靳亚平
- 作品数：233 被引量：603H指数：12
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 奶山羊BLG基因敲除载体的构建被引量：2
- 2011年
- 根据已知的BLG序列设计引物,通过PCR技术克隆同源臂序列,5′端同源臂2 264bp,包括外显子1,3′端同源臂4 461bp,包括全部的外显子3、4、5、6、7,分别连入克隆载体pMD18-T Simple载体中并测序。然后以含有正负筛选标记基因的ploxpⅡ载体为基础,将5′端和3′端同源臂片段先后连入其中,进行酶切、PCR鉴定。将构建好的基因敲除载体转化组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌BM25.8,验证Loxp位点的活性。结果表明,构建了奶山羊BLG基因第2外显子缺失的基因敲除载体pBLG2T,且pBLG2T载体中的正选neo基因可以被Cre重组酶去除。为获得BLG 1条等位基因缺失型细胞株以及培育高产优质奶山羊新品种奠定基础。
- 陈华涛李倩胡林勇王爱华靳亚平刘军杨艳
- 关键词：奶山羊基因敲除打靶载体
- 一种与山羊早期妊娠相关的LncRNA及其应用
- 本发明提供了一种与山羊早期妊娠相关的LncRNA，该LncRNA为LncRNA ISG15‑AS，核苷酸序列为SEQ.ID.No.1。还提供了应用，LncRNA ISG15‑AS作为山羊早期妊娠标志物，用于制备检测山羊早...
- 林鹏飞高楚茜靳亚平李寒冰肖劲邦
- 兔精液液态冷藏效果观察
- 2009年
- 目的探讨兔精液在4℃条件下的液态冷藏保存方法。方法将采集的新鲜兔精液分成三份，一份不稀释，另外两份用Ⅰ、Ⅱ稀释液分别进行稀释，在4℃条件下保存，每隔12h取部分精液在37℃平衡5min，进行活力检测，比较分析各组精子存活率的差异性。结果72h后，兔精液原液中的精子存活率为58．2％，显著高于稀释组。结论将精液原液通过慢速降温保存在4℃条件下，可以有效延长兔精子在离体状态下的存活时间，可以用来进行兔精液的液态保存。
- 杨博刘丽均高娟贾青郁丽丽靳亚平施恩
- 关键词：液态冷藏
- 家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养被引量：6
- 2007年
- 本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法。用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添加20%胎牛血清(FBS)、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L雌二醇(E2)、7.14nmol/L孕酮(P4)的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2的饱和湿度条件下培养;用免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞并检测分离的细胞纯度。结果表明用该方法成功地分离培养了兔子宫内膜上皮细胞和基质细胞,且2种细胞纯度都达98%左右,基质细胞出现蜕膜化;子宫平滑肌细胞的纯度为97%左右,而且出现横纹状的生长。本研究表明子宫内膜细胞和平滑肌细胞能够在体外成功培养;在含20%FBS、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L E2、7.14 nmol/L P4的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2饱和湿度的培养条件下最有利于体外培养的子宫内膜细胞和平滑肌细胞的生长。
- 陈秀荔赵永贞靳亚平张彦明
- 关键词：子宫内膜细胞平滑肌细胞免疫组织化学免疫荧光蜕膜化
- 猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化被引量：1
- 2011年
- 【目的】研究猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化,为了解猪有腔卵泡发育与闭锁的调控机理提供参考。【方法】从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡3类;再按卵泡直径大小分为大卵泡组（〉5 mm）、中卵泡组（3~5 mm）和小卵泡组（〈3 mm）3组,制作完整有腔卵泡的石蜡切片,HE染色后观察其形态学变化。应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况,放射免疫测定法（RIA）分析卵泡液中雌二醇（E2）和孕酮（P4）浓度的变化。【结果】不同大小健康卵泡内均存在少量的凋亡颗粒细胞,卵泡闭锁时颗粒细胞凋亡率显著增加,小卵泡表现尤为明显;晚期闭锁小卵泡中约有60%的颗粒细胞发生凋亡。健康大卵泡组E2浓度显著高于中、小卵泡组,P4浓度与中卵泡组无差异,但显著低于小卵泡组。卵泡闭锁时不同大小卵泡均表现出E2浓度显著下降和P4浓度显著增加。中、小健康卵泡的卵泡液中P4/E2〈5,而健康大卵泡中P4/E2〈1;早期闭锁大卵泡卵泡液中P4/E2〉1,而早期闭锁中、小卵泡中P4/E2在5~15;当P4/E2〉15时,卵泡则处于晚期闭锁状态。【结论】颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因,但卵泡闭锁程度因卵泡大小而异,小卵泡似乎更易发生闭锁;卵泡液中P4/E2可作为判定有腔卵泡质量的一个标准。
- 林鹏飞剧世强罗碧平郝元斌王利勤芮荣靳亚平
- 关键词：有腔卵泡颗粒细胞凋亡孕酮雌二醇
- 嗜酸乳杆菌体外黏附山羊子宫内膜上皮细胞条件的优化被引量：2
- 2011年
- 【目的】优化嗜酸乳杆菌对永生化山羊子宫内膜上皮细胞体外黏附的条件。【方法】通过革兰氏染色法,研究山羊子宫内膜上皮细胞的生长状态,嗜酸乳杆菌菌液浓度、菌体生长状态和pH值以及孵育时间对菌体黏附性能的影响。【结果】当山羊子宫内膜上皮细胞培养48 h,嗜酸乳杆菌菌液浓度为1.0×109mL-1,pH值为4.0,孵育时间120 min,嗜酸乳杆菌培养24 h时,嗜酸乳杆菌对山羊子宫内膜上皮细胞的黏附性最好。【结论】永生化山羊子宫内膜上皮细胞作为细菌黏附性能研究的体外模型是有效可行的。
- 白东宁齐雪峰赵献军段连茂靳亚平李义王大会王芳
- 关键词：嗜酸乳杆菌子宫内膜上皮细胞体外培养
- 山羊CREBZF蛋白两种亚型过表达载体的构建及其对子宫内膜上皮细胞凋亡的影响被引量：1
- 2022年
- 旨在构建编码山羊CREBZF蛋白2种亚型(长亚型SMILE和短亚型Zhangfei)基因的过表达载体,并初步探究CREBZF对山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)凋亡的影响。本研究针对编码山羊CREBZF不同亚型的基因CDS区分别设计引物,分段进行PCR扩增;运用无缝克隆技术将所获得各目的基因片段与线性化pcDNA3.1(+)载体连接,构建pcDNA3.1(+)-SMILE和pcDNA3.1(+)-Zhangfei重组过表达载体,通过双酶切和测序进行鉴定;转染过表达载体至gEECs,提取总RNA和蛋白,通过qRT-PCR和Western blot验证过表达效率;应用流式细胞术检测过表达SMILE和Zhangfei对gEECs凋亡率的影响。PCR、双酶切显示各目的条带大小正确;测序显示目的片段与NCBI基因库中山羊CREBZF的预测序列一致性为100%;转染过表达载体后,gEECs中SMILE与Zhangfei在转录和翻译水平的表达量均显著增加,并发现SMILE可能在翻译后自身被修饰;空载体组细胞凋亡率为8.45%;转染pcDNA3.1(+)-SMILE组凋亡率显著上升至12.41%(P<0.01);转染pcDNA3.1(+)-Zhangfei组凋亡率上升至9.83%,但相较于空载体组统计学差异不显著;结果提示,CREBZF可能调控gEECs的凋亡进程。本研究将目的基因分段克隆与无缝克隆技术联用,构建了上述2种过表达载体,为进一步探究CREBZF在反刍动物子宫内膜上皮细胞周期性变化中的作用奠定基础。
- 牛宏宇张瑞雪齐茂振马玉洁曲栓靳亚平林鹏飞
- 关键词：凋亡
- 牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用
- 本发明公开了牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用，属于基因的克隆、真核表达载体的构建技术领域，本发明提供的牛RORα基因的克隆、真核表达载体的构建及其应用，成功构建了牛RORα基因的真核表达载体，补充了牛RO...
- 陈华涛秦新喜刘薇靳亚平王逢博杨王浩赵泓淙张粉丽
- 布鲁氏菌LPS对子宫蜕膜化及内质网应激的影响
- 为研究布鲁氏菌LPS与胚胎附植的关系,利用提取的布鲁氏菌LPS分别刺激妊娠小鼠、体外分离的妊娠小鼠子宫内膜基质细胞和山羊子宫内膜上皮细胞系(EEC),利用HE染色、Western blot、qRT-PCR、ELISA和流...
- 雷兰杰徐光斌周栋靳亚平王爱华
- 关键词：布鲁氏菌LPS胚胎附植子宫内膜细胞山羊
- 隐性乳腺炎乳牛乳样中苏云金芽孢杆菌的分离与鉴定被引量：5
- 2004年
- 王贇靳亚平利光辉陈秀荔
- 关键词：牛乳苏云金芽孢杆菌培养基
