方法。结果 0.1g湿重包涵体经CM-FF柱上复性和稀释复性的获得率分别为26.8%和18.9%。4、-20、-80℃及冻干条件下,CM-FF下柱上复性获得的rhcTnI稳定,并且柱上复性纯化周期短,效率高。结论 CMFF柱上复性要比稀释复性纯化rhcTnI高效、稳定。
- 郝庆钦周建平许秀丽刘培温新宇王玲田亚平
- 关键词：心肌肌钙蛋白I稀释复性纯化
- 腺苷同型半胱氨酸水解酶的表达纯化及活性测定方法建立
- 2013年
- 目的获得高纯度的重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH),并建立其活性测定方法。方法运用基因工程技术,在大肠杆菌系统中原核表达重组SAHH,经过镍亲和层析和Sephadex G15两步纯化,得到目的蛋白对其进行理化性质鉴定,并通过优化活性测定条件,确定SAHH活性测定方法。结果终产物SAHH纯度为95%,相对分子质量为49000,比活性为1615U/mg。在37℃、pH7.5的HEPES缓冲液中反应20min为酶活性测定最佳条件,抑制剂可有效抑制酶活性。结论通过基因重组技术可获得高纯度的SAHH,产物理化性质良好,活性测定方法成功建立,为循环酶法测定同型半胱氨酸工艺稳定放大提供可循依据,并且为SAHH抑制剂科学研究提供一种可靠的方法。
- 许秀丽周建平刘培郝庆钦温新宇王玲田亚平
- 关键词：生物活性
- 一对高亲和力抗人肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的获取抗人肌钙蛋白I(cTnI)的单克隆抗体(McAb)。方法以人cTnI作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备了抗人cTnI高亲和力、高特异性单克隆抗体。随后采用间接ELISA法测定抗血清效价,用protein G亲和纯化法纯化抗体,抗原竞争ELISA法鉴定抗体亲和力,SDS-PAGE法鉴定纯度,Western blotting鉴定抗cTnI单克隆抗体的特异性,竞争ELISA法分析抗原结合位点。结果筛选出9株稳定分泌抗cTnI的单抗杂交瘤细胞株,其中A3、A9两株免疫球蛋白亚类均为IgG2a,分泌的抗体纯度高,与CK-MB、cTnT无交叉反应,效价均为:1∶1024000,亲和力分别为4.21×108mol/L、1.07×108mol/L,抗原结合位点不同。结论成功制备出了一对高亲和力、高特异性抗人cTnI单克隆抗体。
- 郝庆钦周建平韩旭刘培许秀丽温新宇王玲田亚平
- 关键词：单克隆抗体特异性
- 一种能稳定保存的人NT-proBNP制剂及其制备方法
- 本发明涉及一种能稳定保存的人NT-proBNP制剂及其制备方法，以及能高产量重组表达人NT-proBNP的方法，具体涉及利用大肠杆菌表达系统生产制备重组人B型利钠肽前体（NT-proBNP），通过制备过程和条件的优化，获...
- 许秀丽田亚平刘培郝庆钦
- 文献传递
- 重组人BDNF对Aβ25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用
- 2011年
- 目的观察人脑源性神经营养因子(BDNF)对Aβ25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用。方法取新生wistar大鼠海马细胞进行体外培养。分别加入不同浓度的BDNF及聚集态Aβ25-35作用于培养的海马神经元,采用MTT法观察BDNF对Aβ25-35致海马神经元存活率影响及Hoechst 33342染色观察BDNF对Aβ25-35致海马细胞凋亡的影响。结果显微镜下观察BDNF处理组比Aβ25-35模型组细胞损伤小,细胞生长良好。MTT结果显示随着BDNF浓度增高,细胞存活率逐渐增高,在0.6nmol/L时最明显,与Aβ25-35模型组比较,细胞存活率显著增高(P<0.01)。Hoechst 33342染色显示随着BDNF浓度增大凋亡率减少,与Aβ25-35组比较凋亡率均显著减少(P<0.01)。结论 BDNF对培养海马神经元有神经营养活性,对Aβ致培养海马神经元的损伤有保护作用。
- 周建平温新宇刘培许秀丽田亚平
- 关键词：海马神经元淀粉样Β蛋白
- 异丙酚对缺血再灌注损伤神经细胞突触素表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的研究异丙酚对缺血再灌注损伤神经细胞的保护及海马原代细胞和脑组织中突触素的表达情况。方法取12h新生Wistar大鼠海马细胞体外培养,建立原代海马细胞缺糖缺氧再给氧模型(oxygen glucose deprivation,OGD)。流式细胞仪检测应用异丙酚对海马细胞OGD后死亡和凋亡的影响,免疫细胞化学观察海马细胞中突触素(synaptophysin)的表达。建立SD大鼠脑缺血再灌注损伤的大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,分为模型组、异丙酚用药组、正常对照组。观测各组动物术后7d、14d的体重变化及神经症状评分;将术后14d大鼠取脑,观测皮质中突触素的表达。结果海马细胞缺糖缺氧再给氧显示异丙酚用药组海马细胞存活数量较多、凋亡细胞减少,海马细胞中突触素表达显著增强。大鼠模型7d体重变化异丙酚用药组为(285.0±1.6)g较模型组(165.0±8.6)g显著降低(P<0.01)。14d体重变化异丙酚用药组为(304.7±8.6)g较模型组(182.5±23.5)g显著降低(P<0.01)。7d神经症状评分异丙酚用药组为1.17±0.23,较模型组1.83±0.24显著降低(P<0.05)。14d评分异丙酚用药组为1.00±0.41较模型组2.33±0.47也显著降低(P<0.05)。免疫染色可见异丙酚用药组大脑皮质突触素的表达相较模型组明显增强。结论细胞和动物模型均显示异丙酚对缺血再灌注损伤后神经细胞具有保护作用,并可增加皮质神经细胞中突触素的表达。
- 陈娜冯泽国温新宇许秀丽任汝通刘培周建平
- 关键词：异丙酚缺血再灌注损伤突触素
- S-同型半胱氨酸甲基转移酶活性检测和保存方法的建立
- 2014年
- 目的建立一种简单的S-同型半胱氨酸甲基转移酶(HMT)活性测定方法,确定HMT的最佳使用条件,并初步探索HMT的保存方法。方法采用原核表达系统制备HMT,经镍亲和层析和Sephadex G15两步纯化。SDS-PAGE对目的蛋白进行理化性质鉴定。基于5,5′-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)可以特异性地与含有巯基的化合物快速发生化学反应的原理,通过检测同型半胱氨酸的减少量来计算酶活性,确定HMT最佳活性测定条件。比较添加和不添加甘油的两组HMT酶液置于不同温度下保存,定期测定活力;在HMT酶液中加入不同浓度的不同保护剂,比较冷冻干燥后的活性保留率。结果重组表达的酶纯度高达95%以上,相对分子质量为36 000,具有良好的催化活性,比活为2 000U/mg。在37℃、pH7.4的HEPES缓冲液中反应25min为酶活性测定最佳条件。加入甘油能明显延长酶的保存时间并且酶液在6个月内的活力保留一半。冷冻保护剂甘露醇和海藻糖的添加对HMT酶冻干品的酶活保留率分别为104.0%和100.0%。结论通过基因工程技术获得HMT,建立了简单的HMT活性测定方法,并确定了该酶的最佳保存方法,为临床应用奠定了基础。
- 刘培周建平许秀丽郝庆钦温新宇王玲田亚平
- 关键词：亲和层析法活性测定
- 非对称二甲基精氨酸单克隆抗体的制备与鉴定
- 2014年
- 目的制备抗非对称二甲基精氨酸(ADMA)的单克隆抗体并对其临床检验应用做进一步研究。方法应用固相合成技术人工合成免疫抗原短肽,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,ELISA和蛋白质印迹法对抗体的特异性进行鉴定。结果获得2株能稳定分泌抗ADMA抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为22-1-1和38-1-6,这2株单克隆抗体均能够与ADMA特异性结合。结论成功制备抗ADMA单克隆抗体,为进一步应用到临床检验奠定了基础。
- 刘培周建平温新宇田亚平
- 关键词：非对称二甲基精氨酸杂交瘤单克隆抗体
