关玮琨
- 作品数：13 被引量：42H指数：5
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划黑龙江省科技计划项目黑龙江省科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 稳定表达犬瘟热病毒细胞受体SLAM的BHK-21/SLAM细胞系的建立被引量：5
- 2014年
- 为建立稳定表达犬瘟热病毒(CDV)受体,即信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的BHK-21细胞系,本研究将重组表达质粒pDisplay-SLAM转染于BHK-21细胞,通过G418压力筛选并结合有限稀释法、免疫荧光、RT-PCR和western blot筛选出稳定表达SLAM的阳性细胞(BHK-21/SLAM)。病毒感染试验结果显示,CDV在BHK-21细胞中无细胞病变(CPE)产生,而感染BHK-21/SLAM细胞12 h后即可出现CPE;BHK-21/SLAM细胞培养物上清液中的CDV核酸含量于24 h达到最高值(107.9拷贝/μL),明显高于对照组BHK-21细胞培养物上清液中的核酸含量(106.28拷贝/μL)。研究结果表明,与BHK-21细胞相比较,CDV在BHK-21/SLAM细胞中的病毒核酸含量更高,并能够产生明显的CPE。该细胞系的建立在CDV的分离、生物学特性研究和疫苗毒生产等方面具有良好应用前景。
- 朱颖刘文鑫赵姝静李丹丹冯瑜菲关玮琨何丽丽江馗语师东方
- 关键词：犬瘟热病毒BHK-21
- 断奶仔猪对毒力基因缺失大肠杆菌的免疫应答
- 2011年
- 为研究猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe编码基因突变菌株作为口服疫苗的免疫效果,本实验用构建的突变菌株(O139/SLT-Ⅱe*/07)口服免疫断奶仔猪后,检测突变菌株在仔猪肠道的定植情况,仔猪血清及粪便中的特异性抗体和细胞因子水平,并进行了免疫保护效力评价。结果显示,免疫后21 d仍能在实验1组(微胶囊口服免疫)和2组(直接口服免疫)的仔猪粪便中检出突变菌株;从免疫后第7 d、14 d和21 d开始,在实验1组血清样品中可分别检测到抗SLT-ⅡeA蛋白、F18ab菌毛蛋白和O139抗原的IgG抗体(P/N>2);从免疫后第7 d、14 d开始,在粪便中可分别检测到抗SLT-ⅡeA蛋白、SLT-ⅡeB蛋白、O139抗原、F18ab菌毛蛋白的sIgA抗体(P/N>2);免疫仔猪血清中的INF-γ的含量升高;实验2组的血清特异性IgG水平和粪便中sIgA抗体水平比实验1组低;该突变菌株对仔猪具有免疫保护作用。研究结果表明该大肠杆菌基因突变株可作为仔猪水肿病口服疫苗的候选菌株。
- 胡文霞冯瑜菲何丽丽关玮琨江馗语师东方
- 关键词：猪水肿病大肠杆菌免疫应答
- 犬细小病毒环介导等温扩增检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank中犬细小病毒(CPV)VP2基因序列,利用Primer Explorer V4软件设计并合成了针对CPV VP2基因序列保守区域的4条寡核苷酸片段(F3/B3,FIP/BIP)作为LAMP引物。以CPV DNA为模板,通过对LAMP反应温度和时间的优化以及特异性试验、敏感性试验和对临床样品的检测,建立了一种针对CPV VP2基因的LAMP快速检测方法。结果显示,该LAMP检测方法只对CPV有梯状扩增条带,对犬瘟热病毒(CDV)、狂犬病病毒(RV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV-Ⅱ)无扩增条带;对CPV的最低检出量为2.1×10-2 TCID50,其敏感性约为常规PCR检测方法(最低检出量为2.1TCID50)的100倍,是犬细小病毒抗原快速检测试纸(最低检出量为101.5 TCID50)的1 500倍。临床样品的LAMP检测结果与PCR检测结果的符合率为100%。
- 关玮琨何丽丽冯瑜菲朱颖刘文鑫江馗语胡文霞师东方
- 关键词：犬细小病毒环介导等温扩增
- 犬细小病毒LAMP检测方法建立及其串联表位卵黄抗体中和效力评价
- 犬细小病毒感染是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引发犬类的一种接触性传染病。该病毒可引起犬急性肠炎、白细胞减少、呕吐、以及幼犬心肌炎等病症。犬细小病毒为单股线状DNA病毒,其主要结构蛋白是VP1...
- 关玮琨
- 关键词：犬细小病毒VP2基因卵黄抗体
- 文献传递
- 大肠杆菌耐热肠毒素基因多拷贝串联表达及其单克隆抗体的制备
- 2015年
- 为制备具有免疫原性的重组大肠杆菌耐热肠毒素蛋白(STp)及抗STp特异性单克隆抗体(MAb),本研究将5拷贝estp串联,克隆于p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-estp5-his,并转化于大肠杆菌中进行重组蛋白STp5-His(r STp5-His)的表达。以r STp5-His为免疫原,重组蛋白MBP-5STp为检测抗原,制备和筛选阳性杂交瘤细胞株,并采用western blot、阻断ELISA方法对MAb进行鉴定。结果显示,r STp5-His主要以包涵体形式表达,大小约为38 ku,具有良好的免疫原性,以其作为免疫原制备了4株能够识别天然STp的MAb,特异性良好。研究表明,多拷贝基因串联表达可以制备具有免疫原性的重组STp蛋白,所制备的MAb为天然STp和重组STp蛋白检测方法的建立奠定了基础。
- 韩林林阿力马斯别克.哈山李金萍唐杰刘文鑫关玮琨李星月赵志腾师东方
- 关键词：大肠杆菌基因串联体免疫原性单克隆抗体
- 大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立被引量：8
- 2015年
- 目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(elt-Ⅰ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法。结果用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229bp)、estB(480bp)、elt-Ⅰ(605bp)和elt-Ⅱ(300bp)基因片段,最低检出量分别为2.55×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL和2.47×103 CFU/μL。从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致。结论建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求。
- 孟相秋袁超文刘文鑫关玮琨杜元策李丹丹赵姝静唐杰师东方
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素多重PCR
- 山东省貂源铜绿假单胞菌分离株的血清型和致病性被引量：5
- 2017年
- 为了解山东省貂源铜绿假单胞菌(PA)的血清型分布,本研究从部分市县采集的山东77份水貂肺脏病料样品中分离PA,并进行生化鉴定、分子生物学鉴定、血清学鉴定、生长曲线测定和半数致死量(LD_(50))测定。结果显示,共分离获得53株PA,分别属于11个血清型,其中G型27株、B型5株、D型4株。其他血清型分离株较少。其中G、B和D型分离株SD004、SD050、SD052生长性能良好,对小鼠的LD50分别为1.99×10^(10) cfu、2.51×10^(10)cfu、5.62×10^(10)cfu。该研究为水貂出血性肺炎灭活疫苗菌株的选择提供实验依据。
- 赵志腾江俄尔汗.热斯拜陶婧关玮琨李星月李婷婷师东方
- 关键词：水貂出血性肺炎铜绿假单胞菌血清型
- 牛源产Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及重组毒素制备被引量：5
- 2014年
- 产Ⅱ型不耐热肠毒素(LT-Ⅱ)大肠杆菌是一类能引起严重腹泻的人畜共患肠道致病菌。为了解LT-Ⅱ在牛源腹泻性大肠杆菌中的流行情况,本研究对2010-2012年间分离的138株大肠杆菌进行了LT-Ⅱ毒素基因的检测,对分离到的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌进行了测序及分析。进一步将LT-Ⅱcl毒素基因双顺反子的ORF克隆入pET30a表达载体、转化Rossatta感受态并诱导表达重组LT-Ⅱcl毒素,经Y-1小鼠肾上腺皮质细胞对重组毒素进行了初步的毒性验证。结果显示,所分离的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌中,有8株表达LT-Ⅱcl毒素,1株表达LT-Ⅱc4毒素,1株表达LT-Ⅱc6毒素。SDS-PAGE和Western Blot结果表明成功地制备出LT-Ⅱcl重组毒素,该重组毒素可以使Y-1小鼠肾上腺皮质细胞发生明显的病变,其细胞最小致死量为17.8 pg。本研究为中国国内首次分离到牛源产LT-Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌,为深入研究LT-Ⅱ毒素奠定了基础。
- 袁超文刘文鑫关玮琨孟相秋唐杰李星月赵志腾师东方
- 关键词：重组毒素细胞毒性
- 产志贺毒素Ⅱ型变异体大肠杆菌LAMP检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 为建立产志贺毒素Ⅱ型变异体(Stx2e)大肠杆菌的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法,参照Gen-Bank中12条Stx2e序列和9条Stx2序列,针对Stx2e基因保守区域设计并合成4条引物,分别进行了反应条件优化、特异性试验、敏感性试验及模拟样品检测。结果显示,用所建立的LAMP方法对阳性样品扩增所得产物电泳后呈特征性梯状条带,阴性样品的扩增产物电泳后均无扩增条带。建立的LAMP方法对Stx2e+大肠杆菌的最低检出量为38CFU/管,敏感性高于PCR方法(3.8×103CFU/管)。LAMP和PCR对模拟样品检测结果的符合率为100%。该研究为仔猪水肿病的诊断和Stx2e+大肠杆菌的快速检测提供了新的方法。
- 冯瑜菲朱颖刘文鑫江馗语何丽丽关玮琨胡文霞师东方
- 关键词：大肠杆菌猪水肿病
- 基于假基因内插入的嵌合肠毒素重组减毒大肠杆菌口服疫苗候选菌株的研究
- 产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)是一种主要危害新生仔猪的急性传染病，主要通过黏附素和肠毒素引起仔猪剧烈腹泻。腹泻的仔猪往往因没得到有效预防而死亡，从而给畜牧...
- 关玮琨
- 关键词：不耐热肠毒素口服疫苗
