林丹
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：上海市儿童医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 克隆动物的端粒长度研究进展被引量：2
- 2009年
- 端粒是真核染色体分子末端的DNA区域,是由重复的DNA序列和端粒结合蛋白形成的DNA-蛋白复合物,对于染色体的复制和稳定起着重要作用。近年来研究结果表明,端粒长度的缩短与人类疾病和衰老密切相关。同时,体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)作为一种有效的无性生殖手段,越来越多的在科研和生产中得到应用。由于体细胞核移植通常采用体细胞作为核供体细胞,因而供体细胞的端粒长度、核移植后重组胚的端粒在胚胎早期是否会被修复、端粒长度是否有变化等问题,对于研究克隆动物的重编程、发育生物学都有着重要的指导意义。作者将对端粒的结构和端粒长度的机理研究、在克隆哺乳动物中对端粒长度的探索研究,以及近几年来关于端粒方面的一些研究进展加以阐述。
- 吕昆林丹黄英
- 关键词：端粒端粒长度哺乳动物体细胞核移植
- 应用实时荧光定量PCR测定牛体细胞端粒长度被引量：2
- 2010年
- 本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长度相对T/S为1.16±0.24,Southern印迹法测量端粒平均TRF值为16.99 kb±0.85 kb,两种方法获得的结果相关性分析R2=0.5612(P<0.01),因此实时荧光定量PCR是一种测定牛基因组端粒长度的可靠的方法。
- 吕昆林丹许淼朱怡文黄英
- 关键词：荧光定量聚合酶链式反应印迹法牛体细胞端粒长度
- 应用印迹法测定转基因克隆牛体细胞端粒长度
- 端粒(Telomere)作为真核染色体分子末端的DNA区域,是由重复的DNA序列和端粒结合蛋白形成的DNA-蛋白复合物,对于染色体的复制和稳定起着重要作用。研究还发现,端粒长度与再生、衰老和疾病(如肿瘤)密切相关;同时,...
- 吕昆林丹许淼朱怡文黄英
- 应用双色荧光原位杂交技术对转基因小鼠进行整合位点的染色体定位
- 2008年
- 目的建立一种高度灵敏、特异的双色荧光原位杂交（dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH）技术，对两种双阳性转基因小鼠外源基因进行整合位点的染色体定位。方法对一只整合单纯疱疹病毒胸苷嘧啶激酶（herpes simplex virus thymidine kinase, HSV-tk）／增强型绿色荧光蛋白（ enlmneed green fluorescence protein, eGFP）的转基因小鼠以及两只整合RNA干扰载体（ RNA interference, RNAi） 的β^654地中海贫血模型小鼠进行实验，脾脏细胞经培养后获得中期分裂相标本片，各加入适量生物素、地高辛标记探针混合液杂交，分别用罗丹明红色荧光抗体及FITC绿色荧光抗体进行D-FISH检测。结果两种转基因小鼠均能在同一个分裂相上同时检测到双色荧光信号。其中，HSV-tk／eGFP双阳性小鼠的分裂相上出现较强的绿色HSV-tk信号和红色eGFP信号，分别定位于染色体2E5-G3及8A2-A4；β^654／RNAi双阳性小鼠检测到红色β^654荧光信号及绿色RNAi荧光信号。经定位分析，β^654均整合在染色体7D3-E2，RNAi病毒载体则是随机整合，其中一只鼠主要整合在12B1位点，而另一只鼠主要整合在染色体1E2．3-1F、3A3两个位点。结论用自行制备的DNA探针建立了高度灵敏、特异的D-FISH技术，同时结合G显带对双阳性转基因小鼠进行染色体基因定位。该技术平台的建立对于转基因动物和基因治疗动物模型的研究具有非常重要的意义。
- 林丹龚秀丽李伟郭歆冰朱怡文黄英
- 关键词：转基因小鼠整合位点双色荧光原位杂交染色体定位
