刘文鑫
- 作品数：18 被引量：57H指数：5
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- 重组猪/牛源大肠杆菌耐热肠毒素融合蛋白STp5‑His、抗该蛋白的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种重组猪/牛源大肠杆菌耐热肠毒素(STp)融合蛋白STp5‑His、抗该蛋白的单克隆抗体及其应用，本发明中所述的融合蛋白STp5‑His的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，编码所述融合蛋白的核苷酸序列...
- 师东方韩林林包军董秀梅朱妍张萍刘文鑫
- 文献传递
- 减毒大肠杆菌作为口服疫苗投递载体的研究
- 肠致病性大肠杆菌(E.coli)引起的仔猪腹泻是危害养猪业的重要疾病之一。主要表现为严重的腹泻、脱水，并导致大批仔猪死亡，严重影响仔猪的成活率。由于E.coli耐药菌株的不断出现，导致药物治疗的效果越来越差，因此研制有效...
- 刘文鑫
- 关键词：仔猪腹泻肠致病性大肠杆菌抗原基因
- 文献传递
- 大肠杆菌F4、F5天然菌毛及表达蛋白鸡卵黄抗体的制备及初步应用
- 仔猪黄痢、仔猪白痢是由产肠毒素性大肠杆菌引起的新生仔猪常见的传染病,主要表现为严重的腹泻、脱水,并导致大批仔猪死亡,严重影响仔猪的成活率。 目前,对该病的防治主要采用大肠杆菌多价苗免疫和抗生素治疗,但防治效果均不理想。...
- 刘文鑫
- 关键词：大肠杆菌
- 文献传递
- 犬细小病毒环介导等温扩增检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank中犬细小病毒(CPV)VP2基因序列,利用Primer Explorer V4软件设计并合成了针对CPV VP2基因序列保守区域的4条寡核苷酸片段(F3/B3,FIP/BIP)作为LAMP引物。以CPV DNA为模板,通过对LAMP反应温度和时间的优化以及特异性试验、敏感性试验和对临床样品的检测,建立了一种针对CPV VP2基因的LAMP快速检测方法。结果显示,该LAMP检测方法只对CPV有梯状扩增条带,对犬瘟热病毒(CDV)、狂犬病病毒(RV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV-Ⅱ)无扩增条带;对CPV的最低检出量为2.1×10-2 TCID50,其敏感性约为常规PCR检测方法(最低检出量为2.1TCID50)的100倍,是犬细小病毒抗原快速检测试纸(最低检出量为101.5 TCID50)的1 500倍。临床样品的LAMP检测结果与PCR检测结果的符合率为100%。
- 关玮琨何丽丽冯瑜菲朱颖刘文鑫江馗语胡文霞师东方
- 关键词：犬细小病毒环介导等温扩增
- 犬瘟热病毒N基因环介导等温扩增检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 为建立犬瘟热病毒(CDV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据GenBank中CDVN基因保守序列设计合成了2对LAMP引物,内引物FIP、BIP和外引物F3、B3。以CDVN基因重组质粒(pMD-CDV-N)为模板,经反应条件优化、特异性试验、敏感性试验及临床样品检测。检测结果显示,该方法于61℃水浴60min即可完成反应,最低检出量为70个拷贝,比RT-PCR灵敏10倍。该检测方法仅对CDV产生阳性扩增,而对狂犬病毒,犬细小病毒,犬腺病毒Ⅱ型扩增结果均为阴性。用建立的LAMP方法检测临床样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。本方法简便,特异,有利于CDV的临床检测。
- 何丽丽关玮琨江馗语朱颖刘文鑫冯瑜菲胡文霞师东方
- 关键词：犬瘟热病毒N基因环介导等温扩增
- O_(139,142,26)混合血清型大肠杆菌的O-抗原基因簇的破译被引量：4
- 2010年
- 应用鸟枪法扩增了一株从水肿病病死猪肠系膜淋巴结分离到的O混合血清型(O139,142,26)大肠杆菌的O-抗原基因,测序结果显示扩增的O-抗原基因长度为11 771 bp。通过生物信息学的方法对其结构进行分析,发现其具有10个开放阅读框架及功能基因种类。经与发表的大肠杆菌O139、O26和O142的O-抗原基因序列及O-抗原糖基链的结构进行比对,进化树分析,跨膜蛋白的结构分析以及对乳糖前体(Glc)添加乙酰基的机制分析,结果表明,该O混合血清型大肠杆菌的O-抗原基因与大肠杆菌O139的O-抗原基因进化关系最近。
- 许亚卓杨春柳刘文鑫杨旭东李海滨师东方
- 关键词：大肠杆菌
- 大肠杆菌耐热肠毒素基因多拷贝串联表达及其单克隆抗体的制备
- 2015年
- 为制备具有免疫原性的重组大肠杆菌耐热肠毒素蛋白(STp)及抗STp特异性单克隆抗体(MAb),本研究将5拷贝estp串联,克隆于p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-estp5-his,并转化于大肠杆菌中进行重组蛋白STp5-His(r STp5-His)的表达。以r STp5-His为免疫原,重组蛋白MBP-5STp为检测抗原,制备和筛选阳性杂交瘤细胞株,并采用western blot、阻断ELISA方法对MAb进行鉴定。结果显示,r STp5-His主要以包涵体形式表达,大小约为38 ku,具有良好的免疫原性,以其作为免疫原制备了4株能够识别天然STp的MAb,特异性良好。研究表明,多拷贝基因串联表达可以制备具有免疫原性的重组STp蛋白,所制备的MAb为天然STp和重组STp蛋白检测方法的建立奠定了基础。
- 韩林林阿力马斯别克.哈山李金萍唐杰刘文鑫关玮琨李星月赵志腾师东方
- 关键词：大肠杆菌基因串联体免疫原性单克隆抗体
- 大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立被引量：8
- 2015年
- 目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(elt-Ⅰ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法。结果用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229bp)、estB(480bp)、elt-Ⅰ(605bp)和elt-Ⅱ(300bp)基因片段,最低检出量分别为2.55×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL和2.47×103 CFU/μL。从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致。结论建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求。
- 孟相秋袁超文刘文鑫关玮琨杜元策李丹丹赵姝静唐杰师东方
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素多重PCR
- 辽宁地区腹泻患者大肠杆菌分离株Ⅱ型不耐热肠毒素的检测及测序分析被引量：3
- 2016年
- 目的对辽宁地区人源性腹泻样本中致病性大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)的毒力因子进行检测,掌握产Ⅱ型不耐热肠毒素(Type Ⅱ heat labile enterotoxin,LT-Ⅱ)大肠杆菌在我国北方地区的流行现状并阐明LT-Ⅱ与其他致病因子间的关系。方法于2014年3月至2015年3月收集辽宁地区人源性腹泻粪便样品,用麦康凯培养基和生化试验的方法分离出大肠杆菌,并用多重PCR方法对毒力基因(elt-Ⅱ、elt-I、sta、stb、K88、K99等)进行检测,对分离到的LT-Ⅱ阳性大肠杆菌中elt-Ⅱ基因进行测序及分型。结果 354份腹泻样品中共分离到携带有毒力因子的大肠杆菌139株,检出率为39.2%。毒力因子阳性大肠杆菌中,有12株携带elt-Ⅱ(8.6%)基因。在12株携带elt-Ⅱ的大肠杆菌中,2株单独携带elt-Ⅱ,6株携带F1,1株携带K88,1株携带astA,2株携带irp2/astA;测序结果表明12株elt-Ⅱ阳性大肠杆菌中有10株携带elt-Ⅱc1亚型,2株携带elt-Ⅱc4亚型。结论在引起人源性腹泻的毒力因子中有大肠杆菌Ⅱ型不耐热肠毒的存在,且主要以LT-Ⅱc1为主要流行型。
- 袁超文江馗语张力国刘文鑫
- 关键词：PCR检测测序分析
- BALB/c鼠口服免疫猪水肿病大肠杆菌基因突变菌株的免疫效果被引量：2
- 2009年
- 为了研究猪水肿病(ED)大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株作为口服疫苗的免疫效果,本实验用已构建的猪ED大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株口服免疫BALB/c小鼠,检测其血清中的IgG抗体及粪便和肠黏液中的sIgA抗体水平,并进行淋巴细胞增殖检测及攻毒保护实验。结果表明该基因突变菌株具有良好的免疫性,能诱导小鼠体内产生IgG和sIgA抗体,并且能引起T淋巴细胞增殖反应。攻毒保护实验结果显示,口服免疫突变菌株能对小鼠提供良好的保护,保护率为75%(15/20)。本研究结果证明,该大肠杆菌基因突变菌株在小鼠体内能激发体液免疫和细胞免疫反应,可作为猪ED口服疫苗的候选菌株。
- 杨春柳许亚卓杨旭东刘文鑫师东方
- 关键词：猪水肿病口服免疫
