郝庆钦
- 作品数：7 被引量：4H指数：2
- 供职机构：郑州大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺苷同型半胱氨酸水解酶的表达纯化及活性测定方法建立
- 2013年
- 目的获得高纯度的重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH),并建立其活性测定方法。方法运用基因工程技术,在大肠杆菌系统中原核表达重组SAHH,经过镍亲和层析和Sephadex G15两步纯化,得到目的蛋白对其进行理化性质鉴定,并通过优化活性测定条件,确定SAHH活性测定方法。结果终产物SAHH纯度为95%,相对分子质量为49000,比活性为1615U/mg。在37℃、pH7.5的HEPES缓冲液中反应20min为酶活性测定最佳条件,抑制剂可有效抑制酶活性。结论通过基因重组技术可获得高纯度的SAHH,产物理化性质良好,活性测定方法成功建立,为循环酶法测定同型半胱氨酸工艺稳定放大提供可循依据,并且为SAHH抑制剂科学研究提供一种可靠的方法。
- 许秀丽周建平刘培郝庆钦温新宇王玲田亚平
- 关键词：生物活性
- 重组人肌钙蛋白I(cTnI)体外诊断试剂盒的初步研制
- 人心肌肌钙蛋白Ⅰ(human cardiac troponin，cTnⅠ)是检测心肌损伤的重要标志物，因其高度的心肌特异性、敏感性，及较长的诊断窗口期已经广泛的应用于心肌损伤临床诊断、疗效观察和风险分层等方面.国际临床化...
- 郝庆钦
- 关键词：多克隆抗体单克隆抗体酶联免疫吸附试验体外诊断
- 文献传递
- 重组人心肌肌钙蛋白I纯化方法的对比
- 2014年
- 目的对比两种重组人心肌肌钙蛋白I(rhcTnI)纯化方法,获取稳定的rhcTnI,促进心肌肌钙蛋白(cTnI)诊断标准化的研究。方法超声破碎工程菌获取rhcTnI包涵体,经2%Tritonx-100,2mol/L脲洗涤后溶解在8mol/L脲中,分别经CMFF柱上复性和稀释复性纯化rhcTnI,对比两种方法纯化rhcTnI的获得率及其产物在4、-20、-80℃及冻干条件下的稳定性,确立高效获取稳定的cTnI的纯化方法。结果 0.1g湿重包涵体经CM-FF柱上复性和稀释复性的获得率分别为26.8%和18.9%。4、-20、-80℃及冻干条件下,CM-FF下柱上复性获得的rhcTnI稳定,并且柱上复性纯化周期短,效率高。结论 CMFF柱上复性要比稀释复性纯化rhcTnI高效、稳定。
- 郝庆钦周建平许秀丽刘培温新宇王玲田亚平
- 关键词：心肌肌钙蛋白I稀释复性纯化
- 一对高亲和力抗人肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的获取抗人肌钙蛋白I(cTnI)的单克隆抗体(McAb)。方法以人cTnI作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备了抗人cTnI高亲和力、高特异性单克隆抗体。随后采用间接ELISA法测定抗血清效价,用protein G亲和纯化法纯化抗体,抗原竞争ELISA法鉴定抗体亲和力,SDS-PAGE法鉴定纯度,Western blotting鉴定抗cTnI单克隆抗体的特异性,竞争ELISA法分析抗原结合位点。结果筛选出9株稳定分泌抗cTnI的单抗杂交瘤细胞株,其中A3、A9两株免疫球蛋白亚类均为IgG2a,分泌的抗体纯度高,与CK-MB、cTnT无交叉反应,效价均为:1∶1024000,亲和力分别为4.21×108mol/L、1.07×108mol/L,抗原结合位点不同。结论成功制备出了一对高亲和力、高特异性抗人cTnI单克隆抗体。
- 郝庆钦周建平韩旭刘培许秀丽温新宇王玲田亚平
- 关键词：单克隆抗体特异性
- 一种能稳定保存的人NT-proBNP制剂及其制备方法
- 本发明涉及一种能稳定保存的人NT-proBNP制剂及其制备方法，以及能高产量重组表达人NT-proBNP的方法，具体涉及利用大肠杆菌表达系统生产制备重组人B型利钠肽前体（NT-proBNP），通过制备过程和条件的优化，获...
- 许秀丽田亚平刘培郝庆钦
- 文献传递
- S-同型半胱氨酸甲基转移酶活性检测和保存方法的建立
- 2014年
- 目的建立一种简单的S-同型半胱氨酸甲基转移酶(HMT)活性测定方法,确定HMT的最佳使用条件,并初步探索HMT的保存方法。方法采用原核表达系统制备HMT,经镍亲和层析和Sephadex G15两步纯化。SDS-PAGE对目的蛋白进行理化性质鉴定。基于5,5′-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)可以特异性地与含有巯基的化合物快速发生化学反应的原理,通过检测同型半胱氨酸的减少量来计算酶活性,确定HMT最佳活性测定条件。比较添加和不添加甘油的两组HMT酶液置于不同温度下保存,定期测定活力;在HMT酶液中加入不同浓度的不同保护剂,比较冷冻干燥后的活性保留率。结果重组表达的酶纯度高达95%以上,相对分子质量为36 000,具有良好的催化活性,比活为2 000U/mg。在37℃、pH7.4的HEPES缓冲液中反应25min为酶活性测定最佳条件。加入甘油能明显延长酶的保存时间并且酶液在6个月内的活力保留一半。冷冻保护剂甘露醇和海藻糖的添加对HMT酶冻干品的酶活保留率分别为104.0%和100.0%。结论通过基因工程技术获得HMT,建立了简单的HMT活性测定方法,并确定了该酶的最佳保存方法,为临床应用奠定了基础。
- 刘培周建平许秀丽郝庆钦温新宇王玲田亚平
- 关键词：亲和层析法活性测定
- SysmexXN-3000全自动血液分析仪性能评价被引量：2
- 2015年
- 目的对Sysmex XN-3000全自动血液分析仪性能进行评价。方法依照行业标准对Sysmex XN-3000的本底计数、携带污染率、准确度、精密度、线性范围、可比性等指标进行评价,并以显微镜法为"金标准",评价其白细胞分类的准确性。结果 Sysmex XN-3000对全血细胞各项参数的本底计数均为0,携带污染率≤0.38%;除极低值水平PLT-I/O外,各种浓度水平患者全血样品或室内质控物的批内精密度、日间精密度均符合卫生行业标准,各参数线性范围相关系数均≥0.975,a≤1±0.05,符合CLSI文件和卫生行业标准要求。与Sysmex XE-1800相比,WBC、Ret、Hb、PLT参数线性相关系数≥0.975,a≤1±0.05;白细胞分类方面,与人工显微分类相比,中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞的相关系数分别为0.972、0.991、0.654、0.381、0.518,P<0.05。结论 Sysmex XN-3000具有携带污染率低、精密度高、线性范围宽的特点,并且同Sysmex XE-1800及人工显微镜分类计数具有很好的一致性,可用于临床大批量标本常规分析。
- 陈光意郝庆钦周丽莉
- 关键词：血液分析仪性能评价全血细胞计数
