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李毅: 作品数：19 被引量：82H指数：6; 供职机构：第四军医大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金陕西省国际科技合作计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程自动化与计算机技术更多>>

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重组人骨形成蛋白-2对细胞成骨分化的作用被引量：11: 2002年; 目的进一步探讨ｒｈＢＭＰ－２的促细胞成骨分化作用，以期找到合适的成骨分化标志作为ｒｈＢＭＰ－２的定量活性测定指标。方法　首先表达制备ｒｈＢＭＰ－２，用小鼠股部肌袋包埋法进行诱骨活性实验，然后检测ｒｈＢＭＰ－２作用后的骨髓基质细胞（ＭＳＣ）、ＮＩＨ３Ｔ３和Ｃ２Ｃ１２等３种细胞的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和骨钙素（ＯＣ）、细胞总蛋白合成量以及细胞增殖的变化。结果　ｒｈＢＭＰ－２具有良好的诱导骨形成的活性，可增加３种细胞的ＯＣ含量和蛋白合成量，对ＭＳＣ的ＡＬＰ活性变化影响明显，且可促进ＭＳＣ的增殖，抑制ＮＩＨ３Ｔ３细胞的生长。结论　ｒｈＢＭＰ－２具有促进上述细胞向成骨细胞分化的作用；在一定剂量范围内，ｒｈＢＭＰ－２的作用与细胞骨钙素合成量的增加呈线性正相关，故定量测定ＯＣ的含量基本可反映ｒｈＢＭＰ－２的活性。; 朱帮福张斌李毅纪宗玲蒲勤柴玉波陈南春陈苏民; 关键词：重组人骨形成蛋白-2 成骨分化细胞分化

带绿色荧光蛋白标签的人era真核表达载体的构建及人Era对细胞形态和细胞周期的影响被引量：5: 2003年; 目的 :构建人era真核表达载体并初步研究这一人类新基因对体外培养细胞形态和细胞周期的作用。方法 :构建带绿色荧光蛋白 (EGFP)标签的人era真核表达载体 ,转染体外培养细胞NIH3T3,用荧光显微镜观测和流式细胞仪进行分析。结果 :无论EGFP融合于人Era的C端或N端 ,融合蛋白均表达于细胞浆接近核膜处 ,细胞形态无明显变化 ,细胞周期检测S期细胞所占百分数降低。结论 :人era可能参与细胞周期调控 ,为阐明人era的功能提供了资料。; 纪宗玲陈苏民刘断中吴元明张俊杰路凡朱帮福李毅; 关键词：基因表达细胞形态细胞周期绿色荧光蛋白 ERA基因

hBMP-3成熟肽与人PDI分子片段在大肠杆菌中的共表达: 2002年; 0 引言人骨形成蛋白-3(human Bone Morphogenetic Protein-3,hBMP-3)是TGF-β超家族成员之一,具有显著的诱骨功能,并且在胚胎发育、神经胶质细胞发育及诱导细胞凋亡方面有着重要作用,hBMP-3已在COS及CHO等真核系统中表达,产物具有良好活性,但真核系统表达产量低、生产成本高,限制了它的应用,大肠杆菌表达系统虽然有产量高。; 李毅柴玉波蒲勤陈南春陈苏民; 关键词：PDI 共表达

碱性MAGE家族新成员restin在大肠杆菌中的表达和抗体制备被引量：4: 2005年; 目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL60中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用。方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区。将其克隆入大肠杆菌表达载体中。经过温度诱导获得restin表达蛋白。利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清。以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布。结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000。将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Westernblot检测其效价为1∶800。间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内。结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件。; 路凡杨辉王孝功蒲勤李毅赵文明赵忠良; 关键词：抗血清间接免疫荧光

人骨保护素在毕赤酵母中的分泌表达及表达产物的生物活性分析(英文)被引量：3: 2003年; 为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG) ,以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到人OPG编码区cDNA ,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ B ,电转化毕赤酵母GS115 (Mut+) ,经 3%甲醇诱导分泌表达人OPG与组氨酸的融合蛋白 .SDS PAGE及Western印迹分析表明 ,有分子量约 6 6kD的目的蛋白表达 .纯化后的表达产物加入体外培养的小鼠骨髓细胞培养基中 ,当浓度为 10 0ng ml时 ,象牙片上骨吸收陷窝的数量及玻片上的TRAP阳性多核细胞的数量均减少 (P <0 0 5 ) .而同时加入人OPG的多克隆抗体后 ,这一抑制作用可被拮抗 ,在浓度为 5 0ng ml时则无此作用 .人OPG蛋白在酵母系统的成功表达 ,为该蛋白的进一步应用研究提供了依据 .; 刘继中陈苏民李毅胡蕴玉纪宗玲杨彤涛; 关键词：人骨保护素毕赤酵母分泌表达生物活性

MPC骨水泥纤维蛋白胶复合BMP人工骨支架材料对山羊松质骨缺损的修复被引量：6: 2008年; 研制MPC/CPC骨水泥纤维蛋白胶复合BMP新型人工骨的制备及人工骨修复骨缺损的性能。通过对成年山羊双侧股骨髁部分别制备1处直径10mm、深15mm松质骨缺损,制备MPC/CPC/FG/BMP(A组)、MPC/CPC/FG(B组)、CPC/FG(C组)人工骨支架材料,分别植入各组实验观察材料,分别于6周、12周进行影像学、组织学、形态计量学观察骨缺损修复情况。说明新型MPC骨水泥纤维蛋白胶复合BMP新型生物活性人工骨支架材料在促进成骨、加快磷酸钙骨水泥降解速度上优于MPC/CPC/FG、CPC/FG的人工骨,同时新型MPC骨水泥复合纤维蛋白胶的成骨和促骨水泥降解作用优于单纯CPC复合FG的人工骨。; 李毅孟国林刘建刘昌胜袁志吕荣; 关键词：骨缺损人工骨磷酸钙骨水泥骨形态发生蛋白

氟伐他汀对大鼠气道平滑肌增生的影响被引量：9: 2003年; 目的 :观察氟伐他汀 (Fluvastatin)对离体培养的大鼠气道平滑肌 (AirwaySmoothMuscleCell,ASMC)增生的影响 .方法 :MTT法及细胞计数检测体外培养的ASMC的增生 .结果 :氟伐他汀对于由血清和组织胺刺激引起的ASMC增生均具有抑制作用 (P <0 .0 1) ,1× 10 5mol·L-1浓度的氟伐他汀对ASMC的增生的抑制率达 2 0 %以上 ,而 1× 10 -4mol·L-1浓度的氟伐他汀则可完全抑制ASMC的增生 .结论 :氟伐他汀可抑制ASMC的增生。; 李毅戚好文刘颖格陈秉耀; 关键词：氟伐他汀气道增生哮喘

部分骨钙素启动子控制荧光素酶基因真核载体的构建及表达被引量：2: 2002年; 目的　构建部分骨钙素启动子控制荧光素酶报告基因的真核表达载体 pc DNA3- OCP- L uc,转染细胞后检测报告基因对 rh BMP- 2的反应 ,以期用于 rh BMP活性的定量测定 .方法　用 PCR方法扩增骨钙素部分启动子 14 7bp,克隆入p GEM- 3zf(- )中 ,经酶切鉴定和序列分析正确后 ,亚克隆入能稳定高效表达荧光素酶的真核表达载体 pc DNA3- L uc中 ,构建真核表达载体 pc DNA3- OCP- L uc,然后分别将 pc DNA3-L uc和 pc DNA3- OCP- L uc转染细胞 ,并检测其对 rh BMP- 2的反应 .结果　成功构建了部分骨钙素启动子控制荧光素酶报告基因的真核表达载体 pc DNA3- OCP- L uc;转染细胞后其报告基因的基础活性较 pc DNA3- L uc大为降低 ,而且报告基因的表达与 rh BMP- 2剂量在一定范围内成线性正相关 .结论　真核表达载体 pc DNA3- OCP- L uc的报告基因表达具有特异性 ,可代替直接测定骨钙素用于 rh BMP- 2活性的定量测定研究 .; 朱帮福陈苏民陈南春张斌李毅纪宗玲柴玉波许彦鸣; 关键词：骨钙素启动子萤光素酶基因表达 PCR方法

体外冲击波对骨质疏松兔股骨髁部松质骨影响的实验研究被引量：8: 2008年; 目的观察体外冲击波对骨质疏松兔股骨髁部松质骨的成骨作用。方法采用卵巢切除法(OVX)对30只5月龄雌性新西兰兔去势,5个月后建立骨质疏松模型。所有动物随机分为3组,每组10只,其中一组为空白对照组(A组),其余两组(B组和C组)动物右侧股骨髁部进行体外冲击波(ESW)处理,冲击波能流密度0.47 mJ/mm2,脉冲2000次。于处理前、处理后4、8 w时分3批处死动物,分离右侧股骨远端,进行micro-CT测量分析。结果micro-CT三维重建分析表明,冲击波处理后4w(B组)及8 w(C组)时实验组的BMD、BMC和骨小梁立体测量学的指标与对照组的差别有统计学意义,其中C组的BMD分别比A组和B组增高79.9%和14.0%,尽管C组在BMD、BMC和骨小梁立体测量学等指标方面均较B组优,但两组测量结果的差别无统计学意义。结论体外冲击波可以促进骨质疏松被处理局部骨小梁的改建,改善骨小梁的三维结构,增加骨质密度。; 张堃刘建孟国林袁志郭炜梁国穗秦岭张钦张志敏李毅; 关键词：骨质疏松体外冲击波

骨形成蛋白诱导型真核载体的构建及其表达: 2003年; 成骨分化相关基因骨钙素 (OC)等的启动子内均含有成骨特异性转录因子Cbfa1特异性作用元件 ,而骨形成蛋白 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)的促成骨分化作用正是通过其首先引起Cbfa1的升高 ,而后Cbfa1激活这些基因的表达 ,最终出现成骨分化表型 .为解决BMP没有理想的活性测定方法的问题 ,在RT PCR结果证实BMP 2可促进NIH3T3和C2C12细胞Cbfa1表达后 ,构建了串联6个Cbfa1作用元件的小鼠OC部分启动子 (6OCP)控制萤光素酶 (luciferase)报告基因的真核表达质粒 ,以期来放大BMP诱导报告基因表达的作用效果 .即通过细胞转染、rhBMP 2刺激后检测萤光素酶活性变化 ,从而间接定量测定rhBMP 2的生物学活性 .结果表明 ,pcDNA3 6OCP Luc转染细胞后其报告基因的基础活性较pcDNA3 Luc大为降低 ;而且在一定剂量范围内 ,转染细胞的萤光素酶活性 (荧光值 )随rhBMP 2剂量增加而升高 ,并呈线性正相关。; 朱帮福卢兹凡陈苏民陈南春纪宗玲张斌柴玉波李毅; 关键词：骨形成蛋白基因表达萤光素酶

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