沈肖方
- 作品数：30 被引量：40H指数：4
- 供职机构：烟台毓璜顶医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金烟台市科学技术发展计划项目山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基因重组人附睾特异蛋白ESC42的抗菌谱研究
- 2010年
- 目的 利用基因工程技术合成人附睾特异蛋白ESC42进行抗菌谱的筛选,并探讨其作用机制.方法 用微量稀释法细菌敏感试验,观察该蛋白对大肠埃希氏菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC29213,铜绿假单胞菌ATCC17853以及临床分离耐药菌株大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果;应用溶血实验检测ESC42蛋白对兔红细胞的毒性作用.结果 应用不同的蛋白浓度作用细菌,随着时间延长和蛋白浓度的增加其抑制率逐渐增加.对兔红细胞没有毒性作用.结论 rhESC42蛋白对细菌有一定的抑制作用,对真核细胞无害.
- 沈肖方王海燕李建远
- 关键词：附睾抗菌真核细胞
- 利用废弃胚胎进行体外受精实验室质控的可行性探讨被引量：3
- 2013年
- 目的探讨废弃胚胎作为体外受精(IVF)实验室质控的可行性。方法通过囊胚序贯培养将无原核(0PN)、单原核(1PN)、3原核(3PN)和发育迟缓或停滞的2原核(2PN)的废弃胚胎进行囊胚培养,比较不同来源胚胎的囊胚形成情况。结果共收集396个废弃胚胎,经序贯培养形成98个囊胚(24.75%),0PN、2PN、1PN、3PN的囊胚形成率分别为50.50%(51/101)、24.59%(30/122)、1 7.07%(7/41)、7.58%(10/132),其中0PN、停滞的2PN的胚胎有孵出,孵出率分别为47.06%(24/51)和33.33%(10/30);有囊胚形成与无囊胚形成患者的临床妊娠率分别为30.28%(43/142)、1 9.72%(28/142),两者相比有统计学差异(P<0.05);特别是0PN+2PN患者的临床妊娠率为23.24%(33/142),显著高于无囊胚形成者的9.15%(13/142)(P<0.01)。结论废弃胚胎有不同程度的发育潜能,可部分发育成囊胚,特别是0PN+2PN囊胚形成率超过35%,可以作为IVF实验室质控的一种辅助方法,并可作为临床妊娠结局预测的参考指标。
- 沈肖方张玉花陈丽丽郝翠芳
- 关键词：囊胚异常受精
- 卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞对体外受精-胚胎移植结局的影响被引量：3
- 2013年
- 目的研究授精前剥除部分卵丘细胞的卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法授精前用机械法剥除卵母细胞外包裹的部分卵丘细胞,每个卵母细胞采用微滴法单独受精(A组)。对照组(B组)采用常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)受精方式进行。比较两组受精率(2PN、1PN和3PN)、卵裂率(2PN、1PN和3PN)、优胚率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果 A组和B组的受精率分别是76.51%和73.74%(2PN受精率分别是60.64%,61.62%;1PN受精率分别是1.61%,0.86%;3PN受精率分别是10.44%,9.69%)、卵裂率分别是98.95%和99.17%(2PN卵裂率分别是97.02,98.01%;1PN卵裂率分别是100%,85.71%;3PN卵裂率分别是100%,100%)、优质胚胎率分别是60.75%,62.68%、临床妊娠率分别是63.89%,61.76%、种植率分别是48.00%,38.78%、流产率分别是9.09%,11.90%。所有指标均无统计学意义。结论卵母细胞授精前剥除部分卵丘细胞不会影响IVF-ET的临床结局,为利用卵丘细胞进行非侵入性种植前遗传学诊断提供临床依据。
- 刘晓妍张守信郝翠芳沈肖方黄鑫单英华陈丽丽张玉花
- 关键词：卵丘细胞体外授精-胚胎移植受精率
- 体外受精失败后不同时间行补救性卵细胞浆单精子显微注射的对比分析被引量：1
- 2010年
- 目的 通过对常规体外授精(IVF)失败(未观察到第二极体)后不同时间行补救性卵细胞浆单精子显微注射(ICSI)的临床资料比较,探讨补救性ICSI的最佳时间. 方法 回顾性分析常规体外授精(IVF)失败后6 h(早期组)与22 h(传统组)行补救性ICSI的临床资料,比较两组的受精率、卵裂率、优胚率、种植率和妊娠率. 结果 早期组受精率、种植率、临床妊娠率分别为74.6%(56/75)、37.5%(9/24)、53.8%(7/13);传统组受精率为63.0%(29/46)、种植率和临床妊娠率均为0.早期组7例妊娠中4例单胎,3例流产;早期组和传统组受精率比较,差异无统计学意义,妊娠率和种植率比较,差异有统计学意义(P<0.05); 结论 早期补救性ICSI在受精率、种植率和临床妊娠率上可能优于传统补救性ICSI.
- 沈肖方周朋珍黄鑫刘晓妍单英华张玉花郝翠芳
- 关键词：受精
- 利用废弃胚胎进行IVF实验室质控的可行性探讨
- :探讨废弃胚胎作为实验室质控的可行性.方法:通过囊胚序贯培养将无原核(OPN),单原核(1PN),3原核(3PN)和发育迟缓或停滞的2原核(2PN)的废弃胚胎进行囊胚培养,比较不同来源胚胎的囊胚形成情况.结果:共收集39...
- 沈肖方张玉花陈丽丽郝翠芳
- 关键词：试管婴儿囊胚培养实验室
- 重组人附睾特异表达蛋白ESC42及其生物学鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。 方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离 飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴 定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS Fit软件查询NCBI数据库。 结果:获得rhESC42融合蛋 白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%, 且符合率为100%。在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β defensin家族,具有抗菌活性。 结 论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后 的功能研究奠定基础。
- 沈肖方李建远王海燕薛江南曹奇志连培文陈辉解美娜
- 关键词：附睾大肠埃希菌生物学鉴定
- IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨IL 2preSDNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法应用基因重组技术 ,构建人白细胞介素 2 (hIL 2 )和前表面抗原 (preS)的真核表达载体 ,将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB c小鼠和HBV转基因小鼠 ,通过ELISA方法检测BALB c小鼠和HBV转基因鼠的抗 preS2、HBsAg及抗 HBs抗体水平 ;荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBVDNA拷贝数 ,并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度 ,同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后 ,10 0 %小鼠能在第 4、6周检测到抗preS1抗体 ,持续时间长达10周。②用IL 2preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式 ,且所需质粒量 (10 μg 只 )仅为后者 (10 0 μg 只 )的 1 10。③在第 4周高峰期检测IgG亚类 ,是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒 (1μg 只 )免疫转基因小鼠后 ,80 %的小鼠产生了抗体 ,HBVDNA量下降 ,其中 2 0 %的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示 :肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL 2preSDNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫 ,可部分打破小鼠机体的免疫耐受 。
- 沈肖方李建远王海燕王学波靳绍华刘芙君刘运祥
- 关键词：正常小鼠IL-2转基因鼠基因枪真核表达质粒
- IL-2-preS融合蛋白表达质粒的基因枪DNA免疫研究被引量：1
- 2000年
- 观察基因枪肌肉注射IL 2 preS融合蛋白表达质粒 (pCWIIP)的基因免疫效率 ,为乙型肝炎基因免疫研究提供基础。方法 :设基因枪肌肉注射组和正常肌肉注射组 ,分别用pCWIIP质粒及对照质粒pCIIP 2和pCI免疫Balb c小鼠 ,免疫后第 4天 ,取肌肉组织通过免疫组化观察IL 2 preS在肌肉中的表达 ;另设基因枪、正常肌肉、皮下注射组分别免疫pCWIIP及对照质粒 ,在 2、4、6、8w眼后腔取血 ,通过间接ELISA方法检测血清中抗preS的IgG抗体水平。结果 :免疫组化结果显示 :基因枪肌肉注射组其IL 2 preS在肌肉中的表达明显高于正常肌肉组。间接ELISA检测结果表明 :抗preS的IgG抗体水平为基因枪 >正常肌肉组 >皮下注射组。结论 :在IL 2 preS融合蛋白表达质粒的基因免疫中 ,基因枪肌肉注射的方式优于肌肉和皮下注射的方式 ,具有快速、经济和安全的特性 ,将为今后的临床广泛应用提供依据。
- 沈肖方马大龙白惠卿李建远陈章国
- 关键词：基因枪DNA免疫抗体基因治疗
- 常规体外受精失败后不同时间进行挽救性卵细胞质内单精子注射的结局比较被引量：4
- 2012年
- 目的探讨常规体外受精(IVF)失败后6h和22h进行挽救性卵胞质内单精子显微注射(ICSI)的效果。方法选取2004年6月至2008年11月在本院进行的共31个完全受精失败的IVF周期为研究对象。其中2004年6月至2007年8月共计15个完全受精失败的IVF周期,对所有成熟二级卵母细胞(MⅡ卵子)在受精22h后进行挽救性ICSI(纳入22h组);2007年8月至2008年11月共计16个完全受精失败的IVF周期,对所有MⅡ卵子在受精6h后进行挽救性ICSI(纳入6h组)。对两组受精率、卵裂率、胚胎移植(ET)数和临床妊娠率进行比较(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会制定的伦理学标准,征得该委员会批准)。两组患者的年龄、不孕年限等比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结果 6h组的受精率(77.8%,70/90)显著高于22h组(47.5%,58/122),两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);6h组的卵裂率(98.6%,69/70)显著高于22h组(79.3%,46/58),两组比较,差异亦有统计学意义(P<0.01);6h组的临床妊娠率(43.8%,7/16)显著高于22h组(0,0/15),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论常规IVF失败6h后进行挽救性ICSI可获得更好的受精率、卵裂率和临床妊娠率。
- 刘晓妍郝翠芳沈肖方张守信单英华黄鑫
- 关键词：体外受精受精失败
- 人骨髓间充质干细胞玻璃化冷冻复苏后的生物学活性被引量：2
- 2013年
- 目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)玻璃化冷冻复苏后细胞的存活率和诱导分化能力。方法体外分离纯化人BMSCs,流式细胞仪检测其纯度。应用玻璃化冷冻方法进行冷冻保存,复苏后台盼蓝染色鉴定存活率。在DMEM/F12培养的BMSCs中加体积分数0.10的胎牛血清和10μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子预诱导2d,再加0.1μmol/L全反式维甲酸和10μg/L胶质细胞系源性神经营养因子进行正式诱导3d,免疫荧光染色检测Nestin、微管相关蛋白(MAP2)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维蛋白(GFAP)的表达。结果 BMSCs强表达CD44和CD90,不表达CD34和CD45。玻璃化冷冻解冻后细胞存活率>95%。经诱导后,BMSCs强阳性表达MBP和GFAP,弱阳性表达Nestin和MAP2。结论玻璃化冷冻复苏后的人BMSCs存活率高并能成功诱导为神经胶质细胞。
- 王延伟沈肖方王跃嗣张玉花
- 关键词：间质干细胞玻璃化冷冻神经胶质
