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基于Semliki森林病毒复制子的新型RNAi质粒载体的构建被引量：1: 2008年; 目的:以semliki森林病毒复制子为基础,构建一类可迅速高效表达shRNA的新型RNAi载体。方法:以Semliki森林病毒衍生的复制子载体pSFV1为骨架,用CMV IE启动子替换SP6启动子并在3′-UTR下游插入SV40 polyA转录终止子,在原26S亚基因组启动子后插入带有相应改良多克隆位点的shRNA表达元件,同时加入抗新霉素选择复合体,并去掉3′-UTR的重复序列。所获载体用于沉默EGFP基因,通过体外细胞转染、病毒颗粒制备、荧光显微镜观察、RT-PCR分析等初步验证、评估其效果。结果:构建了基于Semliki森林病毒复制子的新型RNAi质粒载体pSFV-RNAi Ready。经体外实验初步证实,该载体直接转染细胞,或与辅助载体共转染,制备成具有感染能力的重组病毒颗粒后使用,均可高水平表达shRNA,沉默目的基因。其中使用病毒颗粒抑抑效率可高达90%以上。结论:该载体的成功构建,可望显著拓宽SFV载体的应用范围,丰富RNAi实施手段,并用于相关科学研究及基因药物技术开发。; 杨峥嵘何飞王海峰黄来强; 关键词：RNA干扰复制子病毒载体

新型RNAi载体抑制HPV16E6基因在人宫颈癌细胞Caski中的表达: 2011年; 目的:利用自行构建的一种基于Semliki森林病毒的新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready,验证将其用于短期高效沉默HPV16E6基因的效果。方法:以HPV16E6为靶标基因,设计并构建基于pSFV-RNAi Ready的重组质粒,分直接电击转染和病毒颗粒共培养两种方式转入人宫颈癌细胞株Caski,RT-PCR、Western blot检测HPV16E6表达水平。结果:重组质粒对HPV16E6沉默效果优于常规RNAi质料载体,接近化学合成小RNA,抑制率可高达90%以上,10天后效果仍然存在;结论:新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready可较好地应用于特异高丰度靶基因的表达抑制,有望用于未来的科学研究或治疗应用。; 杨峥嵘何飞李蓉王海峰; 关键词：RNA干扰病毒载体宫颈癌

HPV16,18,58-mE67重组腺病毒的构建及克隆表达被引量：3: 2008年; 目的构建能同时表达HPV16,18,58三亚型E6-E7优化融合基因的重组腺病毒,为下一步获得适合国情的宫颈癌HPV三价治疗性候选疫苗打基础。方法常规扩增、构建HPV16,18,58的E6-E7融合基因,PCR定点突变消除其转化活性后以IRES相连并重组入pAdeno-X腺病毒载体系统;体外细胞、软琼脂培养及裸鼠成瘤实验检测突变基因转化活性去除情况;重组腺病毒电击转染293包装细胞,Western blot分析外源基因表达情况。结果三型重组融合基因序列与设计完全一致,其中突变基因的转化活性显著降低,Western blot等显示所构建重组腺病毒在293细胞中高效表达外源基因。结论成功构建表达HPV16,18,58三型E6-E7融合基因的重组腺病毒,并有效消除了其转化活性,为下一步疫苗研发打下了基础。; 杨峥嵘马原栋万骏郑义王海峰赵洁彭扬洋罗海波羊东晔黄来强; 关键词：人乳头瘤病毒腺病毒

一种RNAi载体及其应用: 本发明公开了一种RNAi载体及其应用，其目的是提供一种基于SFV病毒复制子载体的重组SFV表达载体及其在制备抑制靶基因表达的基因治疗性药物中的应用。该RNAi载体是在SFV载体骨架中含有CMV IE启动子和Sv40 po...; 杨峥嵘黄来强王海峰; 文献传递

调控YAP和/或TEAD和/或RHAMM表达水平物质的新用途: 本发明公开了调控YAP和/或TEAD和/或RHAMM表达水平物质的新用途。本发明所提供的一种新用途是调控YAP表达水平的物质在制备调控动物细胞中RHAMM表达水平的产品中的应用。本申请的实验证明YAP和TEAD均为干预R...; 黄来强王中原吴彦萍王海峰张扬清; 文献传递

一种RNAi载体及其应用: 本发明公开了一种RNAi载体及其应用，其目的是提供一种基于SFV病毒复制子载体的重组SFV表达载体及其在制备抑制靶基因表达的基因治疗性药物中的应用。该RNAi载体是在SFV载体骨架中含有CMV IE启动子和Sv40 po...; 杨峥嵘黄来强王海峰; 文献传递

辛伐他汀的新用途: 本发明公开了辛伐他汀的新用途。本发明所公开的辛伐他汀的新用途如下：A、辛伐他汀在制备抑制细胞中YAP活性的产品（如试剂）中的应用。B、辛伐他汀在制备降低细胞中RHAMM表达水平的产品（如试剂）中的应用。C、辛伐他汀在制备...; 黄来强王中原吴彦萍张扬清王海峰; 文献传递

调控YAP和/或TEAD和/或RHAMM表达水平物质的新用途: 本发明公开了调控YAP和/或TEAD和/或RHAMM表达水平物质的新用途。本发明所提供的一种新用途是调控YAP表达水平的物质在制备调控动物细胞中RHAMM表达水平的产品中的应用。本发明的实验证明YAP和TEAD均为干预R...; 黄来强王中原吴彦萍王海峰张扬清; 文献传递

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王海峰