张传健
- 作品数：25 被引量：21H指数：2
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- 伪狂犬病病毒三基因缺失弱毒株及其应用
- 本发明提供伪狂犬病病毒三基因缺失弱毒株及其应用，属于动物疫苗领域。该伪狂犬病病毒三基因缺失弱毒株的US3（PK）基因缺失位点为第1～13位核苷酸，TK基因缺失位点为第184～530位核苷酸，gE基因缺失位点为第13～12...
- 王继春许梦微张传健王志胜郭容利郑亚婷陈赛赛
- 猪源伪狂犬病病毒变异株传代致弱株LA2017株的获得与鉴定
- 2021年
- 将猪源伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的强毒变异株AH02LA株在鸡胚成纤维细胞上进行连续传代,获得了不同代次的弱毒株,检测其安全性、免疫效力、生长特性及稳定性,并对其gE基因上、下游片段进行测序。对PRV AH02LA株的F151代进行3轮挑斑纯化,获得了1个毒株并将其命名为PRV LA2017株。用该毒株接种(剂量为106.00TCID50/头)试验猪,在接种后14 d内无任何临床症状;在免疫(106.00 TCID50/头)后21 d攻毒(106.50TCID50/头),所有试验猪未出现任何猪伪狂犬病症状,体温正常,没有排毒。在攻毒前用ELISA检测,PRV gB抗体全部为阳性,PRV gE抗体全部为阴性;在攻毒后14 d这两种抗体均为阳性,体现出良好的安全性与保护性。对照组BarthaK61在攻毒后试验猪全部发病,体温高至40.5℃以上,且均检出排毒。测序结果显示LA2017株的gI部分基因与gE全部基因缺失。该毒株在CEF细胞及ST细胞上生长良好,在CEF上的滴度达到108.0TCID50/mL,在ST细胞上的滴度最高达109.5TCID50/mL,能满足活疫苗生产的要求。LA2017株安全性好,免疫效力强,生长滴度高,可以作为研制针对PRV变异株疫苗的候选毒株。
- 郑亚婷郭容利陈赛赛乔永峰乔永峰许梦微王志胜张传健许梦微王继春
- 关键词：变异株基因缺失免疫效力
- 猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗（LA-A株）的最小免疫剂量和制品保存期的研究被引量：1
- 2020年
- 本研究将伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株(PRV AH02LA株)的gE基因缺失株(LA-A株)接种BHK-21细胞,经纯悬浮培养制备抗原,甲醛灭活后制备油乳剂灭活疫苗,并确定该灭活疫苗的最小免疫剂量和效力检验方法,以及在2~8℃保存期。结果显示:猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗(LA-A株)的效力检验方法为以2.0 mL(抗原含量108.20TCID50)接种4~5周龄PRV阴性健康仔猪,颈部肌肉注射,间隔28 d以相同剂量和方法加强免疫,加强免疫后第21 d,免疫猪血清PRV抗体中和指数应不低于10000,攻毒保护率应不低于80%;最小免疫剂量为1.0 mL(抗原含量107.90 TCID50);制品保存期:在2~8℃保存期为18个月。该研究结果为新型疫苗的研制提供了重要的试验依据。
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- 关键词：猪伪狂犬病灭活疫苗最小免疫剂量保存期
- 鸭瘟病毒LH2011强毒株部分基因序列的测定与分析被引量：2
- 2013年
- 为了分析鸭瘟病毒LH2011强毒株部分基因序列的特征。设计6对特异性引物,应用PCR方法扩增鸭瘟病毒强毒株LH2011株的LORF11、UL47、UL41、UL12、UL2和US10序列,然后对PCR产物进行序列测定,并与已发表的鸭瘟病毒的同源序列进行比较。序列分析结果显示,LH2011株LORF11同源子与中国强毒株CHv中有相同的结构,而与欧洲强毒株(2085株、Jansen株、Holland株和D11-JW-016株)和中国疫苗株(VAC株和Clone-03株)存在较大差异,发生了大片段碱基插入,使其被分为LORF11A和LORF11B 2个开放阅读框(ORF)。UL47、UL41、UL12、UL2和US10序列与德国强毒株2085株完全一致,其中UL2序列与N3株、LS株、N2株、N1株、2085株和CHv株6株强毒株均一致,而在Attenuated strain 2株、Attenuated strain 1株、Clone-03株和VAC株4个弱毒株中都缺失了一个528 bp的大片段。表明:LH2011株具有强毒株的基因型特征,提示弱毒株中LORF11同源子和UL2发生的大片段碱基缺失很可能与病毒的毒力减弱直接相关。
- 王继春张传健许梦微王志胜侯继波
- 关键词：鸭瘟病毒毒力
- 应用荧光定量PCR方法检测伪狂犬病病毒弱毒株在猪体组织中的分布
- 2023年
- 为了解伪狂犬病病毒(PRV)TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪体组织中的分布情况,针对PRV gB基因保守区设计并合成1对特异性引物,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法特异性强且敏感度高,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株免疫仔猪后可少量存在于大脑、小脑、肝脏、脾脏、肺脏、扁桃体和颌下淋巴结中,部分仔猪鼻甲骨病毒含量较高。应用本研究建立的荧光定量PCR方法阳性检出率为79.2%,而常规PCR方法阳性检出率仅为45.8%。结果表明,本研究建立的荧光定量PCR方法为了解弱毒株在猪体的分布提供了快速、敏感的检测手段。PRV TK/PK/gE三基因缺失弱毒株在猪组织中的分布情况为进一步揭示其组织嗜性、安全性和免疫机制提供了数据。
- 许梦微朱来旭陈赛赛张传健张传健郑亚婷王志胜童玲曹瑞兵刘娅梅
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 几株伪狂犬病病毒的增殖特性与保存条件被引量：1
- 2020年
- 高滴度的抗原是制备优质疫苗的首要条件。对6株伪狂犬病病毒在仓鼠肾(baby hamster kidney,简称BHK)细胞和猪睾丸细胞(swine testicular,简称ST)细胞上的增殖效率进行了比较,同时测定不同保存温度和冻融条件对病毒滴度的影响。结果表明,几株伪狂犬病病毒在BHK细胞和ST细胞上增殖效率均很高,可达到生产要求。相较于ST细胞,各毒株在BHK细胞上出现病变时间更早。然而,所有毒株在ST细胞上的病毒滴度都高于同期在BHK细胞上的滴度。强毒株AH02LA株在2种细胞上滴度可达108.0 TCID 50/0.1 mL以上,表现为发生病变早,病毒增殖快,峰值到来早的特性。通过强毒株AH02LA株获得的基因缺失株LA-A株和自然传代缺失致弱株LA2017株峰值均达108.0 TCID 50/0.1 mL,展现出优良疫苗株的潜质。保存条件试验表明,PRV在-70℃保存30 d和4℃保存12 d内滴度相对稳定,而-20℃保存的病毒滴度下降明显。多次冻融后,滴度有所下降,相较于-70℃,-20℃条件下冻融病毒滴度下降更为显著,建议避免多次冻融。本试验结果可为PRV疫苗抗原在实际生产中制备与保存提供科学依据。
- 陈赛赛郑亚婷郭容利王志胜王志胜刘娅梅许梦微王彩楠刘娅梅
- 关键词：伪狂犬病病毒冻融
- 用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物及试剂盒
- 本发明提供了用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物及试剂盒，属于动物医学领域。所述引物组合物，由上游引物和下游引物组成，所述上游引物和下游引物的序列分别如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示。所述试剂盒，包括引物组合物、PC...
- 王继春张传健许梦微王志胜侯继波
- 文献传递
- 猪源伪狂犬病病毒传代致弱LA2017株的安全性和免疫效力研究被引量：4
- 2020年
- 为检测猪源伪狂犬病病毒变异株AH02LA株作为疫苗后选株的安全性及免疫效力。本研究对4日龄初生仔猪和产前1个月妊娠母猪免疫LA2017株后的安全性、28~35日龄仔猪免疫效力以及免疫猪后排毒和同群传播性进行了研究。结果显示:滴鼻接种4日龄仔猪和肌肉注射产前1个月的妊娠母猪,均无任何临床症状,表明该疫苗株具有良好的安全性;肌肉注射接种28~35日龄的仔猪,免疫后7 d产生对PRV变异株AH02LA的完全保护并且可以阻止排毒,免疫14 d后攻毒均未发病和排毒,而PRV Bartha K61株免疫猪后7 d攻毒,有4头猪出现了体温升高,鼻拭子样品均检出病毒,免疫后14 d和21 d时对试验猪攻毒,PRV Bartha K61株免疫组均有猪发病,且鼻拭子样品均检出病毒;在抗体产生水平方面,PRV LA2017株免疫后14 d产生高水平中和抗体,PRV中和指数抗体≥10 000,且维持至免疫后5个月,而Batha-K61组免疫后1个月至3个月针对PRV变异株AH02LA的中和指数仅为178~1000,且4个月就开始下降;在同群感染方面,PRV LA2017株肌肉注射接种28~35日龄仔猪后14 d内均未从鼻拭子和肛门拭子检出排毒,gB抗体全部转为阳性,同群非免疫接种猪PRV gB和gE的ELISA抗体均为阴性,表明PRV LA2017株安全性好,无横向传播,不引起同群感染。结果表明,PRV LA2017株作为疫苗株对猪伪狂犬变异株的保护效果显著优于Bartha K61株,该毒株安全性好、抗体水平高和持续时间长,是一株极具开发价值的猪伪狂犬病流行株的弱毒疫苗候选株。
- 王志胜刘名江刘名江乔永峰乔永峰郑亚婷许梦微郭容利张传健许梦微王继春
- 关键词：猪伪狂犬病病毒安全性
- 伪狂犬病病毒传代致弱毒株及其应用
- 本发明提供伪狂犬病病毒传代致弱毒株及其应用，属于动物医学的疫苗领域。该伪狂犬病病毒传代致弱毒株，是伪狂犬病病毒LA2017株，保藏编号为CGMCC No.18170。本发明还提供所述伪狂犬病病毒传代致弱毒株在制备伪狂犬病...
- 王继春陈赛赛郭容利乔永峰王志胜许梦微郑亚婷刘娅梅张传健吕家轩
- 猪流行性腹泻病毒伪狂犬病病毒载体重组病毒、制备方法及其应用
- 本发明提供猪流行性腹泻病毒伪狂犬病病毒载体重组病毒、制备方法及其应用，属于动物医学的疫苗领域。猪流行性腹泻病毒伪狂犬病病毒载体重组病毒，是在伪狂犬病病毒基因组中UL40与UL41之间非编码区插入PEDV S蛋白基因表达盒...
- 王继春张传健郭仕琦郭容利陈赛赛王志胜许梦微郑亚婷刘娅梅
- 文献传递
