刘静
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中华医学基金会基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 广州管圆线虫组织蛋白酶Z基因的原核表达及免疫学分析被引量：1
- 2010年
- 目的克隆并原核表达广州管圆线虫组织蛋白酶-Z基因,评价其融合蛋白在免疫诊断中的应用前景。方法利用生物信息学分析工具,分析广州管圆线虫组织蛋白酶-Z的理化性质、结构与功能特征;克隆目的基因至原核表达载体pET30a(+),经PCR、双酶切鉴定后,IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,融合蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化;ELISA检测融合蛋白作为诊断抗原的敏感性及特异性。结果该蛋白理化性质较稳定,含有分泌型信号肽;含有构成半胱氨酸蛋白酶催化中心的Cys84、His232和Asn253三个氨基酸残基。成功构建了重组质粒且目的基因在E.coliBL21中获得高效表达,经亲和层析获得了纯化的融合蛋白。融合蛋白可被其免疫的BALB/c小鼠血清及感染广州管圆线虫的小鼠血清识别;作为包被抗原用于ELISA检测小鼠血清其敏感性及特异性均为100%与粗抗原无差别,检测其他寄生虫病人血清及正常人血清其特异性分别为100%和97.4%与粗抗原相比特异性较高。结论广州管圆线虫组织蛋白酶-Z与多个物种组织蛋白酶-Z基因同源,是一种半胱氨酸蛋白酶,含有信号肽,可能是重要的虫体分泌排泄抗原成分,在广州管圆线虫病的免疫诊断方面有潜在的应用前景。
- 岳永亮于彦杰杨潇程梅何蔼曲振宇刘静王琳李卓雅詹希美
- 关键词：广州管圆线虫生物信息学原核表达免疫诊断
- 联合PCR技术克隆白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因及其生物信息学分析
- 2011年
- 目的测定白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶的基因的全长序列并用生物信息学方法分析其结构和功能。方法从白纹伊蚊卵、幼虫、蛹、雌蚊、雄蚊中提取总RNA,逆转录后以总cDNA为模板,设计简并引物进行巢式PCR,扩增部分序列后设计新的特异性引物补全5’端序列,使用3’-RACE法补全3’端序列,拼接全长后进一步进行生物信息学分析。结果通过巢式PCR扩增出1145bp的核苷酸序列,测序后设计5’端序列的下游引物,扩增出约900bp的核苷酸序列,设计3’端的上游引物,配合3’RACE试剂盒扩增出约600bp的核苷酸序列,寻找重复序列将三段序列进行拼接,得到国内外从未获得的长2244bp、编码747个氨基酸序列的白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因的全长序列。生物信息学分析其与白纹伊蚊的相似性最高,为含信号肽的跨膜蛋白,含3个Cu氧化酶超家族位点,属于蓝色多铜氧化酶家族。结论联合PCR技术的应用使较长长度的基因序列的扩增更为方便、准确。为进一步对其进行功能的研究奠定了基础。
- 刘静吴瑜詹希美冯崑尧甘明张美春郑小英李卓雅何蔼
- 关键词：巢式PCR白纹伊蚊
- 广州管圆线虫Asp-1基因的克隆表达及各虫期转录水平研究被引量：1
- 2011年
- 目的构建广州管圆线虫天冬氨酰蛋白酶(Asp-1)基因的原核表达系统,研究该基因在各虫期的转录水平。方法构建重组质粒pET-30a(+)-Asp-1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达载体,经IPTG诱导表达后,Ni-IDA亲和层析纯化表达产物。通过以β-肌动蛋白为内参、以各期虫cDNA为模板的实时荧光定量PCR,研究该基因在各虫期的表达水平。结果获得纯化的重组蛋白,相对分子质量约为43000,与生物信息学分析预测结果一致。qRT-PCR显示该基因在三期幼虫中表达丰度最高,四/五期幼虫、成虫雄虫、雌虫依次降低。结论 Asp-1基因的表达丰度在三期幼虫中最高的实验数据与三期幼虫感染性最强的事实相符,提示天冬氨酰蛋白酶有可能是幼虫入侵宿主的关键酶,为后续广州管圆线虫虫体侵入宿主的机制以及宿主保护机制研究打下基础。
- 王琳杨潇曲振宇刘静刘茜何蔼陈婧李卓雅詹希美
- 关键词：广州管圆线虫原核表达实时荧光定量PCR
- 含P301L突变的Tau转基因小鼠纯合子品系的建立及鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的:建立含P301L突变的tau转基因小鼠的纯合子品系。方法:雄原核显微注射法获得含P301L突变的tau转基因阳性首建鼠,通过SYBR Green实时荧光定量PCR法和传统育种方式结合鉴定纯合子和杂合子。结果:共选育出95只纯合子,鉴定出的纯合子具有优于杂合子模拟老年痴呆生物学特性改变的优势。结论:外源性基因tau能稳定遗传,采用的SYBR Green实时荧光定量PCR和传统育种方式结合筛选鉴定纯合子和杂合子快速、经济、可靠。
- 王艳艳陈汝筑朱小南刘静刘秀娟李志慧纳鑫梁珊珊邱国光张薇汪海汪雪兰
- 关键词：TAU蛋白转基因小鼠实时定量PCR纯合子
- 广州管圆线虫感染小鼠血清细胞因子及IgG亚类的动态观察被引量：1
- 2011年
- 目的观察小鼠感染广州管圆线虫后机体免疫的动态变化。方法分别采集感染前、感染后第1、3、7、18d的小鼠血清,用ELISA方法检测血清中细胞因子IL-2I、L-4以及特异性免疫球蛋白G(IgG)亚类水平。结果广州管圆线虫感染的小鼠血清中IL-2的水平较感染前呈逐渐下降趋势,IL-4的水平与感染前小鼠相比先下降后呈升高趋势。抗体IgG1的水平与感染前小鼠相比明显升高,IgG2a的水平与感染前小鼠相比未见明显变化。结论小鼠Th1型免疫应答较弱,Th2型免疫应答增强。表明小鼠感染广州管圆线虫后机体细胞免疫较弱,体液免疫较强。
- 刘静詹希美杨潇曲振宇王琳刘茜李卓雅吴忠道何蔼
- 关键词：广州管圆线虫细胞因子免疫球蛋白G亚类
