王海燕
- 作品数：21 被引量：42H指数：4
- 供职机构：烟台毓璜顶医院更多>>
- 发文基金：山东省科技发展计划项目国家高技术研究发展计划烟台市科学技术发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 体外高效诱导人胚胎干细胞定向分化为胰岛细胞的可行性研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨体外诱导人胚胎干细胞(hESs)定向分化为胰岛细胞的可行性。方法体外分三阶段诱导hESCs定向分化为胰岛细胞。第一阶段:予以活化素-A、渥曼青霉素诱导分化形成定型内胚层;第二阶段:采用维甲酸(RA)、NOGGIN、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导胰腺细胞定向分化;以EGF扩增胰腺祖细胞;第三阶段:采用尼克酰胺、唾液素4、bFGF及骨形成蛋白(BMP4)促进胰岛细胞成熟;观察诱导各阶段细胞形态变化,免疫荧光法鉴定胰十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)、胰高糖素、胰岛素、C肽、葡萄糖转运子2(glut-2)表达。结果诱导14 d时hESs出现胰高糖素荧光表达;20 d时细胞出现PDX-1和C肽共表达;22 d形成的成熟胰岛细胞出现glut-2和胰岛素的阳性表达;胰岛素阳性细胞占17.1%,C肽阳性细胞占3.8%。结论体外可简单高效的诱导hESs定向分化为成熟胰岛细胞。
- 华秀峰王延伟刘芙君靳少华孟晓梅李华峰王海燕李建远
- 关键词：胚胎干细胞分化胰岛细胞胰岛素C肽
- 附睾分泌蛋白与精子成熟的研究进展被引量：8
- 2006年
- 哺乳动物精子成熟是通过与附睾管腔微环境相互作用而实现的,精子通过在附睾内转运过程中与附睾蛋白相互作用获得运动和精卵识别结合能力。附睾蛋白通过直接或间接参与精子膜修饰或有助于保护精子的完整性参与精子成熟过程,与精子成熟相关的附睾蛋白的研究将有助于推动男性生殖医学的研究进展,同时有可能对附睾环节的男性避孕带来新的思路和突破。
- 刘芙君李建远王海燕
- 关键词：附睾蛋白精子蛋白质组
- 基因重组人附睾特异蛋白ESC42的抗菌谱研究
- 2010年
- 目的 利用基因工程技术合成人附睾特异蛋白ESC42进行抗菌谱的筛选,并探讨其作用机制.方法 用微量稀释法细菌敏感试验,观察该蛋白对大肠埃希氏菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC29213,铜绿假单胞菌ATCC17853以及临床分离耐药菌株大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果;应用溶血实验检测ESC42蛋白对兔红细胞的毒性作用.结果 应用不同的蛋白浓度作用细菌,随着时间延长和蛋白浓度的增加其抑制率逐渐增加.对兔红细胞没有毒性作用.结论 rhESC42蛋白对细菌有一定的抑制作用,对真核细胞无害.
- 沈肖方王海燕李建远
- 关键词：附睾抗菌真核细胞
- 急性热应激对成年期大鼠睾丸蛋白表达谱的早期影响
- 2015年
- 摘要目的探索急性热应激处理成年大鼠睾丸诱发蛋白质表达谱的改变，揭示大鼠早期热应激响应蛋白。方法建立大鼠睾丸热应激动物模型，42℃水浴30min；随后提取实验组和对照组睾丸总蛋白，利用双向凝胶电泳分离、质谱鉴定大鼠睾丸受热后差异变化的蛋白：进一步通过生物信息学、Western blot和免疫组化等方法进行深入验证。结果发现差异表达蛋白19个，其中上调蛋白9个，下调10个。这些蛋白功能涉及刺激应答、蛋白水解、总代谢、氧化还原、信号传导、凋亡等。根据功能分类选取上调蛋白78kDa glucose-regulated protein （Hspa5） ，下调蛋白Peroxiredoxin6 （Prdx6） . Superoxide dismutase （sodl） . Ubiquitin （Rps27a） . ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme LI （Uchll） 的Westem blot结果与蛋白质组学分析结果一致。结论急性热应激引起大鼠睾丸早期损伤可引发组织内部涉及多种功能生精细胞蛋白表达发生改变。
- 高鑫王晓梅孔晓君刘新刘芙君王海燕李建远
- 关键词：急性热应激
- 精子胞浆小滴的发现及研究进展被引量：2
- 2011年
- 精子成熟是一个复杂的过程,精子从睾丸向附睾运行过程当中,精子表面的胞浆逐渐脱落,最终精子成熟。各种原因引起的精子表面胞浆滞留最终形成胞浆小滴。胞浆小滴在多种物种中均有发现,与男性不育相关。
- 刘杰李建远王海燕
- 关键词：精子不育
- 急性热应激引起大鼠附睾早期微环境的变化被引量：1
- 2015年
- 目的：研究热应激引起大鼠附睾早期微环境的变化。方法建立大鼠附睾热应激动物模型，42℃水浴30min，随后提取应激组和正常组附睾头部蛋白质，利用双向凝胶电泳分离、质谱鉴定大鼠附睾受热后差异变化的蛋白质；进一步通过生物信息学、Western blot和免疫组化等方法进行验证。结果蛋白质组学研究二维电泳图谱能检测到92个蛋白，经过质谱分析得出其中有24个蛋白具有意义，其中有12个蛋白上调，12个蛋白下调。热应激组与正常组有显著的差异蛋白质，这些具有意义的差异蛋白质经过免疫组化和Western blot分析法也得出一致性的结论。结论热应激能导致附睾早期微环境变化，尤其是对附睾蛋白质差异表达以及对精子在附睾中的成熟过程有着显著的影响。
- 王晓梅高鑫孔晓君刘芙君刘新王海燕李建远
- 关键词：热应激附睾微环境
- 人胚胎干细胞体外定向诱导分化胰岛细胞移植治疗非肥胖-联合免疫缺陷糖尿病小鼠
- 2013年
- 目的探讨人胚胎干细胞(hESs)体外定向诱导分化胰岛细胞移植治疗非肥胖-联合免疫缺陷(NOD/SCID)糖尿病小鼠的可行性。方法体外分四阶段诱导hESs定向分化为胰岛细胞:第一阶段,予以活化素A(activin A)、渥曼青霉素(wortmannin)诱导分化形成定型内胚层;第二阶段,予以全反式维甲酸(RA)、NOGGIN、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导胰腺细胞定向分化;第三阶段,予以表皮生长因子(EGF)扩增胰腺祖细胞;第四阶段,予以尼克酰胺(nicotinamide)、唾液素4(exendin-4)、bFGF及骨形成蛋白(BMP4)促进胰岛细胞成熟;观察诱导各阶段细胞形态变化、免疫荧光鉴定胰十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)、胰高糖素、胰岛素、C肽、葡萄糖转运子2(Glut-2)的表达;四阶段分化成熟的胰岛细胞体外检测胰岛素释放反应并植入链脲菌素(STZ)诱导形成的NOD/SCID糖尿病小鼠一侧附睾脂肪垫内,观察血糖变化。结果诱导第四阶段14天时hESs出现胰高糖素荧光表达;20天时细胞出现PDX-1和C肽共表达;22天形成的成熟胰岛细胞出现Glut-2和胰岛素的阳性表达;流式鉴定胰岛素阳性细胞占17.1%,C肽阳性细胞占3.8%;体外检测有葡萄糖刺激的胰岛素释放反应。分化成熟胰岛细胞约(3～5)×106植入NOD/SCID糖尿病小鼠体内可以逆转其高血糖至少8周。结论体外定向诱导hESs分化形成的胰岛细胞植入NOD/SCID糖尿病小鼠附睾脂肪垫内可以逆转其高血糖。
- 华秀峰王延伟丛晋刘芙君孟晓梅李华峰靳少华王海燕李建远孙强
- 关键词：胚胎干细胞胰岛细胞C肽
- 附睾抗菌肽的研究进展
- 2008年
- 抗菌肽是小分子阳离子肽，表现出广谱的抗菌活性，并广泛存在多种组织中。目前己经发现的抗菌肽有800余种，具有抗菌，抗病毒，抗肿瘤等活性。附睾组织也存在大量抗菌肽，可保护泌尿生殖器官免受越来越多性传播疾病的感染；还可参与精子成熟及运动，对男性避孕及不育治疗提供新的靶点，开辟新的领域。
- 刘杰王海燕李建远
- 关键词：抗菌活性男性生殖
- 重组人附睾特异表达蛋白ESC42及其生物学鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。 方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离 飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴 定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS Fit软件查询NCBI数据库。 结果:获得rhESC42融合蛋 白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%, 且符合率为100%。在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β defensin家族,具有抗菌活性。 结 论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后 的功能研究奠定基础。
- 沈肖方李建远王海燕薛江南曹奇志连培文陈辉解美娜
- 关键词：附睾大肠埃希菌生物学鉴定
- IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨IL 2preSDNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法应用基因重组技术 ,构建人白细胞介素 2 (hIL 2 )和前表面抗原 (preS)的真核表达载体 ,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB c小鼠和HBV转基因小鼠 ,通过ELISA方法检测BALB c小鼠和HBV转基因鼠的抗 preS2、HBsAg及抗 HBs抗体水平 ;荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBVDNA拷贝数 ,并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度 ,同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后 ,10 0 %小鼠能在第 4、6周检测到抗preS1抗体 ,持续时间长达10周。②用IL 2preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式 ,且所需质粒量 (10 μg 只 )仅为后者 (10 0 μg 只 )的 1 10。③在第 4周高峰期检测IgG亚类 ,是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒 (1μg 只 )免疫转基因小鼠后 ,80 %的小鼠产生了抗体 ,HBVDNA量下降 ,其中 2 0 %的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示 :肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL 2preSDNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫 ,可部分打破小鼠机体的免疫耐受 。
- 沈肖方李建远王海燕王学波靳绍华刘芙君刘运祥
- 关键词：正常小鼠IL-2转基因鼠基因枪真核表达质粒
