罗顺涛
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院生物治疗国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划病毒基因工程国家重点实验室开放课题基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 体外实时动态监测水动力注射分泌型荧光素酶基因的表达被引量：6
- 2009年
- 为了建立体外实时动态监测转导基因的体内表达,本研究选择分泌型的荧光素酶基因Gluc作为报告基因,对其体内外表达特性和检测方法进行了研究。首先构建了Gluc表达质粒pAAV2neo-Gluc。将pAAV2neo-Gluc转染体外培养的Huh7、HepG2细胞后,细胞培养上清和细胞裂解液中分别检测到Gluc的活性,而上清比细胞中的含量高约100倍。表明表达的Gluc以分泌形式为主。用水动力法经小鼠尾静脉注射pAAV2neo-Gluc质粒,活体成像表明Gluc在小鼠体内呈全身分布,而注射了萤火虫荧光素酶质粒pAAV2neo-Fluc的对照小鼠则主要在肝脏显像。将剂量分别为0.1、1、10、50μg每只的pAAV2neo-GlucDNA用水动力法尾静脉注射小鼠,不同时间点连续尾静脉采血测定其中的Gluc酶活性,观察其Gluc体内表达和分泌的动态变化。结果显示,各剂量组的Gluc表达变化规律高度一致:注射后2h即可检测到Gluc表达,10h后达到高峰,之后逐渐下降;Gluc的表达水平与注射质粒DNA的量呈正相关;为了进一步观察Gluc检测的灵敏性,本研究又比较了注射更低的质粒剂量(包括0.001、0.01和0.1μg每只)时Gluc体内表达情况。结果发现注射剂量低至0.001μg每只小鼠都能在血中检测到Gluc表达,这一结果提示了Gluc检测的高度灵敏性。本研究首次报道了以Gluc为报告基因体外实时动态监测水动力注射基因的表达规律,为动态分析水动力注射基因的体内表达调控及功能研究提供了新的有效手段。
- 田文洪王刚罗顺涛董小岩付昕阳谭文杰吴小兵
- 关键词：基因表达EXVIVO
- 用分泌型萤光素酶报告系统比较TTR启动子与CMV启动子的体内外表达特性被引量：2
- 2009年
- GLuc（GaussiaLuciferase）是一种高灵敏度分泌型萤光素酶。本研究利用GLuc的易分泌、高灵敏性和检测方法简单快速的特点,初步比较了TTR启动子（PTTR）与CMV启动子（PCMV）的体内外表达特性。首先构建了两种启动子-报告基因表达质粒pAAV2-neo-TTR-GLuc和pAAV2-neo-CMV-GLuc。用脂质体转染法将它们分别转染至两株肝细胞源的细胞株Huh7与HepG2以及两株非肝细胞源细胞株HEK293与HeLaS3。在转染后不同时间点取细胞培养上清液检测GLuc的表达。此外采用水动力注射法,将这两种质粒分别以注射剂量0.1μg、1μg和10μg/只经尾静脉注射至BALB/c小鼠体内,注射后2h开始在不同时间点上经尾静脉采集全血（2.5μl/次）并测定血液中的GLuc水平。细胞实验结果显示,PCMV介导的GLuc表达都明显高于PTTR;然而,在HEK293和HeLaS3细胞中PCMV比PTTR的表达水平高50-300倍,而在Huh7和HepG2中仅高10倍以内,提示PTTR具有相对的肝细胞特异性。在小鼠实验中,PCMV介导的GLuc表达在各剂量组中也明显高于PTTR,然而它们表达水平变化特征明显不同：PCMV介导的GLuc表达在质粒注射后约10h达到最大值，此后迅速下降；而PTTR介导的GLuc表达在质粒注射后约48h达到峰值，随后缓慢下降。上述实验结果提示，PTTR虽然在表达强度方面不及PCMV但其介导的表达水平维持长时间，下降较缓慢，比较适于目的基因在肝脏内的较长时间表达。
- 罗顺涛田文洪王刚董小岩杨莉吴小兵
- 关键词：启动子转甲状腺素蛋白巨细胞病毒
- REGγ促进肺癌细胞的恶性生物学行为被引量：2
- 2014年
- 目的研究蛋白酶体激活因子γ(REGγ)在人肺癌组织及细胞系中的表达以及其对肺癌细胞增殖、细胞周期以及迁移能力等多种恶性生物学行为的影响。方法免疫组织化学染色检测REGγ在肺癌组织以及癌旁正常组织中的表达情况;Western blot检测肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中REGγ的表达;构建REGγ过表达及沉默肺癌H1975稳定细胞株,用MTT法检测不同REGγ表达情况的肺癌细胞H1975稳定株的增殖变化;PI染色流式检测REGγ对肺癌细胞周期的作用;通过细胞划痕实验观察REGγ对肺癌细胞迁移能力的影响。结果在肺癌组织中REGγ的表达程度明显高于癌旁正常组织。在多个肺癌细胞系中,REGγ表达量均高于正常细胞系。REGγ过表达可以促进肺癌细胞增殖(P<0.05),增加肿瘤细胞S+G2/M期的比例(P<0.05),并增强其迁移能力(P<0.05),沉默REGγ后上述影响均发生逆转。结论 REGγ对肺癌多种恶性生物学行为有明显促进作用。
- 覃晴郭福春罗顺涛李晓玉刘晓柯王永生
- 关键词：细胞周期细胞迁移
