刘芙君
- 作品数：22 被引量：27H指数：3
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- 发文基金：烟台市科学技术发展计划项目国家重点基础研究发展计划山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 急性热应激对成年期大鼠睾丸蛋白表达谱的早期影响
- 2015年
- 摘要目的探索急性热应激处理成年大鼠睾丸诱发蛋白质表达谱的改变，揭示大鼠早期热应激响应蛋白。方法建立大鼠睾丸热应激动物模型，42℃水浴30min；随后提取实验组和对照组睾丸总蛋白，利用双向凝胶电泳分离、质谱鉴定大鼠睾丸受热后差异变化的蛋白：进一步通过生物信息学、Western blot和免疫组化等方法进行深入验证。结果发现差异表达蛋白19个，其中上调蛋白9个，下调10个。这些蛋白功能涉及刺激应答、蛋白水解、总代谢、氧化还原、信号传导、凋亡等。根据功能分类选取上调蛋白78kDa glucose-regulated protein （Hspa5） ，下调蛋白Peroxiredoxin6 （Prdx6） . Superoxide dismutase （sodl） . Ubiquitin （Rps27a） . ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme LI （Uchll） 的Westem blot结果与蛋白质组学分析结果一致。结论急性热应激引起大鼠睾丸早期损伤可引发组织内部涉及多种功能生精细胞蛋白表达发生改变。
- 高鑫王晓梅孔晓君刘新刘芙君王海燕李建远
- 关键词：急性热应激
- 急性热应激引起大鼠附睾早期微环境的变化被引量：1
- 2015年
- 目的：研究热应激引起大鼠附睾早期微环境的变化。方法建立大鼠附睾热应激动物模型，42℃水浴30min，随后提取应激组和正常组附睾头部蛋白质，利用双向凝胶电泳分离、质谱鉴定大鼠附睾受热后差异变化的蛋白质；进一步通过生物信息学、Western blot和免疫组化等方法进行验证。结果蛋白质组学研究二维电泳图谱能检测到92个蛋白，经过质谱分析得出其中有24个蛋白具有意义，其中有12个蛋白上调，12个蛋白下调。热应激组与正常组有显著的差异蛋白质，这些具有意义的差异蛋白质经过免疫组化和Western blot分析法也得出一致性的结论。结论热应激能导致附睾早期微环境变化，尤其是对附睾蛋白质差异表达以及对精子在附睾中的成熟过程有着显著的影响。
- 王晓梅高鑫孔晓君刘芙君刘新王海燕李建远
- 关键词：热应激附睾微环境
- 体外高效诱导人胚胎干细胞定向分化为胰岛细胞的可行性研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨体外诱导人胚胎干细胞(hESs)定向分化为胰岛细胞的可行性。方法体外分三阶段诱导hESCs定向分化为胰岛细胞。第一阶段:予以活化素-A、渥曼青霉素诱导分化形成定型内胚层;第二阶段:采用维甲酸(RA)、NOGGIN、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导胰腺细胞定向分化;以EGF扩增胰腺祖细胞;第三阶段:采用尼克酰胺、唾液素4、bFGF及骨形成蛋白(BMP4)促进胰岛细胞成熟;观察诱导各阶段细胞形态变化,免疫荧光法鉴定胰十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)、胰高糖素、胰岛素、C肽、葡萄糖转运子2(glut-2)表达。结果诱导14 d时hESs出现胰高糖素荧光表达;20 d时细胞出现PDX-1和C肽共表达;22 d形成的成熟胰岛细胞出现glut-2和胰岛素的阳性表达;胰岛素阳性细胞占17.1%,C肽阳性细胞占3.8%。结论体外可简单高效的诱导hESs定向分化为成熟胰岛细胞。
- 华秀峰王延伟刘芙君靳少华孟晓梅李华峰王海燕李建远
- 关键词：胚胎干细胞分化胰岛细胞胰岛素C肽
- 附睾分泌蛋白与精子成熟的研究进展被引量：8
- 2006年
- 哺乳动物精子成熟是通过与附睾管腔微环境相互作用而实现的,精子通过在附睾内转运过程中与附睾蛋白相互作用获得运动和精卵识别结合能力。附睾蛋白通过直接或间接参与精子膜修饰或有助于保护精子的完整性参与精子成熟过程,与精子成熟相关的附睾蛋白的研究将有助于推动男性生殖医学的研究进展,同时有可能对附睾环节的男性避孕带来新的思路和突破。
- 刘芙君李建远王海燕
- 关键词：附睾蛋白精子蛋白质组
- 脑脊液CystatinC改变与格林-巴利综合征关系的探讨被引量：4
- 2008年
- 目的对格林-巴利综合征(GBS)患者和对照组脑脊液进行蛋白质组学分析,寻找改变最明显的蛋白质,初步探讨其与GBS的关系。方法分别取GBS疾病组和对照组的新鲜脑脊液,冰丙酮沉淀法提取总蛋白,进行第一向等电聚焦电泳(IEF)和第二向十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组,Image Master 2D图像分析软件对分析胶进行比较分析,识别差异表达明显的蛋白质点。抠取制备胶上相应的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI/TOF/MS)得到肽质量指纹图谱(PMF),搜索SWISSPROT数据库鉴定蛋白质点。结果双向电泳图谱上有6个点在两组间存在明显差异,4个蛋白质点在GBS疾病组中表达明显上调,2个降低。其中Cystatin C表达下调,是改变最明显的蛋白质点,为本实验首次发现。随后的酶联免疫吸附实验(ELISA)也证实GBS患者的脑脊液中Cystatin C的浓度明显低于对照组[(2.79±0.65)mg/L,(3.65±0.82)mg/L,P<0.01]。结论Cystatin C浓度在GBS患者脑脊液中的浓度明显降低,可为研究格林-巴利综合征疾病机制提供线索。
- 杨银荣刘师莲刘芙君秦延江柏淑美
- 关键词：格林-巴利综合征脑脊髓液蛋白质组酶联免疫吸附测定半胱氨酸蛋白酶抑制剂C
- 构建新型乙肝基因疫苗免疫转HBV基因小鼠的实验研究
- 李建远沈肖方王海燕陈章国王学波靳韶华刘芙君
- 该课题属基础应用性研究。主要采用基因重组技术，构建人白细胞介素-2（IL-2）和乙肝病毒前S抗原（PreS）的DNA疫苗。在技术上创建了IL-2preS原核与真核表达系统技术路线，先后完成了IL-2-PreS融合蛋白的真...
- 关键词：
- 关键词：免疫
- 人胚胎干细胞体外定向诱导分化胰岛细胞移植治疗非肥胖-联合免疫缺陷糖尿病小鼠
- 2013年
- 目的探讨人胚胎干细胞(hESs)体外定向诱导分化胰岛细胞移植治疗非肥胖-联合免疫缺陷(NOD/SCID)糖尿病小鼠的可行性。方法体外分四阶段诱导hESs定向分化为胰岛细胞:第一阶段,予以活化素A(activin A)、渥曼青霉素(wortmannin)诱导分化形成定型内胚层;第二阶段,予以全反式维甲酸(RA)、NOGGIN、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导胰腺细胞定向分化;第三阶段,予以表皮生长因子(EGF)扩增胰腺祖细胞;第四阶段,予以尼克酰胺(nicotinamide)、唾液素4(exendin-4)、bFGF及骨形成蛋白(BMP4)促进胰岛细胞成熟;观察诱导各阶段细胞形态变化、免疫荧光鉴定胰十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)、胰高糖素、胰岛素、C肽、葡萄糖转运子2(Glut-2)的表达;四阶段分化成熟的胰岛细胞体外检测胰岛素释放反应并植入链脲菌素(STZ)诱导形成的NOD/SCID糖尿病小鼠一侧附睾脂肪垫内,观察血糖变化。结果诱导第四阶段14天时hESs出现胰高糖素荧光表达;20天时细胞出现PDX-1和C肽共表达;22天形成的成熟胰岛细胞出现Glut-2和胰岛素的阳性表达;流式鉴定胰岛素阳性细胞占17.1%,C肽阳性细胞占3.8%;体外检测有葡萄糖刺激的胰岛素释放反应。分化成熟胰岛细胞约(3～5)×106植入NOD/SCID糖尿病小鼠体内可以逆转其高血糖至少8周。结论体外定向诱导hESs分化形成的胰岛细胞植入NOD/SCID糖尿病小鼠附睾脂肪垫内可以逆转其高血糖。
- 华秀峰王延伟丛晋刘芙君孟晓梅李华峰靳少华王海燕李建远孙强
- 关键词：胚胎干细胞胰岛细胞C肽
- 人类睾丸分泌精子结合蛋白HEL-S61的生物学研究
- 目的进行人类睾丸分泌精子结合蛋白HEL-S61的生物学研究,了解其在男性生殖生理中的分子机制,为其异常所引起的男性不育症的诊断和治疗以及男性避孕药物的研发提供理论基础。方法通过对本室构建的人类附睾cDNA文库进行筛选,获...
- 刘娟王海燕刘新李宁刘芙君刘杰王文亭靳韶华李建远
- 关键词：睾丸附睾腺苷酸激酶精子
- 文献传递
- IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨IL 2preSDNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法应用基因重组技术 ,构建人白细胞介素 2 (hIL 2 )和前表面抗原 (preS)的真核表达载体 ,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB c小鼠和HBV转基因小鼠 ,通过ELISA方法检测BALB c小鼠和HBV转基因鼠的抗 preS2、HBsAg及抗 HBs抗体水平 ;荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBVDNA拷贝数 ,并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度 ,同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后 ,10 0 %小鼠能在第 4、6周检测到抗preS1抗体 ,持续时间长达10周。②用IL 2preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式 ,且所需质粒量 (10 μg 只 )仅为后者 (10 0 μg 只 )的 1 10。③在第 4周高峰期检测IgG亚类 ,是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒 (1μg 只 )免疫转基因小鼠后 ,80 %的小鼠产生了抗体 ,HBVDNA量下降 ,其中 2 0 %的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示 :肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL 2preSDNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫 ,可部分打破小鼠机体的免疫耐受 。
- 沈肖方李建远王海燕王学波靳绍华刘芙君刘运祥
- 关键词：正常小鼠IL-2转基因鼠基因枪真核表达质粒
- 大鼠附睾蛋白质组的提取和二维液相色谱分离被引量：1
- 2006年
- 背景与目的:提取大鼠附睾液蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离附睾蛋白组的方法。方法:分离提取大鼠附睾液蛋白,样品利用起始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后收集pH8.5-4.0之间的组份进行二维反相高压液相色谱分离,最后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成PI/UV图谱。结果:成功提取了附睾液蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了大鼠头体尾部附睾液蛋白的二维PI/UV图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pH8.5-4.0区间的20个组份,并将每个组份进行二维色谱分离后转换为PI/UV图谱。结论:为进一步全面研究附睾蛋白功能和体液差异蛋白质组研究打下了基础。
- 刘芙君李建远王培林张成林王海燕王修海
- 关键词：蛋白质组
