张粉丽
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金郑州市重点科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学理学医药卫生更多>>
- 芬苯达唑混悬剂的制备与含量测定方法的建立
- 2015年
- 以芬苯达唑为主药,选择合适的助悬剂、润湿剂等辅料制备混悬剂,并建立该混悬剂中芬苯达唑含量测定方法。采用紫外-可见分光光度法,以217nm为测定波长,测定芬苯达唑混悬剂中芬苯达唑的含量。在1.08μg/mL^10.80μg/mL浓度范围内,标准曲线y=0.099 2x-0.033 6,线性回归相关性好(R2=0.995 3,n=5)。芬苯达唑的平均回收率为98.60%,变异系数为0.48%,日内和日间精密度RSD均小于5%,表明该方法专属性好,测定结果稳定可靠。此方法可以用于芬苯达唑混悬剂有效成分的含量测定。
- 张粉丽党丽梅杨小怀张要齐孙雪峰童光年贾维彬杨小凡李引乾
- 关键词：芬苯达唑混悬液紫外-可见分光光度法
- 奶牛生物钟基因CLOCK的真核表达载体构建、生物信息学分析及其组织表达谱
- 2023年
- 旨在克隆奶牛昼夜运动输出周期(circadian locomotor output cycles kaput,CLOCK)基因的蛋白编码区序列(coding sequence,CDS),构建该基因的真核表达载体,检测CLOCK基因在奶牛不同组织的相对表达丰度,并预测分析奶牛CLOCK蛋白的高级结构、理化性质及其功能特征。以奶牛肝脏组织cDNA为模板,通过PCR扩增奶牛CLOCK基因CDS区片段,利用同源重组法将其连接至pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体;经酶切与测序鉴定后,将鉴定正确的质粒命名为pcDNA3.1-Puro-N-3HA-bCLOCK;将pcDNA3.1-Puro-N-3HA空质粒和pcDNA3.1-Puro-N-3HA-bCLOCK重组质粒分别转染至HEK293T细胞,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)检测CLOCK蛋白的过表达效率;提取奶牛的心、肝、脾、肺等10个组织的总RNA并反转录为cDNA,以此为模板通过实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测CLOCK基因在奶牛不同组织的表达变化;同时,利用生物信息学软件对奶牛CLOCK基因及其编码蛋白进行功能预测分析。琼脂糖凝胶电泳结果显示,成功克隆了奶牛CLOCK基因全长CDS区片段。酶切与测序结果显示,pcDNA3.1-Puro-N-3HA-bCLOCK真核表达载体构建成功。Western blot结果表明,该真核表达载体在HEK293T细胞中成功表达HA-CLOCK融合蛋白。qPCR结果表明,CLOCK基因在心、肝、脾、肺等10个组织中均有表达,其中在心脏表达最高,在小肠表达最低。生物信息学分析结果表明,奶牛CLOCK基因的CDS区与绵羊、山羊、骆驼的相似性较高;奶牛CLOCK蛋白由845个氨基酸组成,分子质量为95.12 kDa,无跨膜结构域与信号肽,为亲水性蛋白,二级结构中富含α-螺旋;奶牛CLOCK蛋白的三级结构与绵羊、人和小鼠的差异极小。结论:本研究成功克隆了奶牛CLOCK基因全长CDS区片段并构建了其真核表达载体,qPCR检测CLOCK基因在奶牛不同组织的表达谱,通过生物信息学预测分析CLOCK蛋白的结构与功能特性,为进一步探究奶牛CLOCK基因的生物学功能提�
- 杨王浩王博刘薇刘薇董浩张粉丽张粉丽李超李超刘祖培靳亚平陈华涛
- 关键词：奶牛真核表达载体生物信息学分析
- 牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用
- 本发明公开了牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用，属于基因的克隆、真核表达载体的构建技术领域，本发明提供的牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用，成功构建了牛RORα基因的真核表达载体，补充了牛RO...
- 陈华涛秦新喜刘薇靳亚平王逢博杨王浩赵泓淙张粉丽
- 奶牛RORα基因的生物信息学分析与组织表达谱检测
- 2023年
- 本研究旨在克隆奶牛(Bos taurus)维甲酸相关孤儿受体α(retinoic acid-related orphan receptor alpha,RORα)的蛋白编码序列(coding sequence,CDS),预测分析其结构与功能特征并验证其真核表达载体在HEK293T细胞中的过表达效果,进一步检测RORα基因在奶牛不同组织的表达谱。本研究提取了奶牛肝脏组织的总RNA,反转录得到cDNA,经过PCR扩增后获得奶牛RORα基因的CDS区片段,随后将其与pcDNA3.1-Puro-N-3HA线性化载体进行同源重组连接。转化感受态细胞DH5α后,对初步鉴定为阳性克隆的重组质粒进行测序。结合测序结果,利用ExPASy、Protscale和DNAstar等生物信息学软件,对奶牛RORα蛋白的理化性质和功能特性进行预测分析。将对照组空质粒pcDNA3.1-Puro-N-3HA和试验组重组质粒pcDNA-3.1-3HA-RORα分别转染至HEK293T细胞,借助实时定量PCR和蛋白质印迹法检测奶牛RORα基因的过表达效果。借助半定量RT-PCR技术检测奶牛RORα基因在肝脏、脾脏和肌肉等7个组织的相对表达量。PCR结果显示,成功克隆了奶牛RORα基因的CDS区片段;酶切及测序结果表明重组质粒pcDNA3.1-3HA-RORα构建成功;生物信息学软件预测分析结果表明,奶牛RORα蛋白三级结构与山羊(Capra hircus)、小鼠(Mus musculus)的高度相似;不同物种间同源性比对显示,奶牛RORα基因与山羊的相似性最高;实时定量PCR和蛋白印迹法结果表明,与对照组相比,试验组HEK293T细胞中奶牛RORα基因的mRNA和蛋白表达水平均显著升高;半定量RT-PCR结果表明,在所检测的7个组织中,奶牛RORα基因在肝脏表达量最高,在脾脏表达量最低。本研究成功克隆了奶牛RORα基因的CDS区片段,在HEK293T细胞中验证了其真核表达载体在mRNA和蛋白水平的表达效果,并分析了其结构与功能特征,检测了其在不同组织的表达谱,为深入探究其在奶牛生殖与代谢调控中的作用机制提供了前期基础。
- 刘薇刘薇王逢博王博杨王浩张粉丽高登科张海森李超靳亚平李超
- 关键词：奶牛表达谱生物钟生物信息学分析
- 芬苯达唑混悬剂的制备及其质量控制
- 本试验以芬苯达唑为主药，选择合适的助悬剂、润湿剂等辅料制备混悬剂，并建立该混悬剂的质量控制方法。试验采用单因素试验和正交设计试验筛选处方并优化处方;芬苯达唑混悬剂的药剂学特性检查包括物理性状的检查、再分散性试验、沉降体积...
- 张粉丽
- 关键词：芬苯达唑单因素试验正交实验紫外-可见分光光度法
- 文献传递
